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方玉珍: 作品数：95 被引量：165H指数：7; 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划国际科技合作与交流专项项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>

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切流式超滤技术及其在病毒学研究中的应用被引量：1: 1997年; 切流式超滤技术及其在病毒学研究中的应用王永录张永光方玉珍蒋守田（中国农业科学院兰州兽医研究所７３００４６）超滤（ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）是借助于超滤膜或其他超滤装置对生物大分子物质进行分离、纯化及浓缩的一种技术。这一技术以物理方法对大分子物质...; 王永录张永光方玉珍蒋守田; 关键词：超滤技术病毒学纯化

一株猪德尔塔病毒致弱毒株PDCoV CH/XJYN-P240/2016及其应用: 本发明提供了一株猪德尔塔病毒致弱毒株PDCoV CH/XJYN/2016‑P240及其应用，属于生物制品技术领域。本发明提供了一株猪德尔塔病毒致弱毒株PDCoV CH/XJYN‑P240/2016，保藏编号为CGMCC ...; 刘新生张莉萍王永录方玉珍周鹏张永光于瑞明潘丽张中旺郭慧琛

口蹄疫病毒A型AF/72株衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及鉴定被引量：1: 2015年; 通过限制性酶切位点将P12A和3C基因插入到带有双启动子(Pp10和PPH)的杆状病毒表达载体p Fast BacTMDual,转化E.coli DH10感受态细胞进行蓝白斑筛选,将鉴定正确的重组杆状病毒质粒转染Sf9细胞后收获重组杆状病毒r Bac-Dual-P12A3C,通过间接免疫荧光(IFA)和蛋白质印迹(Western-blot)检测衣壳蛋白的表达。IFA结果表明表达产物能够被A型FMDV猪抗阳性血清所识别,鉴定正确并具有良好反应原性。Western-blot检测到81 k D(P12A)、57 k D(VP0+VP3)、47 k D(VP3+VP1)、33 k D(VP0)和24 k D(VP1/VP3)5条蛋白条带,与预期相符。该研究为进一步研究A型口蹄疫病毒空衣壳的体外组装提供了试验依据。; 张庆勋刘新生方玉珍王永录张永光; 关键词：口蹄疫病毒衣壳蛋白

A型口蹄疫病毒真核表达载体的构建及其在BHK-21细胞中的表达被引量：2: 2013年; 为了构建A型口蹄疫重组表达质粒,并鉴定其在BHK-21细胞中的表达效果及免疫活性,通过设计引物及酶切位点,获得A型口蹄疫毒株AF/72的P1,2A及3C编码区的目的基因片段,利用设计的BamHⅠ及XbaⅠ酶切位点,定向将片段克隆于真核表达载体pcDNA3.1(+),经筛选、鉴定及序列分析后,将重组阳性质粒pcDNA3.1/P12A3C转染BHK-21细胞,通过双抗体夹心ELISA方法、间接免疫荧光标记方法及电镜透射法,检测细胞中表达的蛋白。结果表明:目的片段正确克隆到pcDNA3.1真核表达载体上,转染BHK-21细胞后,几种方法都能够检测表达蛋白。由此得出结论,构建的A型pcDNA3.1/P12A3C重组质粒能够在BHK-21细胞中正确表达目的蛋白并能组装成病毒空衣壳,表达蛋白具有良好的免疫活性,为进一步研究该质粒的动物免疫试验奠定了基础。; 胡文发张永光王永录张攀唐华方玉珍蒋守田吕建亮周鹏张中旺刘新生潘丽; 关键词：口蹄疫病毒 BHK-21细胞电镜

牛O型A型口蹄疫双价灭活疫苗研究──—A型毒种的选择被引量：5: 1995年; 收集保藏的６株口蹄疫（ＦＭＤ）Ａ型牛源强毒，适应乳鼠５代，转适８ＨＫ—２１细胞单层１０代，用弗氏完全佐剂制成疫苗免疫豚鼠。综合分析其对实验动物及制苗细胞的适应性、病毒感染性滴度、豚鼠抗强毒攻击的免疫原性、血清中和抗体应答的抗原广谱杜表明，在６株毒中ＡＦ／７２具有更好的适应性，病毒滴度高，免疫原性好，抗原谱广。; 张永光刘在新方玉珍蒋守田魏怀录王永录况乾惕; 关键词：口蹄疫灭活疫苗疫苗

