宣华
- 作品数：78 被引量：279H指数：9
- 供职机构：广东省农业科学院动物卫生研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技攻关计划广东省农业攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生哲学宗教更多>>
- 鉴别牛病毒性腹泻病毒和猪瘟病毒的复合PCR方法及其应用被引量：32
- 2002年
- 以牛病毒性腹泻病毒 (BVDV)特异引物 P1/ P3扩增 BVDV标准毒株及以猪瘟病毒 (HCV)特异引物 P2 / P3扩增HCV阳性病料 ,分别扩增出 32 6 bp和 2 5 2 bp的特异片段 ;以 P1、P2、P3扩增 BVDV和 HCV人工混合感染样品 ,扩增出大小为 32 6 bp和 2 5 2 bp的 2条片段 ,建立了特异的一步检测 BVDV和 HCV的复合 PCR方法。以建立的复合 PCR方法检测 BVDV分离株 ,都扩增出 1条 32 6 bp的特异片段 ;从吉林等地送检的病料和猪瘟兔化弱毒疫苗中扩增出一2 5 2 bp的特异片段 ,从长岭地区的疑似猪瘟病猪的血清病料中 ,同时扩增出 32 6 bp和 2 5 2 bp的核酸片段 ,表明长岭某猪场流行的“猪瘟”为 BVDV和 HCV混合感染。本研究为进行 HCV和 BVDV的鉴别诊断与流行病学调查提供了有效的方法。
- 周绪斌王新平宣华涂长春
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒猪瘟病毒
- 鸡大肠杆菌病中草药佐剂多价灭活苗的研制Ⅱ疫苗免疫产生期、免疫持续期及保存期试验被引量：1
- 2002年
- 对鸡大肠杆菌中草药佐剂多价灭活苗进行了免疫产生期、免疫持续期、疫苗保存期试验。研究表明 :雏鸡接种该疫苗 3～ 5d后便产生免疫力 ,到 9d时抗体产生水平已经很高 ;以免疫攻毒保护率不低于 80 %为标准 ,疫苗的免疫持续期可在 7个月以上 ;以物理性状合格和免疫攻毒保护率不低于 80 %为标准 ,疫苗置 4℃时保存期为 18个月 ,2 5℃保存 6个月为宜。
- 王文成卫广森王卓尹广东宣华李素
- 关键词：大肠杆菌病多价灭活苗免疫持续期
- 鹅源副粘病毒NA-Ⅰ株M基因真核表达载体的构建及鉴定
- 将鹅源副粘病毒NA-1株毒种接种于11日龄SPF鸡胚,收集36～72h死亡的鸡胚尿囊液.参考已发表的鹅源副粘病毒M基因序列,设计并合成了一对特异性引物,用以扩增鹅源副粘病毒NA-1株M基因,预期扩增的M基因片段包含完整的...
