沈芳
- 作品数：10 被引量：44H指数：4
- 供职机构：阜阳市畜牧兽医局更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省科技支撑计划项目国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 移虫日龄对蜂王生长发育的影响被引量：9
- 2017年
- 移取1、2、3日龄工蜂幼虫进行人工育王,通过HPLC-MS的方法,分别测定4日龄蜂王幼虫体内保幼激素(JHⅢ)和9日龄蛹体内蜕皮激素(Ecd)的滴度,并通过形态学和解剖学的方法对不同移虫日龄培育的处女王的初生重、卵巢重、头重和卵巢管数进行比较分析,以研究不同移虫日龄对意大利蜂蜂王生长发育的影响。结果显示,不同移虫日龄所培育的蜂王幼虫4日龄JHⅢ和9日龄Ecd浓度均存在显著差异,且随着移虫日龄的增加,蜂王幼虫体内JHⅢ和Ecd含量均显著下降;不同移虫日龄所培育的处女王其初生重、卵巢重、头重及卵巢管数均存在显著差异,且随着移虫日龄的增加,蜂王的初生重、卵巢重和头重显著减轻,蜂王的卵巢管数显著减小;蜂王的初生重和卵巢管数成显著正相关关系,相关系数r=0.82。说明移虫日龄越小幼虫获得的生长条件越好,越有利于蜂王个体尤其是繁殖性状的发育,人工育王实践中应移取虫龄尽量小的幼虫。
- 庞倩沈芳殷玲吉挺
- 关键词：蜂王生长发育
- 卡尼鄂拉蜂zinc transporter 7-like基因表达水平变化研究
- 本研究旨在克隆卡尼鄂拉蜂锌转运蛋白-7相似基因(Zinc Transporter 7-like,ZnT-7-1ike),制备ZnT-7-1ike多克隆抗体,了解该基因在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的差异表达情况。运用RT-...
- 沈杰刘振国沈芳吉挺
- 关键词：克隆抗体制备
- 文献传递
- 蜂王浆对雌性大鼠生长发育的影响被引量：3
- 2015年
- 目的:探讨高剂量蜂王浆对雌性大鼠生长发育的影响。方法:实验组大鼠按3 g/(200 g·d)(以体质量计,下同)灌胃新鲜的蜂王浆溶液,对照组按3 mL/(200 g·d)灌胃生理盐水,4 周后,停止灌胃,继续饲养2 周。每两周解剖一批大鼠,称质量计算心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、子宫、卵巢脏器系数,用放射免疫技术检测血清雌二醇(estradiol,E2)、促卵泡素(follicle stimulating hormone,FSH)、促黄体素(luteinizing hormone,LH)、孕激素(progestrone,P)含量,实时定量聚合酶链式反应(real-timepolymerase chain reaction,real-time PCR)检测卵巢和子宫中雌激素受体α(estrogen receptor α,ERα)、雌激素受体β(estrogen receptor β,ERβ)、促卵泡素受体(follicle stimulating hormone receptor,FSHR)、促黄体素受体(luteinizing hormone recepter,LHR)、孕激素受体(progestrone receptor,PR)mRNA表达量。结果:灌胃2 周,实验组大鼠体质量、主要脏器系数、血清主要性激素含量及其卵巢和子宫中受体表达量与对照组相比均无显著差异;灌胃4 周,实验组大鼠体质量显著低于对照组,实验组血清E2显著高于对照组,实验组卵巢PR mRNA表达量显著高于对照组,实验组子宫中ERα、ERβ、PR mRNA表达量显著高于对照组。实验组与对照组脏器系数无显著差异;停止灌胃2 周后,实验组大鼠体质量、主要脏器系数、血清主要性激素含量与对照组相比均无显著差异,实验组卵巢中FSHR、ERβ、PR mRNA表达量显著高于对照组,实验组子宫中ERα、ERβ、FSHR和PR mRNA表达量显著高于对照组。结论:高剂量的蜂王浆在一定程度上影响雌性大鼠的生长发育。
- 沈芳刘振国沈杰吉挺
- 关键词：蜂王浆脏器系数激素激素受体
