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两株芽孢杆菌的鉴定及淀粉酶基因的克隆被引量：4: 2011年; 对分离得到的两个菌株(B.H和B.M)进行鉴定,并对它们在芽孢杆菌培养基和淀粉富集培养基上的形态进行观察,通过对其16S rDNA序列的分析,构建系统进化树,确定B.H为枯草芽孢杆菌,B.M为解淀粉芽孢杆菌。根据已报道的枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌淀粉酶基因保守区域设计引物,分别以两个菌株的基因组DNA为模板,采用PCR扩增的方法成功获得两个淀粉酶基因,其编码区的长度分别为1 434 bp和1 563 bp,为该菌株的进一步利用开发提供了数据支持。; 胡苗清姚明泽张耀华付月君梁爱华; 关键词：枯草芽孢杆菌解淀粉芽孢杆菌 RDNA 淀粉酶基因

大肠杆菌植酸酶在毕赤酵母中的表达与纯化被引量：7: 2012年; 为探讨植酸酶的结构与功能,研究了来源于大肠杆菌的植酸酶基因在酵母中的表达和纯化条件.将含有大肠杆菌植酸酶基因的毕赤酵母工程菌在不同甲醇浓度和不同诱导时间下培养,检测植酸酶的表达情况.结果表明:诱导培养基中一次性添加2.5%的甲醇,诱导96 h后,蛋白浓度达到1.36 mg mL-1,酶活力达到6 530 U mL-1;将在毕赤酵母中表达的植酸酶粗酶液经过硫酸铵盐析、Resource S柱和Superdex-75三步纯化,得到单峰纯的蛋白,比活力为137 280 Umg-1.用圆二色谱分析纯化后的蛋白在pH 5.0和8.0环境中的结构变化,结果显示pH 8.0环境使大肠杆菌植酸酶发生了变性.; 张耀华姚明泽卢文亮梁爱华; 关键词：毕赤酵母圆二色谱

大豆根部两株产植酸酶菌的分离鉴定及中性植酸酶基因的克隆被引量：2: 2013年; 从大豆根部土壤中筛选到两株产植酸酶的细菌菌株,对其进行形态学分析和16S rRNA鉴定,确定两个菌株为枯草芽孢杆菌,并对其植酸酶的酶学性质进行初步研究。通过PCR方法从该芽孢杆菌基因组中克隆了植酸酶基因phy(ycD)和phy(ycE)。与NCBI已报道的植酸酶序列分别通过BLASTn和BLASTp程序进行比对,确定phy(ycD)和phy(ycE)属于β-螺旋桨植酸酶家族。两个植酸酶核酸序列同源性达到98%。两个基因的开放阅读框(ORF)均为1149个核苷酸,编码382个氨基酸。N端26个氨基酸为信号肽序列,整个酶分子有5个氨基酸不同,运用SWI SS-MODEL服务器进行同源建模,使用Spdbv软件对其三维结构评估,这5个氨基酸中的4个分别处在酶分子不同二级结构部位。β-螺旋桨植酸酶基因phy(ycD)和phy(ycE)的获得,为进一步探讨中性植酸酶的结构与功能以及该类植酸酶的产业化应用提供实验数据。; 姚明泽卢文亮张耀华梁爱华; 关键词：植酸酶基因酶学性质

大肠杆菌植酸酶的定点突变及其热稳定性: 植酸酶是酸性磷酸化酶的一种，可将有机磷水解为肌醇和无机磷。植酸酶作为添加剂，应用于养殖、食品加工和医药生产中。尤其广泛的用于添加到动物饲料中，提高饲料中磷的利用率，提高动物的生产性能，减轻动物高磷粪便所导致的环境的磷污染...; 张耀华; 关键词：磷酸化酶定点突变蛋白纯化基因表达

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张耀华