李继洋
- 作品数：19 被引量：64H指数：4
- 供职机构：新疆农业大学农学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国科学院西部之光基金新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 拟南芥ROP2与GGB蛋白互作的分析被引量：1
- 2020年
- 为了阐明拟南芥ROP蛋白家族成员ROP2与蛋白异戊二烯化中I型香叶酰基的β亚基GGB的互作关系,本研究先后采用酵母双杂交和三杂交技术分析了两者之间的相互作用。结果表明,ROP2与GGB之间在酵母细胞中并没有发生相互作用。我们又采用双分子荧光互补(BiFC)技术在植物体内再次验证两者之间的相互作用。重新构建了一套带多克隆位点的常规BiFC重组表达载体,基于这套BiFC载体,进行了验证分析。结果表明,实验组在本氏烟草的表皮细胞中发现了黄色荧光信号,并且信号定位在细胞膜上,而阴性对照组未发现荧光信号,说明GGB蛋白与ROP2蛋白在植物体内存在相互作用,并且这种相互作用发生在细胞膜上。本研究结果为进一步揭示ROP2的生化调控机制奠定了前期基础。
- 杨迷胡燕李继洋李月刘超代培红刘晓东
- 关键词：ROP2
- 雌二醇诱导的ABA2基因表达载体的构建及功能鉴定
- 2016年
- 为了对拟南芥(Arabidopsis thaliana)ABA2基因在种子发育和萌发过程中的功能进行鉴定,本研究引入了一个基于雌二醇的化学诱导表达载体系统(pER8)。采用PCR方法从拟南芥中克隆ABA2基因,并与GUS基因融合,构建pER8-ABA2-GUS表达载体,转化野生型拟南芥,获得的转基因阳性苗,用GUS染色和半定量RTPCR分析。结果显示,克隆的ABA2基因大小为872bp,pER8-ABA2-GUS表达载体构建成功;GUS染色结果表明,GUS基因明显受到雌二醇的诱导,并且受到不同浓度及诱导时间的影响;经半定量RT-PCR检测发现ABA2基因也明显受到雌二醇的诱导。构建的ABA2-GUS融合基因能够被雌二醇有效诱导表达。
- 胡芹华靳芹李继洋刘晓东代培红
- 关键词：雌二醇脱落酸种子休眠
- 棉花U3和U6启动子在CRISPR/Cas9基因组编辑体系中的功能鉴定被引量：2
- 2019年
- 【目的】对已克隆的海岛棉U3和U6启动子进行功能鉴定,为构建棉花CRISPR/Cas9多位点基因编辑技术体系提供更多可用的U3和U6启动子。【方法】分别构建以GbU3-2P和GbU6-7P为启动子驱动sg RNA,以抗旱负调控基因GGB为靶序列的CRISPR/Cas9基因编辑载体,然后在新海16的棉花叶片原生质体中进行功能鉴定。通过Polymerase chain reaction方法富集构建好的CRISPR/Cas9基因编辑载体的核心片段,并利用PEG瞬时转化法将核心片段转入原生质体中。提取转化后的原生质体基因组DNA,采用酶切/Polymerase chain reaction法分析棉花GGB基因的突变情况并测序验证。最后绘制靶基因突变的频率分布图来计算该CRISPR/Cas9系统的编辑效率和确认突变的真实性。【结果】靶基因测序结果显示靶标位点序列突变的类型全部为碱基替换。【结论】以GbU3-2P和GbU6-7P为启动子的CRISPR/Cas9基因编辑体系可以成功地定点编辑棉花GGB基因的序列,引起基因突变。
- 藏旭阳代培红李继洋蒲艳顾爱星刘晓东
- 关键词：棉花原生质体
- 番茄CRISPR/Cas9抗双生病毒系统的快速验证分析
- 2021年
- 双生病毒是一类全世界范围内普遍存在的单链环状DNA病毒,其中菜豆金色花叶病毒属的病毒种类数量最多,危害最大。近年来,CRISPR/Cas9基因组编辑技术快速发展,已被用于植物抗病毒工程中。然而,CRISPR/Cas9系统中并不是所有的靶向序列都能成功完成基因组编辑,进而实现抗病毒的效果。本研究通过病毒基因组序列比对分析发现菜豆金色花叶病毒属各类病毒基因组上存在一个高度保守位点,位于复制起始蛋白(Rep)基因中。以该保守序列作为CRISPR/Cas9系统的靶序列,通过瞬时转化的方法,在本式烟草中快速验证该病毒靶序列的抗病毒效果。结果显示,本研究成功构建了针对双生病毒基因组的编辑系统,通过瞬时转化烟草后有效地抑制了病毒的积累,验证了该靶序列抗病毒的有效性,为后续基于CRISPR/Cas9基因组编辑技术在稳定转化番茄上实现对双生病毒的广谱抗性奠定基础。
- 张琬琦刘超代培红李继洋雷建峰李月刘晓东
- 关键词：番茄双生病毒抗病
- 一步快速检测甜瓜多种病毒的试剂盒及其快速检测方法
- 一步快速检测甜瓜多种病毒的试剂盒及其快速检测方法，它涉及一种快速检测甜瓜病毒病的试剂盒及其快速检测方法。它解决了现有甜瓜病毒病多重RT-PCR检测技术可同时检测的甜瓜病毒病种类少的问题。一步快速检测甜瓜多种病毒的试剂盒中...