- 卡尼鄂拉蜂锌转运蛋白-7相似蛋白(ZnT-7-like)的基因克隆、抗体制备及差异表达
- 2013年
- 【目的】本研究旨在克隆卡尼鄂拉蜂Apis mellifera carnica锌转运蛋白-7相似蛋白(zinc transporter 7-like,ZnT-7-like)基因,制备ZnT-7-like多克隆抗体,了解该基因在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的差异表达情况。【方法】运用RT-PCR法从卡尼鄂拉蜂王浆腺总RNA中扩增ZnT-7-like基因,进行生物信息学分析,为避开跨膜结构的干扰,选择克隆其部分序列(273 bp)作为多肽免疫序列。将其亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,转入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中诱导表达获得融合蛋白,然后将融合蛋白纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,分别用间接ELISA和Western blot检测抗体的效价和特异性,最后采用实时荧光定量RT-PCR以及Western blot技术检测该基因在不同日龄成虫王浆腺中的相对表达量。【结果】克隆得到卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因,大小为1 065 bp。SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白成功表达;制备的多克隆抗体效价高达1∶64 000,且具有很高的特异性。ZnT-7-like在卡尼鄂拉蜂5个日龄成虫中的转录情况存在较大差异,表现为3日龄成虫中的表达量极显著高于其他日龄(P<0.01),12日龄表达量最低,其他日龄间表达量两两差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01);ZnT-7-like蛋白表达与转录水平基本一致。【结论】成功克隆了卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因,制备了兔抗蜂ZnT-7-like多克隆抗体,并在转录和翻译两个水平上测定了ZnT-7-like在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的相对表达量。这些结果为深入研究卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因的功能奠定了基础。
- 沈杰刘振国沈芳吉挺
- 关键词：王浆腺基因克隆抗体制备
- 卡尼鄂拉蜂zinc transporter 7-like基因的克隆及表达
- 沈杰刘振国沈芳吉挺
- 关键词：克隆纯化
- 中华蜜蜂OBP3基因的克隆、原核表达及组织表达谱被引量：13
- 2014年
- 【目的】气味结合蛋白质(odorant binding proteins,OBPs)参与气味分子的识别,在蜜蜂嗅觉中扮演重要的角色。本研究旨在克隆中华蜜蜂Apis cerana cerana OBP3基因,以制备多克隆抗体。【方法】运用RT-PCR技术从中华蜜蜂头部总RNA中扩增OBP3基因,将该基因亚克隆入原核表达载体pET-28a并转入大肠杆菌Escherichia coli Rosetta(DE3)中诱导表达获得融合蛋白质,融合蛋白质经纯化后免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,最后分别用间接ELISA和Western Blot检测抗体的效价和特异性,并采用荧光定量PCR检测OBP3基因在中蜂不同组织中的表达。【结果】克隆得到了中华蜜蜂OBP3基因AccOBP3(GenBank登录号KJ026357),大小为444 bp。SDS-PAGE结果显示融合蛋白成功表达。制备的多克隆抗体效价高于1∶40 000,且具有很高的特异性。荧光定量PCR结果表明,AccOBP3基因在腿部和触角中显著高表达(P<0.01),胸部中次之(P<0.01),头部和腹部中显著低表达,后两者表达量差异不显著(P>0.05)。【结论】OBP3基因在中蜂触角有高转录活性。本研究实现了中蜂OBP3基因的原核表达,并制备了兔抗中蜂OBP3多克隆抗体,为深入研究中蜂OBP3基因的功能奠定基础。
