宫君原
- 作品数：12 被引量：6H指数：2
- 供职机构：暨南大学生命科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 乙肝病毒聚合酶Pol与细胞蛋白hnRNPK相互作用及对PoI功能的影响
- Pol作为HBVDNA聚合酶具有多功能的性质。它可与宿主细胞内多种蛋白相互作用,影响病毒和细胞的生物学机制。本文利用LTQ质谱方法寻找与Pol相互作用的宿主蛋白,筛选到与Pol潜在相互作用的45个蛋白,并通过CO-IP技...
- 宫君原凌梦婷李月琴张欣李君武周天鸿
- 关键词：HBVDNA聚合酶细胞增殖
- 文献传递
- 稳定表达人巨细胞病毒pUL49蛋白人胚肺成纤维细胞系的建立
- 2010年
- 目的用逆转录病毒载体介导的基因转移方法,建立稳定表达人巨细胞病毒(HCMV)UL49基因的HELF细胞系。方法首先应用RT-PCR从感染HCMV的HELF细胞RNA中扩增UL49基因,克隆到逆转录病毒载体pLEGFP-N1上,以此构建重组逆转录病毒载体pLEGFP-N1-FLAG-UL49,并转染AmphoPack-TM-293细胞,收集逆转录病毒,感染HELF细胞,经G418抗性筛选出阳性细胞。结果经IFA、RT-PCR及Western blot检测到UL49基因在稳定细胞系中表达。结论 HELF-PLEGFP-N1-FLAG-UL49稳定细胞系构建成功。此细胞系为进一步研究HCMV pUL49蛋白的功能提供了一个有力工具。
- 宫君原肖小平员月明李月琴张欣邹弈李弘剑周天鸿
- 关键词：人巨细胞病毒逆转录病毒稳定细胞系
- 乙肝病毒聚合酶Pol功能的相关研究
- HBV长期感染是肝癌发生的原因之一.Pol作为HBV DNA聚合酶在病毒基因组复制，核衣壳的组装等生活周期中发挥至关重要的作用.本论文研究乙肝病毒Pol对肿瘤的产生以及相关的机制如细胞凋亡及细胞周期，细胞增殖，细胞癌基因...
- 宫君原凌梦婷李月琴李君武周天鸿
- 关键词：HBVDNA聚合酶凋亡
- 稳定表达人巨细胞病毒蛋白pUL23细胞系建立及其功能研究被引量：1
- 2010年
- 目的:建立稳定表达人巨细胞病毒UL23基因的HELF细胞系,研究病毒蛋白在宿主细胞内行为,为进一步研究人巨细胞病毒蛋白pUL23的功能提供依据。方法:通过PCR技术从人巨细胞病毒基因组中扩增出UL23基因,通过分子克隆技术构建重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-N1-FLAG-UL23。将该载体导入Am-phoPackTM-293细胞,收获重组逆转录病毒,然后感染HELF细胞,HELF经持续G418抗性筛选后获得稳定表达UL23基因的细胞系。采用激光共聚焦显微镜观察病毒蛋白在细胞内的定位。结果:RT-PCR、Western blotting结果证实病毒基因UL23能够整合到宿主细胞基因组中,并能在宿主细胞中稳定表达病毒蛋白。共聚焦显微镜观察到病毒蛋白pUL23定位于细胞质,处于细胞核周边。结论:利用逆转录病毒载体介导的基因转移技术,成功构建了稳定表达UL23基因的转基因细胞系。该病毒蛋白在宿主细胞质中的定位,提示病毒蛋白发挥功能的空间位于细胞核周边,有利地推进了人巨细胞病毒蛋白pUL23功能研究的进程。
- 杨丹丽肖小平宫君原员月明李月琴张欣邹弈周天鸿李弘剑
- 关键词：巨细胞病毒逆转录病毒
- 稳定表达人巨细胞病毒蛋白pUL23和pUL49哺乳动物细胞系的建立及鉴定
- 目的：pUL23和pUL49分别是人巨细胞病毒(human cytomegalo virus HCMV) UL23、UL49基因编码的蛋白。UL23是病毒生长的非必须基因,其表达产物pUL23是病毒皮层蛋白。UL49是病...
- 宫君原
- 关键词：人巨细胞病毒逆转录病毒脂质体转染
- 文献传递
- 乙肝病毒聚合酶PoI与细胞蛋白hnRNPK相互作用及对PoI功能的影响
- Pol作为HBV DNA聚合酶具有多功能的性质。它可与宿主细胞内多利,蛋白相互作用,影响病毒和细胞的生物学机制。本文利用LTQ质谱方法寻找与Pol相互作用的宿主蛋白,筛选到与Pol潜在相互作用的45个蛋白,并通过CO-I...