- 玉山江·麦麦提杨渡韩盛李继洋丁新华吐尔逊·阿合买提何丹米日古丽·马木提
- 不同截短U3启动子在棉花中的功能分析被引量：3
- 2016年
- 从海岛棉中克隆了2种GbU3-2P、GbU3-3P启动子,对它们进行2种长度截短,长度分别为436、245 bp和384、233 bp,同时构建了4个相应启动子驱动GUS的融合植物表达载体。利用农杆菌真空渗透转化法将4个GbU3Ps∷GUS-sg RNA-P1300植物表达载体分别转染棉花胚性愈伤组织。经GUS组织化学染色显示:克隆得到的2种截短大小的GbU3-2P和GbU3-3P启动子均能驱动GUS基因在棉花愈伤组织中表达,棉花愈伤组织被染成蓝色,但颜色深浅没有显著差异。本研究表明,同一GbU3启动子截短后,较短的启动子和较长的启动子具有相同的转录活性。这为构建棉花CRISPR/Cas9基因组编辑载体系统提供了更多理想的启动子。
- 雷建峰徐新霞代培红李继洋张巨松刘晓东
- 关键词：棉花真空渗透愈伤组织
- 一步快速检测甜瓜多种病毒的试剂盒及其快速检测方法
- 一步快速检测甜瓜多种病毒的试剂盒及其快速检测方法，它涉及一种快速检测甜瓜病毒病的试剂盒及其快速检测方法。它解决了现有甜瓜病毒病多重RT‑PCR检测技术可同时检测的甜瓜病毒病种类少的问题。一步快速检测甜瓜多种病毒的试剂盒中...
- 玉山江·麦麦提韩盛杨渡木巴热克·阿尤普李继洋丁新华吐尔逊·阿合买提阿布都克尤木·卡德尔买买提吐尔逊·阿布拉努尔孜亚·亚力买买提
- 文献传递
- 基于PCR方法对载体pBluescript Ⅱ SK(＋)及pCAMB Ⅰ A1300的定点突变被引量：1
- 2016年
- 运用PCR定点突变技术对载体p BluescriptⅡSK(+)以及植物表达载体p CAMBⅠA1300多克隆位点内相关的酶切位点进行改造,为运用CRISPR/Cas9基因编辑载体在构建敲除体系时提供更多便捷可用的酶切位点。通过酶切鉴定以及测序表明,成功将p BluescriptⅡSK(+)载体多克隆位点内XhoⅠ、EcoRⅤ、SmaⅠ、SacⅡ4个酶切位点,分别改造为NheⅠ、MfeⅠ、NsiⅠ、PacⅠ;将p CAMBⅠA1300植物表达载体多克隆位点内的SacⅠ、SalⅠ以2个酶切位点分别改造为NsiⅠ、PacⅠ,为今后构建CRISPR/Cas9基因组编辑载体及对植物功能基因进行精准定位研究奠定一定的理论基础。
- 蒲艳刘超林琪李继洋刘晓东
- 关键词：定点突变PCR
- 侵染新疆甜瓜的黄瓜花叶病毒衣壳蛋白的克隆及其序列分析被引量：2
- 2015年
- 利用同源克隆的方法,扩增获得了新疆16个地区CMV病毒分离物CP蛋白基因全长序列,16个地区CMV病毒分离物CP蛋白基因全长约1 100 bp,最大开放阅读框介于630~690 bp,编码约210个氨基酸,蛋白质大小约25 k D。序列比对发现16个地区CMV病毒核酸序列的3’末端非编码区保守性较低,编码区及其5’端序列保守性较高,氨基酸序列的两端均存在不同数量的变异位点,根据CMV病毒同源性比对结果,16个地区病毒均属于同一CMV亚组。