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用RACE技术快速扩增五指山猪来源的PERV-3'LTR: 本文用cDNA末端快速扩增(RACE)技术,从五指山猪外周血淋巴细胞mRNA中扩增到PERV-3'LTR,并克隆入pGEM-Teasy载体,将阳性克隆进行序列测定和同源性分析。研究结论:成功扩增了我国五指山猪来源的PER...; 吕茂民谢放吴健敏章金刚; 关键词：反转录病毒五指山猪基因克隆; 文献传递

五指山猪内源性反转录病毒5'端非编码区的RACE扩增及其结构和调控元件分析: 目的获得五指山猪内源性反转录病毒5'端非编码区(5'UTR)cDNA,分析其一级结构和调控元件,为进一步研究其在PERV复制、转录中的调控机制奠定基础.方法采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)克隆来源于五指山猪的内源...; 吴健敏阳玉彪吕茂民谢放郭艳茹章金刚; 关键词：猪内源性反转录病毒; 文献传递

中国特有小型猪内源性反转录病毒囊膜基因的克隆及进化分析被引量：3: 2006年; 目的克隆分析中国特有小型猪来源的猪内源性反转录病毒（PERV）囊膜基因（env）。比较不同来源毒株的异同及系统进化关系。方法应用RT-PCR的方法分别从中国实验小型猪、巴马香猪及五指山小型猪外周血淋巴细胞中扩增PERV env基因，克隆入T载体后测序；随后以PCR方法对克隆PERV env基因进行分型检测；最后采用DNAsis及DNAstar软件对克隆的env基因和国外毒株env基因进行同源性及系统进化进行分析比较。结果本试验所克隆的3株PERV env基因长度分别为1983bp、1986bp及1968bp，分别编码661、662和656个氨基酸，分型检测均为PERV-A亚型。同源性分析表明：国内这3个分离株env基因与国外来源于不同宿主的PERV-A、B、C亚型env基因的同源性分别在92．8～96．5％、69．4～73．4％及77．5％～80．8％之间。结论 PERV中国株的进化与A、B、C亚型分类有关，与宿主、分布地域关系不大，且PERV—A亚型与C亚型的亲源关系更近于B亚型。; 吴健敏吕茂民陈凤莲谢放潘汉世阳玉彪马玲章金刚; 关键词：猪内源性反转录病毒囊膜基因

五指山猪内源性反转录病毒5’端非编码区的RACE扩增及其结构和调控元件分析: 目的获得五指山猪内源性反转录病毒5’端非编码区(5’UTR)cDNA,分析其一级结构和调控元件,为进一步研究其在PERV复制、转录中的调控机制奠定基础。方法采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)克隆来源于五指山猪的内源...; 吴健敏阳玉彪吕茂民谢放郭艳茹章金刚; 关键词：克隆顺式作用元件; 文献传递

用RACE技术快速扩增五指山猪来源的猪内源性反转录病毒3'LTR被引量：1: 2004年; 测定我国小型猪来源的猪内源性反转录病毒(PERV)3'LTR,以便于PERV全基因的克隆和分析。用cDNA末端快速扩增(RACE)技术,从五指山猪外周血淋巴细胞mRNA中扩增到PERV-3'LTR,并克隆入pGEM-Teasy载体,将阳性克隆进行序列测定和同源性分析。测序结果显示该克隆3'端的尾部有一个由12个A组成的poly(A)信号;其R区与PERV-MSL的R区(约64bp)基本一致,同源性分析表明其与PERV-MSL的3'LTR具有81%的序列同源性。说明成功扩增了我国五指山猪来源的PERV-3'LTR,将有利于PERV全基因的克隆。; 吕茂民谢放吴健敏章金刚; 关键词：五指山猪猪内源性反转录病毒同源性分析

中国特有小型猪内源性反转录病毒囊膜基因的克隆及进化分析: 目的克隆分析中国特有小型猪来源的猪内源性反转录病毒(PERV)囊膜基因(env),比较不同来源毒株的异同及系统进化关系。方法应用RT-PCR的方法分别从中国实验小型猪、巴马香猪及五指山小型猪外周血淋巴细胞中扩增PERV ...; 吴健敏吕茂民谢放阳玉彪章金刚; 关键词：猪内源性反转录病毒囊膜基因

猪内源性反转录病毒5′端非编码区的克隆及结构分析被引量：4: 2005年; 通过五指山猪内源性反转录病毒5′端非编码区(5′UTR)cDNA的克隆,分析其一级结构和调控元件,为进一步研究其在PERV复制、转录中的调控机制奠定基础。本研究采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得全长约1035bp的PERV 5′UTR。通过NCBI公共数据库BLASTn序列进行同源性分析,并应用KEGG数据库对该转录调控区进行顺式作用元件定位分析,结果发现PERV 5′UTR与GenBank公布的部分PERV 5′UTR相比较,同源性在82.6~94.8%之间。一级结构分析发现PERV 5′UTR由U3、R、U5区、引物结合区(PBS)及前导序列组成,可能的核心启动子序列与具有增强子作用的39bp重复序列分别位于U3区的-67^+1与-97^-59区段。在5′UTR转录调控区(-428^+507)鉴定出31个有效的顺式作用元件位点,其中NF-Y、TBP、Oct-1、HSF、GATA-1和GATA-2等与PERV的转录、调控密切相关。; 吴健敏阳玉彪吕茂民谢放郭艳茹章金刚; 关键词：五指山猪顺式作用元件

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