汤永永
- 作品数：18 被引量：16H指数：3
- 供职机构：解放军第307医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金“首都临床特色应用研究”专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 脐带全层源间充质干细胞分离培养及向成软骨细胞分化的实验研究被引量：1
- 2012年
- 目的从人脐带全层中分离培养间充质干细胞(MSCs),并进行成软骨诱导分化,为组织工程软骨和软骨损伤后修复提供种子细胞。方法采用胶原酶消化法从脐带全层中分离培养间充质干细胞,显微镜下观察细胞形态,细胞计数法绘制细胞生长曲线,采用流式细胞仪检测细胞周期及细胞表型,采用微团细胞培养在软骨诱导液中向软骨细胞分化,阿尔辛蓝及甲苯胺蓝染色检测细胞分化情况,RT-PCR法检测诱导后细胞表达聚集蛋白聚糖(ACAN)基因情况。结果人脐带全层来源的MSCs呈成纤维样形态漩涡状贴壁生长,细胞高表达HLA-I类分子、CD73、CD90、CD166及CD105,不表达CD34、CD45、CD14、CD31、CD80、CD86及HLA-DR。细胞诱导分化21d后,阿尔辛兰及甲苯胺蓝染色阳性;RT-PCR检测诱导后的细胞表达ACAN,而对照组无表达。结论人脐带全层为成体MSCs提供一种新而方便的来源,人脐带间充质干细胞(hucMSCs)体外培养能够向软骨细胞分化。
- 扈江伟张颢徐曼汤永永王军盛红霞杨在亮张斌陈虎
- 关键词：脐带间充质干细胞成软骨细胞
- 基于CFSE染色的小鼠淋巴细胞体内示踪方法的建立被引量：3
- 2011年
- 目的确定CFSE标记小鼠淋巴细胞的条件,建立简单快速、稳定可行的淋巴细胞体内示踪方法。方法利用流式细胞术分别检测不同浓度CFSE、不同悬浮溶液(1640培养基、PBS溶液)对小鼠淋巴细胞标记效果的影响,确定合适的标记条件;输注同品系CFSE标记的小鼠淋巴细胞,于不同时间点检测受鼠主要脏器内CFSE+细胞在淋巴细胞中的比例,并确定供鼠细胞的注射剂量;按照合适的注射剂量分别在注射后不同时间点测定供鼠细胞在受鼠体内的分布,考察本方法的稳定性及阳性信号的持续时间。结果 PBS组CFSE+细胞平均荧光强度分别为596、793、1123、1596、1737,明显高于1640培养基组(P<0.05);1640培养基组CFSE+细胞死亡率分别为8.7%、8.4%、8.6%、9.0%(P>0.05),而PBS组CFSE+细胞死亡率随着CFSE终浓度的上升而增加(P<0.05);按照不同剂量输注同品系淋巴细胞24h后,在受鼠各组织中检测到CFSE+细胞;每只小鼠尾静脉注射5×106个CFSE+淋巴细胞后,到d63仍可在组织中检测到阳性信号细胞。结论以PBS作为孵育液、CFSE终浓度选择10μmol/L对小鼠淋巴细胞标记、注射剂量为细胞5×106个/只,可使CFSE+细胞信号在同系小鼠体内持续2个月。
- 汤永永唐颖张玉华段文元赵敬湘魏广智张秀媛李鹏飞穆思媛王字玲
- 关键词：CFSE淋巴细胞流式细胞术细胞标记
- 体外连续传代培养脐带间充质干细胞染色体核型的稳定性被引量：3
- 2012年
- 目的分析不同代次人脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)的染色体核型,初步评价UC-MSCs在体外连续传代培养过程中染色体结构的稳定性。方法采用胶原酶消化法分离UC-MSCs,贴壁培养传代,通过细胞形态、免疫表型及多向分化潜能等生物学特性进行鉴定,利用G显带分析第3、5、7代细胞的染色体核型。结果染色体核型分析显示,第3、5、7代UC-MSCs为正常二倍体核型,G显带未见染色体结构异常。UC-MSCs呈成纤维样形态生长,高表达CD73、CD90、CD105,不表达CD34、CD45、CD40、CD80、CD86、CD154、HLA-DR;在特定的体外诱导条件下可以向骨、脂肪、软骨分化。结论 UC-MSCs在体外连续传代培养7代以内染色体结构稳定,为临床应用UC-MSCs的安全性提供了遗传学方面的实验依据。
- 王军徐曼盛宏霞孔维霞扈江伟廖丽汤永永宁红梅张斌陈虎
- 关键词：间充质干细胞脐带核型连续传代
- 淋巴细胞输注体内示踪方法研究
- 目的确定小鼠淋巴细胞CFSE标记条件、输注剂量及体内分布研究的方法。方法利用流式细胞术分别检测1640培养基与PBS溶液作为孵育液对不同浓度CFSE标记小鼠淋巴细胞的效率、荧光强度、标记后细胞存活的影响,确定合适的孵育液...
