羊正纲
- 作品数：43 被引量：127H指数：7
- 供职机构：浙江大学医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省科技厅项目浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小片断干扰RNAs抑制HBV表面抗原的表达
- 本研究针对HBV S基因设计shDNA(small hair DNA)序列,通过荧光检测,放射免疫和半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测,发现特异的shRNA能有效抑制乙肝表面抗原表达.
- 羊正纲陈智
- 关键词：表面抗原乙型肝炎荧光检测放射免疫
- 文献传递
- 针对乙肝病毒基因的siRNA序列及其用途
- 本发明提供针对乙肝病毒基因的2条siRNA的cDNA靶序列，SEQ ID NO.1为anti-s siRNA1的核苷酸序列，SEQ ID NO.2为anti-s siRNA2的核苷酸序列。这2条siRNA分别和报告质粒p...
- 陈智羊正纲朱海红
- 文献传递
- HBV核心抗原EGFP融合蛋白表达质粒的构建及在Hep G_2细胞中的表达被引量：1
- 2005年
- 目的 探讨采用构建的质粒pHBc -EGFP转染HepG2 细胞 ,瞬时表达HBV核心抗原和增强型绿荧光蛋白的可行性。方法 克隆HBV核心抗原基因进入真核表达载体pEGFP -N1 中 ,脂质体法转染HepG2 细胞后在荧光显微镜下观察增强型绿荧光蛋白表达 ,并行RT -PCR及细胞免疫组化分析融合蛋白的表达。结果 重组pHBc -EGFP质粒可在HepG2 细胞内瞬时表达HBV核心抗原和增强型绿荧光蛋白融合蛋白。结论 pHBc -EGFP质粒构建成功 ,增强型绿荧光蛋白的表达可报告HBV核心抗原表达。
- 徐宁陈智姚航平羊正纲
- 关键词：乙型肝炎病毒
- RNA干扰抗HBV的体外实验研究
- 羊正纲
- 关键词：乙型肝炎病毒RNA干扰脂质体转染
- 苦参碱对人恶性黑素瘤细胞株侵袭能力及乙酰肝素酶mRNA表达的抑制作用被引量：19
- 2006年
- 目的:探讨苦参碱对人恶性黑素瘤细胞株A375的侵袭能力及其乙酰肝素酶mRNA表达的影响作用。方法:A375细胞体外培养,以0.125 mg/m、l0.25 mg/m l和0.5 mg/m l不同浓度苦参碱进行预处理48 h后,采用半定量RT-PCR检测各组培养细胞HPSE mRNA表达的变化,细胞黏附实验检测细胞黏附能力的改变,M atrigel侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果:和对照组比较,各浓度苦参碱处理组A375培养细胞HPSE mRNA的表达和细胞黏附侵袭能力均受到明显的抑制(P<0.01),其抑制效应与药物的浓度呈正相关(组间比较P<0.01)。结论:苦参碱可能通过下调A375细胞HPSE mRNA的表达而显著抑制细胞的黏附侵袭能力,其抑制作用呈剂量依赖性。
- 刘晓艳方红羊正纲滕理送阮黎明方德仁蒋筱凌
- 关键词：黑色素瘤苦参碱
- 针对乙肝病毒基因的siRNA序列及其用途
- 本发明提供针对乙肝病毒基因的2条siRNA的cDNA靶序列，SEQ ID NO.1为anti－s siRNA1的核苷酸序列，SEQ ID NO.2为anti－s siRNA2的核苷酸序列。这2条siRNA分别和报告质粒p...
