薛剑
- 作品数：13 被引量：11H指数：2
- 供职机构：上海市胸科医院更多>>
- 发文基金：上海市基础研究重大（重点）项目上海市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学建筑科学更多>>
- 10个肺癌相关基因多重甲基化特异性PCR检测方法的建立
- 2012年
- 目的建立10个肺癌相关基因的多重甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)检测方法并运用于临床标本的检测。方法选取19例肺癌患者病灶组织标本,患者中男性16例,女性3例;平均年龄57.3岁。1例肺部良性病变患者组织标本为男性,年龄52岁。通过质粒构建及甲基化转移酶和亚硫酸盐修饰制备10个基因的甲基化和非甲基化标准品。通过选择甲基化特异性引物来识别甲基化模板,挑选10对甲基化特异性引物并平均分成2组,经最佳聚合酶及最佳退火温度的选择,建立多重甲基化特异性PCR体系,并应用于19例肺癌组织的检测,计算10个基因的甲基化率。结果在成功构建10个基因的甲基化和非甲基化标准品的基础上,建立了它们的多重甲基化特异性PCR检测方法。临床标本检测结果显示10个肺癌相关基因的甲基化率分别为p16INK4A 92%,H-cadherin 89%,E-cadherin和DAPK 76%,TIMP-3 63%,RARβ50%,MGMT 39%,RASSF1A 21%,GSTP1 11%,hMLH1 0%。2次实验结果重复性较好。结论这种分2组多重甲基化特异性PCR的方法能一次性检测10个基因甲基化状态,可以应用于临床标本的检测。
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- 关键词：甲基化肺癌
- 早期肺腺癌miRNA特异表达谱及其反转录引物和用途
- 本发明属于生物学和医学检验领域，涉及一种肿瘤生物标志物，具体涉及一种早期肺腺癌miRNA特异表达谱及其反转录引物和用途。所述早期肺腺癌miRNA特异表达谱包括上调表达的miR-103、miR-146a、miR-151、m...
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- 文献传递
- 基于悬浮点阵技术的新型EGFR基因突变检测方法的建立和应用被引量：3
- 2011年
- 目的构建基于悬浮点阵技术的新型表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的检测方法,检测并分析非小细胞肺癌(NSCLC)组织中EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)相关的EGFR基因突变状况。方法选取61例经影像学和病理学检查确诊的NSCLC患者作为研究对象,手术后留取新鲜肺癌组织,提取基因组DNA,采用多重聚合酶链式反应(PCR)对组织样本的EGFR基因18、19、20和21号外显子中包含8种高频突变位点的特异片段进行扩增,并经多重连接酶检测反应(LDR)以特异性探针对扩增片段中的突变进行连接,再基于悬浮点阵技术平台对连接产物进行检测,最后通过DNA测序对检测结果进行验证。结果在61例NSCLC组织样本中,运用PCR-LDR联合悬浮点阵技术共检出EGFR基因突变19例,突变率为31.1%,其中外显子19缺失突变E746-A750 del(1)、E746-A750 del(2)各1例,外显子20点突变T790M 1例,外显子21点突变L858R 14例、L861Q2例,经DNA测序验证完全正确。结论运用PCR-LDR联合悬浮点阵技术初步建立了一种新型的EGFR基因突变检测方法,能同时准确检测EGFR基因中的8种高频突变,具有高通量和高特异性的特点,有望用于NSCLC患者进入EGFR-TKI药物靶向治疗前的EGFR基因突变检测。
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- 关键词：表皮生长因子受体聚合酶链式反应非小细胞肺癌
- 液态芯片与PCR—LDR技术对K—ras基因分型初探被引量：1
- 2013年
- 目的采用基于液态芯片的K—ras基因分型检测方法分析非小细胞肺癌（NSCLC）组织样本中的K—ras基因突变水平，指导非小细胞肺癌患者个体化靶向治疗和预后评估。方法实验诊断技术研究方法。对液态芯片的K—ras基因分型检测方法进行灵敏度和重复性的评估。选取2011年11月至2012年2月上海市胸科医院的100例非小细胞肺癌患者新鲜组织样本，提取基因组DNA，通过采用PCR-连接酶检测反应（LDR）结合液态芯片技术，对待测样品K—ras基因2号外显子上12、13密码子上8个突变位点进行分析，并通过测序验证结果。结果液相芯片技术检测灵敏度为10％～20％，高于传统测序法的1％。平均CV值〈1％，表现出很好的重复性。从100例NSCLC患者组织样本中共检出5例突变，其中3例为Gly12Val突变，2例为Gly12Asp突变。结论基于液态芯片与PCR—LDR技术的K—ras基因分型检测方法检测通量高、灵敏度高、重复性好，是NSCLC患者个体化治疗及预后判断的K—ras基因突变分析的合理方法。
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- 关键词：连接酶链反应RAS
- 新型高通量肺癌相关基因甲基化检测方法的建立
- 目的 建立一种包含甲基化标准品的新型高通量肺癌相关基因的甲基化检测系统.方法 对7个肺癌相关基因的启动区进行克隆,用各基因的特异性引物对克隆到质粒中的各基因片段再次进行扩增,PCR产物用甲基化酶M.Sss I和亚硫酸盐处...
