徐广贤
- 作品数：146 被引量：304H指数：9
- 供职机构：宁夏医科大学临床医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学文化科学更多>>
- 牛分枝杆菌溶血磷脂酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
- 2010年
- 为研究牛分枝杆菌(M.bovis)溶血磷脂酶基因在致病机理中的作用,本研究构建了表达M.bovis的溶血酶(LIP)基因的重组质粒pET30a-LIP,经IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,SDS-PAGE分析表明,重组蛋白表达量占菌体总蛋白的20%;该蛋白经电洗脱纯化后,纯度达95%以上;免疫印迹实验表明,原核表达的蛋白可与兔抗牛分枝杆菌多克隆抗体结合,具特异的免疫反应性。
- 徐广贤周晶李娟贾浩王玉炯
- 关键词：牛分枝杆菌原核表达免疫印迹蛋白纯化
- 一种艰难梭菌谷氨酸脱氢酶的纳米抗体、编码序列及其筛选方法和应用
- 本发明提供了一种艰难梭菌谷氨酸脱氢酶的纳米抗体、编码序列及其筛选方法和应用，属于免疫学技术领域。本发明提供了艰难梭菌谷氨酸脱氢酶的纳米抗体的氨基酸序列。采用噬菌体展示技术，将带有恒定区特定基因序列插入到噬菌体编码外壳蛋白...
- 徐广贤方媛郭乐潘俊斐蒋丹屈昱良
- 一种幽门螺旋杆菌四价毒力因子多表位疫苗及其制备方法
- 本发明提供一种可针对幽门螺旋杆菌四种关键毒力因子的多表位疫苗，其活性是一条多肽，主要由尿素酶A和B亚基、细胞毒素相关蛋白A、空泡毒素相关蛋白A的优势Th和B细胞抗原表位或区段及中性粒细胞激活蛋白构成。本发明通过基因合成和...
- 刘昆梅郭乐汤锋廖国玲徐广贤刘宏鹏
- 微小分子RNA-508-5p作为抗肿瘤标志物的用途
- 本发明提供一种miRNA-508-5p对肝癌和胃癌细胞株新陈代谢的调控作用，很可能成为预防与治疗肿瘤的标志物。越来越多的证据表明，microRNA可作为一种癌基因或抑癌基因，参与调控多种癌症的发生和发展过程。本发明通过构...
- 徐广贤魏军张爱君白静
- OPN siRNA慢病毒载体的构建及其对大肠癌细胞增殖的抑制作用被引量：4
- 2014年
- 目的构建OPN-siRNA的慢病毒载体,探讨其对结肠癌SW480细胞增殖的调节作用。方法设计合成针对OPN的siRNA序列,退火形成双链DNA并克隆到pSicoR质粒后,包装重组慢病毒。应用Real-time PCR及Western blot检测病毒刺激SW480细胞后OPN的mRNA和蛋白的表达水平,应用MTT法检测慢病毒对SW480细胞增殖的调节作用。结果成功构建了携带OPN-siRNA的重组慢病毒。该重组慢病毒可使SW480细胞内OPN的mRNA和蛋白的表达降低,LV-siRNA-OPN慢病毒对SW480细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.05)。结论成功构建的LVsiRNA-OPN慢病毒可以有效抑制SW480细胞内OPN的mRNA和蛋白表达,并抑制SW480细胞的增殖。
- 邢译文白静范维宁刘鑫周林林徐广贤
- 关键词：OPNSIRNA慢病毒SW480细胞
- miR-1247-5p对Smad2基因的靶向调控作用
- 2016年
- 目的利用miR-1247-5p过表达模拟物mimics,研究miR-1247-5p对TGF-β信号通路中关键蛋白Smad2的靶向调控作用。方法合成模拟miR-1247-5p过表达的模拟物mimics,及抑制miR-1247-5p表达的抑制物inhibitors;同时构建与miR-1247-5p互补靶基因Smad2的3'非翻译区,将其克隆到线性化的Report荧光报告载体中。将测序鉴定阳性的report-Smad2 3'-UTR重组质粒,与miR-1247-5p的mimics/inhibitors共转染至HEK-293T细胞,通过relative luciferase activity实验验证靶向关系,并通过Western blot实验进一步检测Smad2蛋白表达水平。结果成功构建report-Smad2 3'-UTR重组质粒,Western blot实验表明转染miR-1247-5p mimics组中Smad2蛋白表达下调(P<0.05);而转染miR-1247-5p inhibitors组中,Smad2蛋白表达上调(P<0.05)。结论证实miR-1247-5p直接靶向TGF-β信号通路中关键蛋白Smad2的表达,在蛋白水平对其进行调控,为进一步研究miRNA在细胞通路中的调控作用提供了依据。
- 张议心王利新徐广贤杨丽赵瑾郭文伟刘新兰
- 关键词：TGF-Β信号通路SMAD2基因肿瘤
- 狐狸败血型大肠杆菌病的诊治
- 1999年
- １９９７年秋末冬初，内蒙古阿拉善左旗某狐狸养殖场的狐狸突然发病并死亡，经流行病学调查、病理剖检和实验室检验，确诊为大肠埃希氏菌感染所致。１诊断方法１．１流行病学该场共饲养３００只狐狸，从１９９７年１０月３０日发病，至１１月４日送检，仅４ｄ死亡１０多只...