口蹄疫病毒AF72株3D聚合酶的三维结构模拟和功能分析被引量：7: 2008年; 为了研究口蹄疫病毒(FMDV)3D聚合酶的结构和功能,以A型FMDV AF72株RNA为模板,反转录并扩增目的基因,将PCR纯化产物与pGEM-T Easy载体连接并转化JM109菌株,对经凝胶电泳、PCR和EcoRⅠ酶切法鉴定为阳性的重组质粒进行测序,并与GenBank中登录的其他4株FMDV完整参考序列进行比较,以确定AF72株3D聚合酶的核苷酸和氨基酸序列的保守区域,然后利用同源建模的方法建立AF72株3D聚合酶的三维结构。结果显示,3D聚合酶含有孔状活性区域。拉马钱德兰图证明,构建的3D聚合酶的空间结构是合理的。; 张昱王永录张永光潘丽方玉珍刘力宽蒋守田吕建亮张中旺张淑刚李正丰杜进鑫; 关键词：口蹄疫病毒活性位点

Asia 1型口蹄疫病毒多抗原表位真核表达质粒的构建及表达被引量：1: 2013年; 为了构建Asia 1型口蹄疫病毒多抗原表位真核表达质粒,采用多表位基因串联策略,合成包括口蹄疫病毒T细胞和B细胞表位基因的基因片段F,该基因片段由结构蛋白VP1上的2个B细胞表位(VP1135-159aa、VP1194-211aa)基因、非结构蛋白3A和3D上的T细胞表位(3A21-35aa、3D795-803aa)基因组成。利用限制性内切酶HindⅢ、XbaⅠ将基因片段F克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)。经酶切鉴定、序列分析正确后,利用LipofectamineTM2000将阳性重组质粒pc-F转染至BHK-21细胞。Western-blot和IFA分析结果显示,所表达的蛋白大小约25.4ku,能够与Asia 1型口蹄疫病毒标准兔抗血清发生特异性反应,证实所表达的蛋白具有较好的反应原性。结果表明,Asia 1型口蹄疫病毒多抗原表位真核表达质粒pc-F构建成功,且能在BHK-21细胞中正确表达。; 张攀张永光王永录潘丽胡文发唐华方玉珍蒋守田吕建亮周鹏张中旺刘新生; 关键词：ASIA BHK-21细胞

口蹄疫O/China/99毒株在不同宿主系传代的3A和VP1基因变异研究被引量：4: 2004年; 利用RT-PCR法扩增了经不同宿主系(乳鼠、BHK21细胞、PK15细胞)连传不同代次的口蹄疫O/China/99毒株的3A和VP1基因,并进行了核苷酸和氨基酸序列分析。结果表明,该毒株经不同宿主系传至90代后,VP1基因未发生大的变异,主要抗原位点也较稳定;而非结构蛋白3A基因却在不同宿主和代次发生突变缺失;经BHK21细胞传代后未发生缺失;经PK15细胞传代,在70～90代之间在第254～313位出现缺失;经乳鼠传代,在60～70代之间在第265～300位发生缺失,并在以后的90代毒中仍在此位缺失。这与代表性猪源流行毒O/YUN/TAW/97和O/HKN/21/70的3A基因在第276～305位发生缺失有相同之处。; 张永光吕建亮王永录方玉珍蒋守田张维德刘湘涛潘丽刘力宽裴仉福; 关键词：VP1基因毒株非结构蛋白3 传代代次口蹄疫

高浓度口蹄疫病毒抗原的稀释试验: 2004年; 用预备试验初选的 4种稀释剂a、b、c、d ,对经浓缩培养法繁殖的牛、猪O型口蹄疫病毒进行稀释 ,使其与普通毒 (对照 )浓度相当。然后将其与普通毒一起在不同温度下放置不同时间后 ,测定TCID50 ,并对测定结果进行方差分析和多重比较。结果显示 ,4种稀释剂稀释的病毒TCID50 存在显著差异 ;a和b稀释的病毒TCID50 之间无显著差异 ,但均显著高于c和d稀释的病毒TCID50 ;a和b稀释的病毒与普通对照毒的TCID50 也无显著差异。表明 ,a和b均可用于稀释口蹄疫病毒抗原 ,考虑到成本 ,宜选用b。; 方玉珍王永录张永光蒋守田张维德; 关键词：口蹄疫病毒稀释剂

一种猪简易固定器: 本实用新型公开了一种猪简易固定器，其目的在于临时快速提供一种能够有效控制猪的行动，使其保持一定姿势，有利于兽医工作人员对猪进行体检，治疗以及采集血液，本实用新型所述固定器包括拉环、拉杆、拉绳和手柄，所述拉绳一端穿过所述拉...; 林彤常惠芸邵军军赵付荣潘丽周鹏刘新生王永录方玉珍吕建亮张杰陈浩泰丁耀忠张中旺张永光; 文献传递

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