承龙飞
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：南京工业大学生物与制药工程学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划江苏省普通高校研究生科研创新计划项目更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 耐有机溶剂蛋白酶WQ9-2的克隆及其在枯草杆菌体系中的高效表达
- 由于非水相中生物催化的诸多优势，促进了耐有机溶剂酶类的研究和发展。然而多数耐有机溶剂微生物产酶量较低，限制了这类高性能的耐有机溶剂蛋白酶的使用，为了进一步开发并拓宽这类酶类的应用，基因工程的方法是一种有效的手段。本实验室...
- 承龙飞
- 关键词：生物化工菌株筛选发酵工艺
- 耐有机溶剂蛋白酶WQ9-2在枯草芽孢杆菌中的高效表达及产酶条件优化
- 目前,酶作为高性能生物催化剂在工业催化领域越来越受到重视,而随着有机相中酶催化这一领域的开发和发展,对耐有机溶剂酶的研究逐渐成为研究热点.然而大多数耐有机溶剂微生物产酶能力有限,因此利用基因工程技术对目标酶进行克隆表达,...
- 承龙飞何冰芳
- 关键词：枯草芽孢杆菌
- 蜡样芽胞杆菌蛋白酶的克隆及在枯草芽胞杆菌系统中的高效表达被引量：2
- 2015年
- 基于来源于Bacillus cereus WQ9-2的耐有机溶剂蛋白酶WQ的液相色谱-双质谱(LC-MS-MS)分析结果,设计引物,克隆耐有机溶剂蛋白酶WQ的基因,测序分析表明该蛋白酶的开放阅读框(ORF)大小为1 701 bp,编码566个氨基酸,其中含有信号肽(28个氨基酸)、前肽(220个氨基酸)及成熟肽序列(含954 bp编码318个氨基酸),相对分子质量约为3.7×104。将不带自身信号肽的蛋白酶基因apr WQ插入穿梭质粒p MA5中,构建了表达载体p MA5/apr WQ。该表达载体导入枯草芽胞杆菌WB600中获得阳性重组子WB600-p MA5/apr WQ,通过优化培养基成分以及培养条件,重组子发酵产蛋白酶体积酶活达到17 400 U/m L,约为高产野生菌产酶量的5倍。重组蛋白酶在多种有机溶剂(体积分数为50%)中表现出了良好的耐受性,验证了重组菌表达的蛋白酶与来源于B.cereus WQ9-2的耐有机溶剂蛋白酶性质一致,该耐有机溶剂蛋白酶的高效表达为进一步发挥其高效生物催化作用等实际应用奠定了基础。
- 承龙飞朱富成刘可可何冰芳
- 关键词：枯草芽胞杆菌发酵优化
- 耐有机溶剂蛋白酶产生菌Bacillus cereus WQ9-2发酵条件及酶学性质
- 2012年
- 以蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus WQ9-2为产耐有机溶剂蛋白酶的出发菌株,对其产酶条件进行优化并初步研究了其酶学性质。在单因素实验基础上,通过中心复合实验确定了产酶的最佳发酵条件为酵母粉8 g/L,葡萄糖17 g/L,KH2PO40.5 g/L,无水MgSO40.3 g/L,CaCl20.5 g/L,NaCl 1.0 g/L;pH 7.5。实验中发现采用低温发酵能大大缩短菌体产酶周期;通过优化发酵时间由最初84 h缩短到48 h,最高比酶活为3 921 U/mL。金属离子螯合剂1,10-菲罗啉(1,10-phenanthroline)、乙二胺四乙酸(EDTA)对该酶有较强的抑制作用,表明该酶可能为金属蛋白酶;Ca2+对该酶的活力及热稳定性有显著提高作用。
- 许家兴李振东承龙飞何冰芳
- 关键词：BACILLUSCEREUS酶学性质
