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Npu DnaE内含肽构建及其对293T细胞高效反式剪接活性分析: 2013年; 目的构建Npu DnaE内含肽,探讨Npu DnaE内含肽是否在293T细胞中具备高效反式剪接活性。方法制备融合基因Vn-NDn-myc和NDc-Vc,插入pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro载体,构建质粒。转染293T细胞,荧光显微镜下观察目的蛋白Venus是否形成。48 h后收集细胞蛋白,应用Western blot技术进一步印证。结果构建的质粒经限制性内切酶鉴定及测序比对正确,转染293T后可见共转染细胞组出现明亮荧光,弥漫分布于细胞质中,Western blot证明高量目的蛋白Venus形成。结论成功构建Npu DnaE内含肽,其能在293T细胞中发挥反式剪接的生物学功能,并具有高效的剪接效率及功能目的蛋白形成率。; 张矫崔文静马祥敏王雯雯王欣; 关键词：NPU 内含肽蛋白质反式剪接

含串联多拷贝DNA序列的质粒载体的构建被引量：2: 2013年; 目的探索简便快速的构建含有串联多拷贝DNA序列的质粒载体的方法。方法通过PCR的方法获得不同拷贝数的DNA序列的片段,以与载体同源重组的方式将PCR片段与载体重组,得到重组质粒。最后经BamHⅠ和NotⅠ双酶切鉴定来确定所构建质粒中插入重复DNA序列的拷贝数。结果经酶切鉴定分析,所得质粒分别可以切出不同大小的片段,而且片段大小与所插入的重复DNA序列拷贝数是相对应的。结论成功构建了含有串联多拷贝DNA序列的质粒载体,为向质粒载体中插入多拷贝DNA序列提供了简便实用的新方法。; 崔文静张矫马祥敏王雯雯王欣; 关键词：质粒聚合酶链反应

老年人乳腺癌综合治疗研究进展被引量：14: 2012年; 乳腺癌是妇女中最常见的癌症，乳腺癌发病率随年龄增长而增长，全球内1／3的乳腺癌患者在65岁以上。与年轻患者相比，老年乳腺癌患者并发症较多，接受综合治疗较少。本文将从老年乳腺癌患者的临床病理特点、综合治疗等方面进行综述。; 马祥敏崔文静张矫王欣; 关键词：人乳腺癌老年乳腺癌患者临床病理特点癌发病率

ICTP、IGF-Ⅰ、BGP指标评价肝癌的研究被引量：1: 2006年; 目的:了解Ⅰ型胶原羧端交联肽原(C-terminal telopeptide of typeⅠcollagen,ICTP)、胰岛素样生长因子(IGF-Ⅰ)、骨钙素(BGP)三项肝纤维化指标在原发性肝癌和转移性肝癌血清中的变化,了解三项指标、肝肿瘤指标和肝功能指标之间的关系。方法:正常对照组30例、原发性肝癌组28例、转移性肝癌组23例。采用放射免疫分析测定51例原发性和转移性肝癌病人的血清中的ICTP、IGF-Ⅰ、BGP三项肝纤维化指标;采用罗氏Elecsys1010电化学发光全自动免疫分析仪测定甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原199(CA-199)三项肿瘤指标;采用美国贝克曼库尔特公司SynchronLX20全自动生化分析仪测定谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、谷氨酰氨转酞酶(γ-GT)三项肝功能指标。结果:51例病人ICTP、IGF-Ⅰ、BGP水平均明显高于正常对照组(P<0.01);ICTP、IGF-Ⅰ、BGP原发性肝癌组和转移性肝癌组比较无统计学差异(P>0.05);AFP、肝功能指标在原发性肝癌组明显升高,和转移性肝癌组比较有统计学差异(P<0.01);CEA、CA-199在转移性肝癌组明显升高,和原发性肝癌组比较有统计学差异(P<0.05);ICTP、IGF-Ⅰ指标与肝肿瘤指标和肝功能指标之间的相关分析无相关关系(P>0.05);BGP指标与AST、γ-GT指标之间的相关分析有统计学差异(P<0.05)。结论:ICTP、IGF-Ⅰ、BGP三项指标对了解肝内占位性病变的纤维化程度有一定的帮助,ICTP、IGF-Ⅰ指标与肝肿瘤指标和肝功能指标之间无相关关系;BGP与AST、γ-GT之间有一定的相关关系。; 钟英杜明华张矫吴巍; 关键词：骨钙素肝癌放射免疫分析

