窦忠英
- 作品数：368 被引量：1,178H指数：17
- 供职机构：西北农林科技大学动物医学院国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生自动化与计算机技术更多>>
- 重组蛋白包涵体的研究进展被引量：13
- 2008年
- 在介绍包涵体形成原因、特性及利弊的基础上,重点阐述了包涵体的复性前准备、主要复性方法及提高复性效率的有效措施。
- 李军李军刘美杰李勇
- 关键词：包涵体去折叠蛋白质复性
- 胎猪胰腺干细胞扩增及诱导
- 2009年
- 目的寻找胰腺干细胞扩增方法，为研究糖尿病的细胞治疗提供种子细胞。方法无菌采集胎猪胰腺，经胰酶消化，以含10％血清的RPM11640培养基培养。细胞长满皿底85％时，用胰酶消化传代，传代5～6次后细胞活力下降，细胞大量死亡漂浮，留下少数贴壁的小圆细胞。将培养基中的血清浓度提高到15％，贴壁的小圆细胞能快速增殖并形成细胞克隆，4～6d便可融汇成单层。采用免疫组织化学方法对所获得的的细胞进行胰腺干细胞特征检测。结果经上述方法处理的细胞具有旺盛的增殖能力，可以连续传代，目前已传至64代。采用免疫组织化学检测细胞表达胰腺干细胞特征性标志物，胰肠同源域因子1（PDX-1）、葡萄糖转运子2（GLUT-2）、巢蛋白、波形蛋白；经诱导后细胞表达胰腺内分泌细胞的标志为胰高血糖素、胰岛素、生长抑素、胰多肽。结论通过该方法可以获得大规模扩增的胰腺干细胞，该细胞在体外诱导可分化形成胰腺内分泌部4种主要细胞。
- 王赟楚元奎杨春荣王华岩窦忠英
- 关键词：胰岛胰腺干细胞糖尿病免疫组织化学胎猪
- 给马类家畜输牛血的试验研究
- 1993年
- 按常规方法给试验骡、驴多次静脉输入牛全血,虽出现一定的输血反应,但很快停止消失,一切恢复正常。5匹传贫病马多次输牛血后,输血反应同上,其中3匹含铁细胞减少或消失,临床症状消失;2匹死亡。加用抗过敏药物,输牛全血临床抢救新生仔驹脓毒败血症3例(骡驹2例,马驹1例)痊愈,抢救新生骡驹溶血病3例,亦收到一定的效果。
- 窦忠英房胜利李长安孔培贞张长青刘少秀祁秀英
- 关键词：马类家畜输血牛血
- 人胚胎干细胞饲养层培养体系的建立被引量：2
- 2005年
- 目的建立人胚胎干细胞饲养层培养体系。方法以胎鼠和人胎儿为材料,以DMEM加15%FBS加0.1mM2ME为基础培养液,分别制备胎鼠和胎儿成纤维细胞饲养层。结果分别获得了传16代的胎鼠成纤维细胞和传7代的人胎儿成纤维细胞,建立了人胚胎干细胞饲养层的培养体系。结论胎鼠成纤维细胞和人胎儿成纤维细胞相比较,后者生长速度慢,且较易老化;胎鼠成纤维细胞饲养层更有利于人胚胎干细胞的生长;8～14d龄胎鼠最适宜制备人胚胎干细胞饲养层;在室温条件下,以0.2%胰酶加0.04%EDTA为消化液处理原代胎鼠组织块时间以15～20min为宜。
- 苗增民李松窦忠英
- 关键词：人胚胎干细胞饲养层成纤维细胞
- 牛-山羊异种克隆早期胚的分叶状线粒体被引量：1
- 2006年
- 敬晓棋雷安民窦忠英巩胜勇周勇
- 关键词：克隆胚山羊线粒体叶状发育情况
- 成年山羊皮肤干细胞体外克隆与诱导分化被引量：18
- 2003年
- 目的 探索山羊皮肤干细胞的分离方法与培养体系 ,为进一步研究皮肤干细胞增殖分化的分子机制打下基础。 方法 从成年关中奶山羊耳尖获取皮肤 ,用组织块培养法分离皮肤干细胞 ,碱性磷酸酶 (AL P)染色及体外分化实验鉴定 ,用条件培养基与细胞因子相结合行皮肤干细胞的体外诱导分化。 结果 山羊耳尖皮肤分离得到类干细胞集落并传 5代 ,细胞集落具有典型鸟巢状结构 ,AL P染色阳性 ,体外分化能形成类胚体。在细胞因子 (IGF- 1)及条件培养基的诱导下 ,所分离获取的皮肤干细胞能分化形成类毛囊 ,类星形胶质细胞及类成骨细胞。 结论 用组织块培养法可以获得多能性皮肤干细胞 ;在体外培养条件下不仅能进行定向分化 ,还能进行横向分化。