- 汤永永段文元赵敬湘魏广智王宇玲
- 舒尼替尼抑制小鼠骨髓来源树突状细胞表面PD-L1和PD-L2的表达被引量：2
- 2015年
- 目的观察小鼠髓源性树突状细胞(DC)在舒尼替尼刺激下,其表面程序性死亡分子1配体1(PD-L1)和PD-L2的表达变化。方法取小鼠骨髓细胞,对照组加入二甲基亚砜,实验组分别加入(100、200、300)ng/m L舒尼替尼,刺激48 h,用流式细胞术检测DC表面PD-L1和PD-L2的表达水平。结果与对照组相比,实验组中成熟DC(m DC)和总DC(包括m DC和im DC)表面PD-L1的表达水平显著降低;表达PD-L1的未成熟DC(im DC)、m DC和DC百分比均显著降低,表达PD-L2的m DC百分比显著降低;表达PD-L2的DC百分比在100 ng/m L、300 ng/m L舒尼替尼组中显著降低。结论舒尼替尼可显著降低小鼠DC表面PD-L1、PD-L2的表达。
- 赵飞龙麦海星董金凯李学超汤永永陈立军张斌
- 关键词：舒尼替尼树突状细胞
- 淋巴细胞输注体内示踪方法研究
- 2010年
- 汤永永段文元赵敬湘魏广智王字玲
- 关键词：细胞输注示踪CFSE小鼠淋巴细胞荧光强度
- 人脐带间充质干细胞无血清培养体系的实验研究
- 目的：对两种商业化的人脐带间充质干细胞无血清培养基进行了实验研究，并优化了培养体系。方法：利用两种无血清培养基对人脐带间充质干细胞进行原代分离，并以1×104/cm2的接种密度连续传代培养至第5代。考察各代次细胞形态及增...
- 汤永永盛宏霞徐曼高冬格陈虎张斌
- 关键词：人脐带间充质干细胞细胞形态
- 文献传递
- 一种分离培养内皮克隆形成细胞的方法
- 本发明涉及一种分离培养内皮克隆形成细胞的方法，具体涉及一种从脐带中分离得到内皮克隆形成细胞的方法，其包括以下步骤：(1)用消化酶消化脐静脉血管内膜；(2)冲洗消化后的脐静脉，收集冲洗液；(3)取冲洗液进行细胞培养，得到内...
- 陈虎张颢张斌扈江伟汤永永
- 文献传递
- 人脐带间充质干细胞修复大鼠放射复合皮肤损伤及其体外致瘤性被引量：3
- 2014年
- 背景:许多学者已经通过实验证实了间充质干细胞对于放射损伤具有明显的修复作用。目的:初步研究人脐带间充质干细胞促进放射复合皮肤损伤修复的机制及其体外是否具有致瘤性。方法:取SD大鼠15只,随机分3组(n=5),用直线加速器产生的β射线(40 Gy)照射大鼠右臀部2.5 cm×2.0 cm的区域,内做一直径约1.5 cm的圆形伤口。在制作大鼠损伤模型后12 h,分别经尾静脉注入5.0×106,1.0×107和2.0×107个人脐带间充质干细胞,腹腔注入荧光素(20 mg/kg),使用IVIS活体成像系统示踪人脐带间充质干细胞在大鼠体内分布。用软琼脂克隆形成实验观察人脐带间充质干细胞形成集落的能力。结果与结论:活体成像实验表明,人脐带间充质干细胞经尾静脉注射后主要在肺脏中积聚。注射2.0×107个人脐带间充质干细胞组大鼠损伤部位出现了细胞积聚;而注射5.0×106个和1.0×107个人脐带间充质干细胞组大鼠损伤部位始终未见荧光信号。体外软琼脂克隆形成实验表明,人脐带间充质干细胞组在软琼脂上均未形成集落,而hela细胞阳性对照组可见明显集落形成。以上结果表明人脐带间充质干细胞可以通过局部迁移促进放射复合皮肤损伤修复,体外实验显示其在短期内不具有致瘤性。
- 苏仲奕杨在亮汤永永扈江伟盛宏霞徐曼张斌陈虎
- 关键词：干细胞人脐带间充质干细胞活体成像
- 血小板输注对肿瘤生长及免疫调节作用
- 目的初步探讨血小板输注对小鼠肿瘤生长及机体免疫功能的影响。方法将2×105的小鼠黑色素瘤细胞B16F10尾静脉接种于4-5周龄C57BL/6雄性小鼠,建立实验性肺转移模型。实验分成3组:对照组,即不输血小板;自体血小板输...
- 赵敬湘宋直钰魏广智汤永永王宇玲