双启动子shRNA干扰的协同效应: 2013年; 目的构建含有两段不同靶特异干扰序列的双启动子shRNA载体,并比较其与单个靶特异干扰序列的shRNA载体的干扰效应。方法通过PCR方法扩增H1启动子序列,构建含有U6和H1双启动子的shRNA载体,命名为PLKO.1-H1。设计2对针对EGFP基因不同位点的shRNA片段,同时设计2对无干扰作用的片段shS1和shS2作为对照。分别构建携带上述片段的慢病毒表达载体shEGFP1-H1-shS2、shS1-H1-shEGFP2及shEGFP1-H1-shEGFP2,同时以shS1-H1-shS2质粒作为对照。将重组质粒转染293t细胞,收集病毒感染Hela/EGFP细胞。比较各组之间细胞的荧光强度,并以Western blot检测EGFP的蛋白表达情况。结果成功构建含有双启动子的shRNA慢病毒表达载体。实验组与对照组相比,EGFP蛋白表达水平明显下调,以shEGFP1-H1-shEGFP2重组质粒干扰效应最强。结论含有两段不同靶特异干扰序列的双启动子shRNA载体存在协同干扰效应。; 崔文静张矫马祥敏王雯雯王欣; 关键词：双启动子 RNA干扰

糖尿病与乳腺癌相关性研究进展被引量：4: 2012年; 糖尿病是一组以血糖水平升高为特征，进而导致肾脏、视网膜、血管及神经等并发症和心血管疾病风险增加的慢性新陈代谢紊乱性疾病；糖尿病还与多种恶性肿瘤存在相关性，如与非糖尿病患者相比，糖尿病患者患肝癌、胰腺癌、子宫内膜癌的相对风险升高2倍以上，乳腺癌、大肠癌、膀胱癌升高1．2-1．5倍。近年来，随着乳腺癌发病率的升高，糖尿病与乳腺癌的相关性研究越来越多，研究显示2者存在着复杂的联系。1流行病学研究乳腺癌为女性高发的恶性肿瘤，在许多国家女性恶性肿瘤中的排位仅次于肺癌。根据世界卫生组织的报道，乳腺癌在欧洲和北美最为高发，其中最高为荷兰，其乳腺癌世界人口标化发病率高达91．60／10万。; 张矫崔文静马祥敏李代清王欣; 关键词：非糖尿病癌相关性乳腺癌女性恶性肿瘤代谢紊乱性疾病标化发病率