- 陈智羊正纲朱海红
- 文献传递
- 2009—2018年度国家自然科学基金医学病原微生物与感染领域细菌相关项目申请与资助情况分析被引量：2
- 2019年
- 本文对2009—2018年度国家自然科学基金医学病原微生物与感染领域细菌相关项目申请与资助情况进行回顾和分析,介绍面上项目、青年科学基金和地区科学基金的申请数量、资助项目数量及资助率,并对申请代码、依托单位情况进行总结,进一步探讨医学病原微生物与感染领域细菌相关项目的特点及存在的问题。
- 翟爱霞翟爱霞窦豆张建业羊正纲闫章才
- 关键词：国家自然科学基金细菌
- tRNA^(val)-shRNA表达框在筛选HBV C基因小干扰RNA靶位中的应用被引量：6
- 2006年
- 目的:以tRNAval-shRNA表达框技术筛选高效的HBV C基因siRNA靶位。方法:针对HBV C基因序列设定5个siRNA靶位,以一步重叠延伸PCR技术生成含tRNAval启动子的shRNA表达框(SEC),分别与HBV C基因与EGFP融合表达质粒(pC-EGFP)共转染AD 293细胞,转染后48 h,流式细胞术检测融合基因荧光表达情况,半定量RT-PCR法检测HBV-C基因mRNA表达水平。以筛选的shRNA表达框转染hepG 2.2.15细胞,72 h后放免法检测细胞培养上清HbsA g、HbeA g水平,RT-PCR检测细胞HBV pgRNA水平。结果:共转染shRNA表达框能有效抑制融合表达质粒(pC-GFP)荧光强度和HBV C mRNA表达,其中SEC-492 i抑制效率最佳,而SEC-282 i相对较差。选定的492 i表达框(SEC-492 i)及282 ishRNA表达框(SEC-282 i),均呈剂量依赖性抑制hepG 2.2.15细胞HbeA g分泌和HBV pgRNA水平,其中SEC-492 i抑制HbeA g和HBV pgRNA水平明显优于SEC-282 i。结论:在选定的5个siRNA靶位中,以492 i靶位RNA i效率最高。tRNAval-shRNA表达框技术可用于抗HBV高效siRNA靶位的筛选,有进一步推广应用价值。
- 潘修成陈智倪勤羊正纲徐宁金晗英
- 关键词：乙型基因小干扰RNAHBVC基因
- 原发性肝癌组织中Kruppel样因子6基因的变异及其抗细胞增殖功能的改变被引量：10
- 2006年
- 目的初步探讨基因突变对Kruppel样因子6(KLF6)抗肝癌细胞增殖功能的影响及机制。方法以聚合酶链反应(PCR)扩增原发性肝癌及其癌旁组织KLF6基因外显子2序列,对扩增的PCR产物进行双向序列测定。构建野生型及突变型KLF6真核表达质粒并分别转染人肝癌细胞株HepG2,流式细胞仪及四甲基偶氮唑盐试验观察KLF6基因对细胞周期及细胞增殖活性的影响。以western blot技术检测外源KLF6 基因对HepG2细胞p21WAF1表达的影响。结果 23例原发性肝癌组织中2例(8.7％)出现KLF6基因突变, 其中1例导致氨基酸改变(W162G)。转染野生型KLF6的HepG2细胞G0～G1期所占细胞的比例明显增高,而转染突变型KLF6实验组G0～G1期细胞无显著增加。转染野生型KLF6对HepG2细胞生长的抑制率显著高于突变型KLF6实验组和空载体实验对照组。外源野生型KLF6基因能上调肝癌细胞p21WAF1表达,而突变型KLF6基因上调p21WAF1表达的能力较低。结论 KLF6基因突变可能在原发性肝癌发病机制中起到一定作用,但基因突变可能不是KLF6基因失活的主要原因。上调p21WAF1表达是KLF6基因抑制肝癌细胞增殖的重要途径。
- 潘修成陈智陈峰陈晓红周承羊正纲
- 关键词：基因肿瘤抑制肝细胞P21WAF1
- 小干扰RNA体外抑制HBV表面抗原融合基因的表达
- 目的:利用增强型绿荧光蛋白(EGFF)和小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体技术,初步建立一种行之有效且相对经济的验证siRNA 有效性的方法。方法:将HBV s 基因融合到EGFP 中...
- 羊正纲陈智倪勤徐宁潘修成金晗英李星仪
- 关键词：小干扰GFP体外抑制HBV
- 文献传递