- 吉挺沈芳梁勤吴黎明刘振国罗岳雄
- 关键词：中华蜜蜂基因克隆原核表达组织表达谱抗体制备
- 基于线粒体COⅡ基因序列的中华蜜蜂地理种群的遗传多样性研究被引量：9
- 2015年
- 通过分析我国20个不同地理种群中蜂线粒体COⅡ序列的变异,对中华蜜蜂群体遗传分化程度遗传多样性进行全面研究。结果表明：COⅡ基因部分序列中共发现16个变异位点和18个单倍型,核苷酸差异数的平均值为0.939,核苷酸分歧度（Dxy）在0.1%-0.965%之间变化,核苷酸遗传距离为-0.007%-1.489%。总种群的Fst为0.4978,差异均极显著（P〈0.001）。研究结果显示种群总体单倍型多样性较为丰富,种群间核苷酸分歧度差异很大。20个东方蜜蜂不同地理种群间存在显著的遗传分化。
- 刘振国吉挺沈芳梁勤罗岳雄
- 关键词：中华蜜蜂地理种群遗传分化
- 太湖地区与皖南地区中华蜜蜂微卫星DNA遗传多样性分析被引量：6
- 2014年
- 利用筛选后的12对荧光标记微卫星引物,研究太湖地区与皖南山区中华蜜蜂(以下简称中蜂)间的遗传多样性并分析其遗传分化。研究检测判定了60个中蜂个体的基因型,计算2个群体的优势等位基因频率(Pi)、期望杂合度(He)、多态信息含量(PIC)、群体内近交系数(Fis),并分析中蜂群体内与群体间的遗传变异,采取配对试验均数差异t检验比较太湖中蜂与皖南中蜂群体的遗传差异。结果表明,太湖地区与皖南山区2个中蜂群体间的Pi、He、PIC、Fis差异均不显著(Pi=0.356>0.05,PHe=0.391>0.05,PPIC=0.260>0.05,PFis=0.428>0.05)。可见,太湖地区与皖南地区两地中蜂群体存在一定的遗传多样性,但遗传分化程度不大。本研究结果对江苏与安徽两地中华蜜蜂品种的选育和保护也具有一定的指导意义。
- 吉挺沈芳孟祥金王帅李文明
- 关键词：中华蜜蜂微卫星DNA标记
- 蜜蜂级型分化研究的进展被引量：4
- 2013年
- 级型分化是蜜蜂生物学研究的基础。本研究总结了前人在蜜蜂级型分化的研究进展:营养与级型分化的关系;激素与级型分化的关系;DNA甲基化与级型分化的关系;基因组和蛋白质组的差异表达与级型分化的关系;蜂房大小和组蛋白去乙酰酶与级型分化的关系。这些研究结果表明:蜜蜂的级型分化的调节是一个非常复杂的过程,是很多因素共同调节的结果。据此提出关于蜜蜂级型分化研究存在的一些问题,并对以后的研究进行了展望。
- 沈芳殷玲刘振国沈杰吉挺
- 关键词：级型分化营养激素DNA甲基化
- 卡尼鄂拉蜂工蜂咽下腺解剖形态学和超微结构研究被引量：1
- 2014年
- 为了分析卡尼鄂拉蜂(Apis mellifera carnica)工蜂咽下腺发育的不同阶段解剖形态和超微结构变化规律,探讨咽下腺在工蜂分泌王浆过程中的细胞学机制,运用扫描电镜和透射电镜方法比较分析5个不同日龄内勤蜂(3、6、9、12、16日龄)和3个不同阶段越冬蜂(越冬阶段、春繁阶段、淘汰阶段)工蜂小囊发育饱满程度和细胞超微结构。结果表明,3日龄工蜂咽下腺小囊发育尚未完全,而线粒体、内质网等细胞器已经出现;9日龄工蜂咽下腺小囊直径极显著大于其他日龄内勤蜂工蜂(P<0.01),发育最为饱满,内质网、核糖体、导管等细胞器成分也最为丰富;春繁阶段越冬蜂工蜂咽下腺小囊直径极显著大于其他阶段越冬蜂(P<0.01),与9日龄工蜂相比差异不显著(P>0.05),但细胞器数量较9日龄有所下降;淘汰阶段越冬蜂和16日龄工蜂咽下腺细胞出现崩解现象。说明卡蜂咽下腺小囊总体发育较为迟缓;伴随蜂王浆分泌,内勤蜂和越冬蜂咽下腺小囊发育均呈现"饱满—萎缩"的发育规律;多个细胞器参与蜂王浆的合成和分泌,细胞器丰富程度反映出工蜂泌浆能力的高低。
- 吉挺沈芳刘振国
- 关键词：咽下腺扫描电镜透射电镜