- 徐广贤张国玲王守智
- 关键词：狐狸败血型大肠杆菌
- 牛分枝杆菌哺乳动物细胞侵袭蛋白4E的原核表达、纯化及其圆二色谱分析被引量：2
- 2007年
- 为了阐明牛分枝杆菌侵入宿主细胞和在肺泡巨噬细胞长期存活的机理,本研究以牛分枝杆菌的DNA为模板,通过PCR的方法扩增克隆牛分枝杆菌哺乳动物细胞侵袭蛋白4E(Mammalian cell-entry protein 4E,mce4 E)基因,将所扩增基因克隆于原核表达载体pET30a(+)并进行测序,结果显示该基因与GenBank上所公布的牛分枝杆菌和人分枝杆菌mce4 E基因同源性为100%。将重组表达载体转入宿主菌BL21进行诱导表达,表达蛋白经SDS-PAGE分析和Western-blotting免疫印迹鉴定,结果证明目的蛋白获得高效表达,表达量占菌体总量的53.3%,分子量约为45 ku;利用Ni-NTA琼脂糖柱对表达蛋白进行纯化,纯化率大于95%;纯化的蛋白经过透析复性、圆二色谱(CD)测定,结果表明重组蛋白为典型的α螺旋型结构,经Jascow32软件分析计算,mce4E蛋白含有39.1%的α螺旋,60.9%的无规卷曲,无β-折叠和转角,为进一步开展牛分枝杆菌致病机理的研究和寻找新的药物作用靶位点奠定了基础。
- 徐广贤赵德明周向梅尹晓敏杨建民
- 关键词：牛分枝杆菌原核表达
- 结核分枝杆菌分泌蛋白MPB64小鼠单克隆抗体制备、纯化及鉴定被引量：2
- 2015年
- 目的应用细胞融合技术制备和鉴定抗MPB64单克隆抗体。方法采用重组目的蛋白p ET32aMPB64(680bp)为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞融合。间接ELISA法筛选分泌抗体的杂交瘤细胞,采用有限稀释方法对所有筛选确认的阳性细胞株进行亚克隆,杂交瘤细胞诱导小鼠产生腹水,再用蛋白G亲和层析法纯化抗体,通过间接ELISA、Western Blot鉴定该单克隆抗体。结果通过杂交瘤技术获得10株可稳定分泌抗MPB64单克隆抗体的细胞株。以命名的"1A3"单抗细胞株进行腹水制备,经鉴定腹水效价>1∶720000,经纯化抗体效价约为1∶720000,抗体浓度2.15mg·m L-1。结论成功制备和获得了抗MPB64单克隆抗体的细胞株,为MPB64单克隆抗体制备和鉴定奠定了基础。
- 马荣陈振黑龙赵志军徐广贤戈朝晖
- 关键词：结核分枝杆菌MPB64单克隆抗体杂交瘤技术
- 小鼠miRNA-203慢病毒过表达载体的构建及病毒包装与滴度测定被引量：3
- 2011年
- 目的构建microRNA-203(miR-203)过表达慢病毒载体,并对其进行病毒包装、鉴定与滴度测定。方法利用化学合成miR-203发夹前体结构RNA(small hairpin RNAs,hRNA),并将其克隆入pSicoR质粒中,经双酶切及测序鉴定;利用脂质体将鉴定的阳性重组pSicoR-miR-203表达载体、pCMV-VSV-G和pCMV-dR8.91三个质粒共转染到HEK-293T细胞,分别在48h和72h收获上清,包装产生慢病毒。将所得病毒悬液梯度稀释后感染293T细胞,检测病毒滴度,并将制备的病毒颗粒尾静脉注射Balb/c小鼠,检测miR-203在小鼠体内的表达与分布情况。结果酶切及测序结果证明成功构建了pSicoR-miR-203重组质粒,并成功的包装成慢病毒,病毒滴度为5×107 TU.mL-1。重组病毒在Balb/c小鼠肝脏、脾脏、肺脏、肾脏均有表达。结论成功构建miR-203慢病毒表达载体,获得高效表达miR-203的慢病毒颗粒,为miR-203靶基因筛选及其功能的研究奠定了基础。
- 黄学兰徐广贤贾伟王妍柏董辉魏军
- 关键词：慢病毒绿色荧光蛋白