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- 流式荧光法检测CEA、CYFRA21-1和NSE的应用评价被引量：6
- 2014年
- 目的评价流式荧光法(FFA)在癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)检测中的应用价值。方法用FFA检测CEA、CYFRA21-1、NSE的精密度,确定FFA与电化学发光免疫分析法(ECLIA)检测3种标志物结果的相关性,建立两法3种标志物参考区间。对FFA检测CEA、CYFRA21-1和NSE准确性进行评价。结果 FFA检测CEA、CYFRA21-1、NSE批内变异系数(CV)均<6%,批间CV均<10%,检测CEA、CYFRA21-1和NSE的结果与ECLIA相关性良好(rCEA=0.974、rCYFRA21-1=0.929、rNSE=0.982)。以第95百分位数(P95)为参考区间上限,FFA:P95 CEA=3.62 ng/mL、P95 CYFRA21-1=2.44 ng/mL、P95 NSE=11.23 ng/mL;ECLIA法:P95 CEA=3.83 ng/mL、P95 CYFRA21-1=2.88 ng/mL、P95 NSE=14.85 ng/mL。以ECLIA为参考方法,FFA检测CEA、CYFRA21-1和NSE与该法的总符合率分别为95.1%、92.6%、93.7%。结论 FFA法检测CEA、CYFRA21-1和NSE准确性好,所需样本量少,可三种指标联合检测,检测速度快,成本低,有良好的应用价值。
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- 关键词：细胞角蛋白19片段神经元特异性烯醇化酶电化学发光免疫分析法
- 流式荧光法检测NSE正常参考值范围的研究
- 目的基于上海透景生命科技有限公司的神经元特异性烯醇化酶(NSE)定量检测试剂盒,建立流式荧光法检测NSE的正常参考值范围。方法采用流式荧光法检测176例临床血清样本的NSE水平,并与罗氏Elecsys电化学发光法检测结果...
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- 新型高通量肺癌相关基因甲基化检测方法的建立被引量：1
- 2010年
- 目的 建立一种包含甲基化标准品的新型高通量肺癌相关基因的甲基化检测系统.方法 2009年3-6月上海交通大学医学院附属胸科医院经病理学和影像学确认的非小细胞肺癌患者8例,其中男7例,女1例,平均年龄（57±11）岁,手术后留取肺癌组织及外周血.男性健康志愿者1名,年龄35岁,抽取外周血20 ml,用以分离单个核细胞提取DNA制备质粒.对7个肺癌相关基因的启动区进行克隆,用各基因的特异性引物对克隆到质粒中的各基因片段再次进行扩增,PCR产物用甲基化酶M.sss Ⅰ和亚硫酸盐处理.通过设计3＇末端CpGpCpG探针来识别甲基化模板,并经最佳连接酶、最佳退火温度及连接温度的选择,建立一套多重连接PCR体系,最后运用液相芯片平台对扩增的标准品和临床标本进行检测.利用甲基化特异性PCR检测新系统的可靠性.结果 成功的构建了7个基因的甲基化和非甲基化标准品,并建立了多重PCR偶联液相芯片的快速检测系统,p16INK4A、APC、DAPK、RARβ、RASSF1 A、MGMT和GSTP1甲基化标准品的荧光信号值分别为863、909、703、701、901、1 060和885,与非甲基化标准品区分明显.抽提8例患者的肺癌组织DNA,对其中检测出阳性频率较高的基因进行甲基化特异性PCR,产物电泳结果 与新建甲基化检测系统检测结果 完全一致.结论 本研究建立的新型检测系统能同时准确地检测7个基因甲基化状态,有望应用于临床标本的检测.
- 娄加陶薛剑吴传勇葛歆悦吴京姚见儿
- 关键词：肺肿瘤甲基化聚合酶链反应芯片分析技术
- 10个肺癌相关基因多重甲基化特异性PCR检测方法的建立
- 目的建立10个肺癌相关基因的多重甲基化特异性PCR检测方法并运用于临床标本的检测。方法通过质粒构建及甲基化转移酶和亚硫酸盐修饰制备10个基因的甲基化和非甲基化标准品。通过选择甲基化特异性引物来识别甲基化模板,挑选10对甲...
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- 文献传递
- 流式荧光发光法检测CEA、CYFRA21-1和NSE的应用评价
- 目的 基于流式荧光发光法检测血清CEA、CYFRA21-1 和NSE,并与电化学发光法检测结果进行比较和分析,以评价流式荧光发光法在CEA、CYFRA21-1 和NSE 检测中的应用.方法 采用流式荧光发光法检测174 ...
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