乳腺癌原发肿瘤与局部复发肿瘤组织中受体表达的差异及其临床意义被引量：5: 2013年; 目的探讨乳腺癌患者原发肿瘤和局部复发肿瘤组织中受体表达的差异及其对生存的影响。方法采用免疫组织化学和荧光原位杂交法检测70例乳腺癌患者的原发肿瘤和局部复发肿瘤组织中雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和人表皮生长因子受体2（HER-2）的表达情况，分析其表达差异对乳腺癌患者总生存时间（OS）和复发后生存时间（PRS）的影响。结果乳腺癌原发肿瘤和局部复发肿瘤组织中ER表达有效变化率为26．1％（18／69），PR表达有效变化率为50．0％（34／68），HER-2表达有效变化率为10．3％（4／39）。60例随访患者中，死亡23例（38．3％），中位生存时间为107个月（11～288个月）；3年生存率为84．3％，5年生存率为71．6％，10年生存率为45．7％。Kaplan-Meier方法分析结果显示，ER表达改变可影响乳腺癌患者的0S（P=0．001）和PRS（P〈0．001），PR表达改变不影响乳腺癌患者的OS（P：0．416）和PRS（P=0．056），但不论原发肿瘤的PR状态如何，局部复发肿瘤PR阳性患者的0s和PRS明显好于PR阴性患者。HER-2表达改变不影响乳腺癌患者的OS（P=0．840）和PRS（P=0．544）。结论乳腺癌原发肿瘤和局部复发肿瘤组织中ER、PR和HER-2的表达存在差异，对患者生存有明显的影响。重新检测复发肿瘤组织中的ER、PR和HER-2表达情况，对指导治疗和评估预后有一定意义。; 马祥敏韩芸蔚张矫崔文静王欣; 关键词：受体受体孕激素人表皮生长因子受体2

荧光蛋白Venus载体构建及在哺乳动物细胞中的表达: 2013年; 目的构建黄色荧光蛋白Venus重组载体,并观察其在哺乳动物细胞中表达情况。方法将Venus克隆至限制性内切酶处理的pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro载体上,转染293T细胞,荧光显微镜下观察结果。48 h后收集细胞蛋白,应用Western blot技术印证荧光蛋白Venus表达情况。结果重组载体经限制性内切酶鉴定及测序比对正确,转染293T细胞后可见明亮荧光,弥漫分布于细胞质中,Western blot证明荧光蛋白Venus高量表达。结论成功构建了Venus重组载体,荧光蛋白Venus在哺乳动物细胞中高表达,此为分子与细胞生物学提供了一种重要的研究工具。; 张矫崔文静马祥敏王雯雯王欣; 关键词：转染

三阴性乳腺癌的钼靶影像学表现和临床病理特征被引量：20: 2012年; 目的比较三阴性乳腺癌[雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和人类表皮生长因子受体2（HER-2）均表达阴性]、ER＋／PR＋／HER-2-型乳腺癌和ER-／PR-／HER-2＋型乳腺癌的钼靶影像学表现和临床病理特征，探讨钼靶影像学表现和临床病理特征诊断三阴性乳腺癌的价值。方法收集临床资料完整的乳腺癌患者500例，其中三阴性乳腺癌患者112例，ER＋／PR＋／ttER-2-型乳腺癌患者310例，ER＋／PR-／HER-2＋型乳腺癌患者78例。比较3组患者的钼靶影像学表现和临床病理特征。结果三阴性乳腺癌组与ER＋／PR＋／HER-2-组比较，具有较高的病理组织学分级（P〈0．001）。三阴性乳腺癌组钼靶X线检查多表现为肿物，其中单纯肿物占58．0％，肿物伴钙化占19．6％。三阴性乳腺癌组肿物边缘多表现为光滑（47．1％），高于ER＋／PR＋／HER-2-组（9．8％，P=0．032）和ER-／PR-／HER-2＋组（0，P=0．028）。三阴性乳腺癌组钼靶X线检查较少表现为钙化，其中单纯钙化占13．4％，肿物伴钙化占19．6％。三阴性乳腺癌组钙化多为良性钙化（70．3％），明显高于ER＋／PR＋／HER-2-组（23．1％，P=0．002）和ER-／PR-／HER-2＋组（10．2％，P〈0．001）。结论不吲类型的乳腺癌有不同的生物学特征，其钼靶影像学表现也不尽相同，乳腺癌的钼靶影像学特征町帮助临床医师预测乳腺癌类型和患者的预后，以及评估患者对各种治疗方法的敏感性，有利于制定最优的治疗方案。; 温绍艳韩芸蔚马祥敏张矫崔文静曹旭晨王欣; 关键词：受体受体孕激素受体表皮生长因子

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张矫

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