许艳
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：复旦大学附属上海市公共卫生临床中心更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 麻风分枝杆菌热休克蛋白65的表达、纯化及其多克隆抗血清的制备
- 2011年
- 目的原核表达、纯化麻风分枝杆菌热休克蛋白65(Heat shock protein 65,HSP65),并制备其多克隆抗血清。方法以含hsp65基因的真核表达质粒pCMV4.65为模板,PCR扩增hsp65基因,克隆入pET-28a(+)载体,构建重组表达质粒pET-28a-hsp65,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经镍离子亲和层析柱纯化后免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗血清,Western blot分析重组蛋白的反应原性。结果重组表达质粒pET-28a-hsp65经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约65 000,表达量约占菌体总蛋白的30%,主要以包涵体形式表达;纯化的重组蛋白纯度可达95%,浓度约为1.0 mg/ml;制备的HSP65多克隆抗血清效价可达1∶12 800;重组蛋白具有良好的反应原性。结论已成功表达、纯化了麻风分枝杆菌重组HSP65蛋白,并制备了HSP65多克隆抗体,为进一步研究以HSP65为基础的亚单位疫苗和核酸疫苗奠定了基础。
- 吴娟范小勇曲勍马辉许艳罗玉萍Douglas B.Lowire
- 关键词：分枝杆菌麻风热休克蛋白65多克隆抗体