- 杨学义曹斌云冯秀亮马勇江窦忠英
- 关键词：皮肤干细胞细胞增殖细胞分化
- 山羊骨髓间充质干细胞生物学性能鉴定及诱导分化为心肌细胞的研究被引量：7
- 2005年
- 研究了关中奶山羊骨髓间充质干细胞的分离、培养和生物学特性,并在体外诱导分化为心肌细胞表型。结果表明,山羊MSCs具有很好增殖能力;能够耐受反复冷冻和解冻;表达细胞表面标志CD44、CD105、CD166,弱表达CD34、CD106,而不表达CD14、CD45。该类细胞用5-氮胞苷诱导分化后,能够表达心肌α-actin,并呈PAS染色阳性。
- 庞全海张慧茹华进联马勇江窦忠英
- 关键词：诱导分化干细胞生物学心肌细胞关中奶山羊5-氮胞苷细胞表型
- 从包涵体中纯化重组小鼠Nanog转录因子
- 2009年
- 利用BL21/pET-32a-Nanog表达菌株诱导表达Nanog融合蛋白,经破碎、高速离心、洗涤,获得Nanog蛋白粗制品,用8 moL/L尿素变性溶解Nanog融合蛋白,离心取上清,进行Histrap HP亲和层析纯化,复性,经SDS-PAGE和Western Blot鉴定得到了纯度为97%以上的重组小鼠Nanog蛋白。建立了一种可行的从包涵体中纯化重组小鼠Nanog蛋白的方法,为Nanog蛋白的活性检测及其基因表达调控机理的功能研究奠定基础。
- 李军李军李勇窦忠英
- 关键词：小鼠NANOG包涵体纯化
- 无透明带核移植技术被引量：4
- 2005年
- 近几年,虽然体细胞核移植研究取得了巨大的成就,但是基本上沿用Willadsen最初的方法——去核、注核、融合和激活。而且所获得的克隆动物往往会出现很多问题如器官发育异常等,其中的原因不清。因此,人们试图革新原有的核移植方法,并建立了新的核移植方法——无透明带核移植法,以期提高核移植的效率及解决核移植中存在的问题。现对无透明带核移植技术的两种方法——反向核移植法和手工核移植法以及单个胚胎培养系统进行介绍。
- 胡军和杨春荣窦忠英
- 关键词：体细胞核移植
- 小鼠ES细胞在不同饲养层上培养nanog基因的表达水平与生长行为的研究被引量：1
- 2005年
- 观察小鼠ES-D3细胞在MEF、新生牛睾丸支持细胞(nBTSCs)和新生兔睾丸支持细胞(nRTSCs)饲养层上生长4dnanog基因的表达水平和生长行为。RT-PCR分析显示,MEF饲养层上培养4d的ES-D3nanog基因含量高;nBTSC饲养层上培养nanog基因表达较低;而RTSC饲养层上培养nanog基因表达最低。结果显示:不同饲养层上的ES-D3细胞集落形态和培养4d分化程度有差异。在MEF饲养层上的ES-D3细胞培养4d,集落形态仍然很规则,细胞间紧密,集落表面少见大细胞,AKP染色强阳性。在nBTSC饲养层上的ES-D3细胞,集落界限清晰,AKP染色显示,集落大部分细胞呈阳性,少数的细胞集落为弱阳性,可见集落表面分散有较多的大细胞。在nRTSC饲养层上的饲养层上的ES-D3,集落隆起不明显,集落界限不清晰,大部分集落形态不太规则,AKP染色显示集落中部分细胞呈阳性,少数的细胞集落为全阴性,集落表面有较少的大细胞,集落周围有伸出的成纤维细胞。
- 庄淑珍董武子杨炜峰华进联窦忠英
- 关键词：NANOG基因饲养层ES细胞MEFAKP
