王战会 作品数:67 被引量:246 H指数:8 供职机构: 南方医科大学南方医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 中国博士后科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
重组乙型肝炎病毒P22^e基因在HepG2细胞中的表达 被引量:5 2006年 目的:利用pCDNA3.1+真核表达载体,建立了稳定表达乙型肝炎(HBV)P22e的HepG2细胞系,用以研究HBVP22e与乙型肝炎发病机制的关系.方法:以含1.2copiesHBV基因(adr亚型)p3.8II质粒为模板,PCR获得HBVP22ecDNA片段,分离插入通用T载体pMD18T中鉴定,然后装入真核表达型载体pCDNA3.1+中,脂质体转染HepG2细胞株,免疫组化鉴定细胞内表达,微粒子免疫检查培养上清中分泌抗原.结果:成功构建了真核表达载体pCDNA3.1+HBVP22e,并转染HepG2细胞,经多次传代培养鉴定,获得稳定表达HBVP22e的HepG2细胞系.结论:HBVP22e可在HepG2中表达. 刁志宏 张明霞 朱幼芙 何海棠 王战会 陈金军 侯金林关键词:基因重组 真核表达 中国广东地区乙型肝炎病毒基因亚型的分布 被引量:23 2006年 目的调查中国广东地区乙型肝炎病毒(HBV)基因型,主要是基因亚型的分布情况。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法以及序列测定法,对广东地区417例慢性HBV感染者血清进行研究。结果广东地区流行的HBV基因型主要为B型和C型,其中B型为Ba亚型,未发现Bj亚型的存在。C亚型有C1和C2两个亚型,其中C1占63%,C2占37%。结论广东地区流行的HBV基因型以Ba和C1亚型为主,C2亚型较少,Bj亚型极为罕见。 肖蕾 王雪刚 曾国兵 马世武 王战会 于乐成 侯金林 聂军关键词:乙型肝炎病毒 基因型 乙型肝炎病毒拉米夫定耐药株的重组逆转录病毒载体及其包装细胞系的建立 2007年 目的构建1.3拷贝乙型肝炎病毒(HBV)拉米夫定耐药株的重组逆转录病毒载体及其包装细胞系。方法在野毒株1.3拷贝HBV载体的基础上采用定点突变的方法将rtL180M,rtM204V位点突变,构建拉米夫定耐药病毒株,并通过PCR、限制性内切酶酶切,分别以正向和反向将野毒株和耐药株分别连接于逆转录病毒载体pLNCX2的相应酶切位点,构建成重组逆转录病毒载体,经双酶切及PCR扩增鉴定。重组载体转染包装细胞,筛选培养细胞克隆并进行病毒滴定。结果通过双酶切、PCR扩增、测序鉴定证实成功构建了1.3拷贝HBV拉米夫定耐药株的逆转录病毒载体。成功建立包装细胞系并测得病毒滴度均为1×105cuf/ml。结论含正向及反向1.3拷贝HBV拉米夫定耐药的重组逆转录病毒载体及其包装细胞系构建成功,可以用于拉米夫定耐药细胞模型研究。 林占洲 王战会 周彬 杨富强 余治健 侯金林关键词:乙型肝炎病毒 拉米夫定耐药 逆转录病毒载体 恩替卡韦治疗拉米夫定失效慢性乙型肝炎的临床观察 被引量:4 2008年 目的观察恩替卡韦(ETV)治疗拉米夫定失效慢性乙型肝炎(CHB)的病毒学应答和耐药情况。方法对接受口服ETV(1.0mg/d,治疗疗程>12个月,基线HBVDNA≥104拷贝/ml)治疗的拉米夫定失效的41例CHB患者进行临床随访,定期检测其血清HBVDNA定量、乙型肝炎病毒标志物、肝功能及耐药情况。耐药检测采用半巢式PCR,对PCR产物进行直接测序,测序结果与GenBank报道的HBV序列进行同源性比对以检测ETV的耐药变异位点。结果41例患者接受ETV1.0mg/d治疗12个月时,39%(16/41)的患者HBVDNA转阴(<103拷贝/ml),64%基线ALT水平异常的患者ALT水平恢复正常(<40U/L),2名(7.7%)HBeAg阳性患者分别在治疗第10、12个月时获得HBeAg血清学转换。1例患者发生了ETV基因型耐药变异,耐药位点为rtL180M+rtM204V+rtS202G,该患者的基线血清中可检测到拉米夫定耐药突变(rtL180M+rtM204V)。结论ETV(1.0mg/d)治疗拉米夫定失效CHB有效,但应警惕耐药变异的发生。 王程 陈金军 孙剑 王战会 侯金林关键词:拉米夫定 抗病毒药 E645R变异MXA蛋白抗HBV复制体外研究 2008年 目的研究E645R变异MXA蛋白抑制乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制活性。方法对pcDNA3.1-MXA重组质粒采用定点突变构建E645R变异MXA蛋白表达重组质粒pcDNA3.1-MXA-E645R。将pcDNA3.1-MXA(MXA组),pcDNA3.1-MXA-E645R(E645R组)和pcDNA3.1空质粒(对照组)分别与PU19-1.24HBV重组质粒按2∶1比例瞬时共转染HepG2细胞,转染3d后检测MXA蛋白表达和各组细胞上清HBsAg和HBeAg的量以及上清和细胞内HBVDNA水平。结果酶切和测序表明定点突变成功构建pcDNA3.1-MXA-E645R重组质粒;MXA、E645R转染组有较好的MXA蛋白表达。