- 宫君原凌梦婷李月琴张欣李君武周天鸿
- 关键词：HBVDNA聚合酶细胞增殖
- 文献传递
- 携带乙肝大包膜蛋白L基因与结核Esat6融合基因植物表达载体的构建及鉴定
- 2011年
- 构建包含编码结核杆菌Esat6基因和乙肝病毒大包膜蛋白(L蛋白)基因的植物双元表达载体,并转化根癌农杆菌LBA4404。分别以质粒pPIC9K-L和结核杆菌基因组为模板进行PCR扩增,获得L和Esat6基因,然后运用部分重叠聚合酶链式反应扩增出L-Esat6融合基因片段,连接到有玉米特异性启动子globulin-1的pEGG载体上,将G-L-Esat6融合基因片段酶切下,连接到含有抗除草剂基因bar的双元表达载体pCAMBIA1300上,电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA4404中。构建了真核表达重组质粒pCAMG-L-Esat6,测序分析表明,克隆的L和Esat6序列与NCB I上公布序列一致。成功构建与转化了包含编码乙肝病毒大包膜蛋白L基因和结核杆菌Esat6基因的植物表达载体,并将其转化入根癌农杆菌LBA4404中,为成功研制利用转基因植物生产抗乙肝和结核联合口服疫苗奠定了基础。
- 李君武宫君原刘鑫叶秋萍黄清华
- 关键词：结核分枝杆菌乙肝病毒
- LTQ-FT-MS技术结合生物信息学筛选与HBV Polymerase存在潜在相互作用的宿主蛋白被引量：3
- 2014年
- 乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)是慢性肝病的一个主要致病因素,易导致肝炎、肝硬化,并最终导致肝癌。乙型肝炎病毒聚合酶(HBV Polymerase,Pol)在HBV复制过程中起着关键作用,并有可能参与肝癌的发生。Pol的这些生理功能很有可能是通过与蛋白质之间的相互作用来行使的。本文通过免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation)结合液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术,筛选、鉴定与Pol存在潜在相互作用的蛋白。用构建好的pcDNA3.1-POL-flag重组质粒转染HeLa细胞,LC-MS/MS技术筛选能与融合flag标签的Pol发生免疫共沉淀的蛋白,共得到45个蛋白,其中11个蛋白被报道能与Pol发生相互作用。Ingenuity Pathway Analysis(IPAR○)软件进一步分析45个蛋白与Pol的功能及相应的细胞网络,发现这些蛋白涉及三个大分子网络,其中4个蛋白可能参与协助Pol在细胞网络中行使其生理功能,对这4个蛋白的进一步研究将有助于为攻克乙型肝炎病提供线索。
- 凌梦婷宫君原李君武周天鸿
- 关键词：相互作用
- 人干扰素结合蛋白35在人巨细胞病毒感染过程中的表达及意义
- 2017年
- 目的探讨人干扰素结合蛋白35(interferon-induced protein 35,IFP35)在人巨细胞病毒感染过程中的表达及意义。方法依据是否感染人巨细胞病毒将血细胞分为感染组和未感染组;根据人包皮成纤维细胞转染si RNA和阴性si RNA分为基因敲减组和阴性对照组;采用SYBRGreen荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和蛋白质印迹法检测不同分组中IFP35的表达量;用人巨细胞病毒感染人包皮成纤维细胞,采用SYBRGreen荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测不同感染复数的人巨细胞病毒感染人包皮成纤维细胞表达IFP35的差异以及相同感染复数的人包皮成纤维细胞感染人巨细胞病毒0、12、24、48、96小时后IFP35表达的差异;敲减IFP35基因后,检测人巨细胞病毒量的变化情况。结果感染组血细胞中IFP35表达量显著高于未感染组(P<0.05)。感染后细胞中IFP35的表达量随人巨细胞病毒浓度的增加而增加,与经感染复数为0的人巨细胞病毒感染后的细胞比较,经感染复数为0.01、0.1及1.0的人巨细胞病毒感染后细胞中IFP35的表达量均显著升高(P<0.05)。IFP35的表达量随人巨细胞病毒感染时间的延长而增加,且与0小时相比,其余时间其表达量均显著增加(P<0.05)。基因敲减组人包皮成纤维细胞中IFP35的表达水平显著低于阴性对照组(P<0.05)。敲减IFP35基因的人巨细胞病毒DNA基因拷贝数较未敲减IFP35基因的人巨细胞病毒显著增加(P<0.05)。结论 IFP35的表达量与人巨细胞病毒感染的浓度和时间均呈正相关。IFP35基因的表达可能在一定程度上抑制人巨细胞病毒的感染。
- 肖小平宫君原
- 关键词：人巨细胞病毒细胞生长
- 乙肝病毒聚合酶Pol与细胞蛋白hnRNPK相互作用及对Pol功能的影响
- Pol作为HBV DNA聚合酶具有多功能的性质.它可与宿主细胞内多种蛋白相互作用，影响病毒和细胞的生物学机制.本文利用LTQ质谱方法寻找与Pol相互作用的宿主蛋白，筛选到与Pol潜在相互作用的45个蛋白，并通过CO-IP...
- 宫君原凌梦婷李月琴张欣李君武周天鸿
- 关键词：HBVDNA聚合酶细胞增殖