通过核酸序列构建的分子进化树分析发现,本研究分离获得的新疆16个地区CMV病毒衣壳蛋白基因序列则存在较高同源性且不同地区病毒分离物间相对遗传距离差异较小,16个地区与国内外15个地区病毒分离物相比均存在较大差异,统计分析显示,新疆CMV分离物组内核酸序列相对遗传距离差异不显著,相比参考序列,其差异则极显著,这一结果与聚类分析结果能够得到相互印证。分析认为,不同地区CMV病毒CP蛋白基因虽然与外来地区病毒基因存在较大差异,但由于本研究分离的新疆16个地区CMV病毒衣壳蛋白基因序列存在较高同源性且病毒因受不同理化条件的影响往往存在不同程度的变异率,因此认为,分离获得的新疆16个地区CMV病毒可能受地理位置、气候等因素的影响,其基因组中存在异于其他地区不同程度的变异趋势与类型,导致相应蛋白质稳定性也随之发生变化,从而更好的适应在新疆甜瓜植株上的侵染和定殖。
- 李继洋何丹杨渡韩盛托乎提.艾买提玉山江.麦麦提
- 关键词：CMV克隆
- 番茄U6启动子的克隆及CRISPR/Cas9基因编辑体系的建立被引量：16
- 2018年
- 【目的】从番茄中克隆高效转录的SlU6启动子,构建CRISPR/Cas9基因编辑载体,并在番茄中建立CRISPR/Cas9系统,为番茄功能基因组学和分子育种研究提供技术基础。【方法】采用PCR方法从‘中蔬四号’番茄品种中克隆4种SlU6启动子,利用Transfer PCR方法分别对4个启动子进行两种不同长度的截短,分别构建8个截短的SlU6启动子驱动GUS的植物融合表达载体。利用农杆菌瞬时转化法分别转染番茄叶片,通过GUS染色筛选出在番茄叶片中转录活性较高的SlU6-2启动子。采用DNA重组技术构建以SlU6-2为启动子驱动sg RNA,以番茄白粉病相关基因MLO1和EDR1为靶序列的CRISPR/Cas9基因组编辑载体。载体构建成功后,采用PEG法转化番茄原生质体,提取基因组DNA,采用酶切/PCR法分析内源基因突变情况;采用测序法分析内源基因突变的类型。利用突变位点频率分布图来验证番茄内源启动子在番茄CRISPR/Cas9系统中的有效性。【结果】经过两轮PCR,共获得4种8个不同长度的番茄U6启动子,其长度分别是452、202、448、206、433、190、448和218 bp,启动子序列比对分析发现番茄U6启动子与拟南芥U6启动子一样,也含有比较保守的两个元件,USE和TATA框。成功构建了8个SlU6启动子分别驱动GUS的植物融合表达载体。番茄叶片染色结果显示转化后的番茄叶片均被染成蓝色,表明克隆的番茄8个SlU6启动子均具有转录活性。选择SlU6-2P4为启动子驱动sg RNA,成功构建番茄白粉病相关基因MLO1和EDR1为靶序列的CRISPR/Cas9基因组编辑载体,验证结果表明番茄内源启动子SlU6-2P4能有效地驱动sg RNA的转录,并成功实现对番茄内源基因的编辑。内源基因突变的类型都为碱基替换,突变热点仅存在于内源基因靶序列区。【结论】成功克隆了4种在番茄叶片中高效转录的SlU6启动子;基于SlU6-2启动子的CRISPR/Cas9基因组编辑载体,在番茄中成功实现对内源基因
- 蒲艳刘超李继洋阿尔祖古丽.塔什胡燕刘晓东
- 关键词：克隆番茄