E645R组与MXA组HBsAg较对照组分别下降23%和20%(P>0.05),E645R组和MXA组HBeAg较对照组分别下降61%和66%(P<0.05)。E645R组与MXA组上清HBVDNA水平较对照组分别下降1.9个和2.2个log值,细胞内HBVDNA水平均下降1.7个log值。结论E645R变异MXA蛋白具有较好的抗HBV活性,E645R变异不影响MXA蛋白抑制HBV复制。 余治健 王战会 周元平 李晖 林占洲 侯金林关键词:MXA蛋白 HBV 一例慢性乙型肝炎病人YMDD突变及阿德福韦耐药突变的动态变化 2006年 患者男,32岁,HBsAg阳性4年余。应用拉米夫定100mg/d治疗近3年时出现YMDD突变;直接转换到阿德福韦10mg/d治疗,之后ALT、HBVDNA水平逐渐下降,但在阿德福韦治疗80周后出现病毒突破。不定期随访病人,采集的血清分别是拉米夫定转换为阿德福韦治疗的前2周,后12、24、60、80和84周。HBVDNA定量检测仪器为Roche公司Lightcycler;采用Qiagen公司的全血抽提核酸试剂盒抽提HBVDNA。第一轮PCR扩增引物为BSl和POL2;利用引物SS2和POL2进行第二轮扩增,产物用来直接测序或克隆。 陈金军 王战会 马世武 孙剑 侯金林关键词:YMDD突变 阿德福韦 耐药突变 肝炎病人 HBVDNA定量 HBSAG阳性 检测HBV DNA基因型的方法学探讨 被引量:6 1998年 迄今发表的HBVDNA全序列已有61株,根据其核苷酸序列的差异分为A~F6个基因型。我们利用PCR和限制性片段长度多态性分析技术,由慢性无症状HBV携带者血清扩增病毒S基因区,建立了新的分型方法;用此方法对广州地区61名慢性无症状携带者的HBVDNA进行分型,发现主要为B、C两种基因型。 朱冰 骆抗先 侯金林 卢桥生 王战会关键词:基因型 乙型肝炎病毒 HBV-DNA 实时荧光聚合酶链反应检测HBV基因型方法的建立和临床研究 被引量:16 2005年 目的建立实时荧光聚合酶链反应(PCR)检测乙型肝炎病毒(HBV)基因型方法并对检测的慢性乙型肝炎(CHB)患者基因型进行临床分析。方法根据GenBank中已发表的明确分型的143株HBV全序列,设计特异的组合引物探针,建立实时荧光PCR方法,检测128例慢性乙型肝炎患者基因型;同时检测HBVDNA、HBVM。结果(1)128例标本中B型检出率为20.3%(26/128),C型占71.9%(92/128),D型占7.8%(10/128);18株HBV克隆标本S基因测序结果与本分型法完全一致。(2)男性与女性的HBV基因型构成比无明显差异(P=0.561)。B型与C型比较,C基因型HBVDNA含量(P<0.05)和HBeAg阳性率(P<0.01)明显高于B基因型。基因型B具有更高的HBeAb水平(P<0.05)。结论(1)实时荧光聚合酶链反应HBV基因分型法能够简便、灵敏、快速、准确地鉴定HBV基因型。(2)HBV基因型主要以C型为主,其次为B型、D型。在CHB患者中,性别不是基因型构成差别的因素,C基因型易引起较重的肝脏病变,B型易发生免疫逃逸,致病情较轻。 沈建坤 周荣 李文凡 杨创国 王战会 邓永东 侯金林关键词:基因型 聚合酶链反应 实时荧光聚合酶链反应检测HBV基因型B~D方法的建立 被引量:6 2005年 目的建立实时荧光聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒(HBV)基因型B^D方法并验证其准确性。方法比较GenBank中已发表的明确分型的143株HBV全序列,设计特异的组合引物探针,应用实时荧光聚合酶链反应HBV基因分型法对兰州地区128例慢性乙型肝炎患者血清标本进行基因型B、C、D检测,并随机对检测的基因型各3株标本进行S基因测序验证。结果128例标本中B型检出率为20.3%(26/128),C型71.9%(92/128),D型7.8%(10/128);18株HBV克隆标本S基因测序结果与本分型法完全一致。结论实时荧光聚合酶链反应HBV基因分型法能够简便、灵敏、快速、准确地鉴定HBV基因型,适宜用于HBV基因型的大规模临床和流行病学调查。 沈建坤 周荣 王战会 白培盛 马世武 张克 侯金林关键词:基因型 实时荧光聚合酶链反应 K83A变异MxA蛋白抑制HBV复制体外研究 2008年 目的研究K83A变异MxA蛋白抑制HBV复制活性。方法将pcDNA3.1-MxA(wild-type)重组质粒(WT组)、pcDNA3.1-MxA-K83A重组质粒(K83A组)和pcDNA3.1空质粒(对照组)分别与pU19-1.24HBV重组质粒按2∶1比例瞬时共转染HepG2细胞,转染3d后western blot检测MxA蛋白表达,Abbott检测各组细胞上清HBsAg和HBeAg表达,定量PCR检测上清和细胞内HBV DNA水平,统计学分析结果。结果MxA、K83A组有较好的MxA蛋白表达;与对照组相比,K83A组和MxA组上清HBeAg分别下降73%和71%(P<0.05),上清HBV DNA水平分别下降2.22lg和2.11lg(P<0.01),细胞内HBV DNA水平下降1.89lg和1.78lg(P<0.01)。结论K83A变异不影响MxA蛋白抑制HBV复制活性。 余治健 彭劼 李晖 王战会 周元平 林占洲 侯金林关键词:乙肝病毒 转染