- 马爱霞丁壮宋子运徐明宣华
- 关键词：鹅副粘病毒重组质粒真核表达载体
- 文献传递
- 鸡IL-2基因的克隆及GST-chIL2融合蛋白的表达被引量：3
- 2007年
- 根据Sundick等发表的鸡IL-2基因(chIL2)序列设计合成特异性引物,用RT-PCR从ConA诱导的鸡脾淋巴细胞扩增出450 bp的目的片段,酶切鉴定及序列测定结果表明为鸡IL-2基因。该基因包括鸡IL-2基因的全部开放阅读框,编码142个氨基酸组成的蛋白质,与GenBank鸡IL-2基因相比,在编码氨基酸的49位有一个氨基酸缺失;而与Broiler、SC、Chenren和Xiaoshan鸡在编码氨基酸上完全一致,具有较近的亲缘关系;与Kestrel来航鸡、来航SPF鸡、Obese、Silky和Xianju鸡等有1-4个氨基酸的差异;与火鸡和鹌鹑的氨基酸同源性分别为69.9%和59.4%。将克隆到的基因插入到融合蛋白原核表达载体pGEX-6p-1中,得到重组表达质粒pGEX-IL2。将此重组质粒转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导,表达出了大小约为40 ku的GST-chIL2融合蛋白,其中GST部分为26 ku,鸡IL-2为14 ku,与预期的鸡IL-2成熟蛋白大小一致。
- 王文成舒秀伟宣华陆承平
- 关键词：IL-2融合蛋白
- 表达猪源流感病毒HA基因重组伪狂犬病毒的构建被引量：4
- 2009年
- 目的获得共表达H1N1和H3N2亚型猪源流感病毒(SIV)HA基因的重组伪狂犬病毒(PRV)。方法克隆H1N1以及H3N2亚型SIV的HA基因,将HA基因与PUC-TK转移载体进行酶切、连接来构建pUC-P-H1A-H3A重组表达质粒,用脂质体将其转染已感染PRV亲本病毒的Vero细胞,使其在Vero细胞内与PRV基因组发生同源重组。运用RT-PCR、间接免疫荧光等方法检测外源基因重组情况及其在Vero细胞内的表达,并通过Western-blot对表达产物进行免疫原性鉴定。结果实验结果显示,外源基因HA已重组入PRV基因组,并在Vero细胞中有效表达,且所表达蛋白具有免疫原性。结论HA基因重组PRV的构建成功为SIVHA基因重组PRV活载体疫苗的研究奠定了初步基础。
- 李敏向华张丽黄元王贵平宣华
- 关键词：SIVHA基因TK
- NA-1株鹅源副粘病毒M、F和HN蛋白基因的真核表达
- 2008年
- 目的获得鹅源副粘病毒(GPMV)NA-1株M、F和HN基因真核表达蛋白。方法将NA-1株GPMV经SPF鸡胚增殖、纯化,提取病毒基因组RNA。参考GenBank登录的NA-1株GPMV基因组序列,设计3对特异性引物,利用RT-PCR法,分别扩增M、F和HN基因开放阅读框(ORF),将目的基因克隆至pMD18-T-Simple载体,并进行酶切和序列测定。将目的片段克隆至pCI-neo表达载体,酶切鉴定正确的重组质粒,分别命名为pCI-M、pCI-F和pCI-HN。将重组表达质粒分别转染Vero细胞,用间接免疫荧光试验鉴定目的蛋白的表达。结果RT-PCR法分别扩增出M、F和HN基因,大小与预期一致。克隆载体及表达载体酶切及测序鉴定正确;重组真核表达质粒转染Vero细胞后,荧光显微镜下可见特异性荧光。结论利用pCI-neo真核表达载体在Vero细胞中成功表达了NA-1株GPMV M、F和HN基因,为下一步研究该病毒的出芽机制以及各结构蛋白的功能奠定了基础。
- 马爱霞袁洁丁壮宣华宋子运徐明
- 关键词：鹅源副粘病毒M基因HN基因真核表达
- RHD病毒分子流行病学研究进展
- 2004年
- 隋慧宣华向华郑艳军
- 关键词：分子流行病学病毒性传染病
- 动物疾病智能诊断的现状与分析
- 2015年
- 一动物疾病诊疗的现状与分析1动物疾病发生多样化、复杂化目前我国动物疫病的流行日益复杂化，主要表现有以下特点：一是旧的疫病尚未得到有效的控制，新的疫病又不断发现；二是病原的变异速度加快，感染谱发生变化，疫病症状非典型化；三是疫病混合感染和继发感染越来越普遍，多因子引起发病的情况在临床上愈多见，加大了疫病诊断、治疗和防疫的难度。
- 区亮欣孙宏伟任少敏何斌高英杰王泽岩宣华罗胜军
- 关键词：动物疾病智能诊断动物疫病继发感染疾病发生疫病诊断
- 猪源流感病毒NS1基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2009年
- 对H3N2亚型猪流感病毒NS1基因进行原核表达,获得纯化表达产物,以期为检测猪流感抗体的ELISA试剂盒的研制奠定基础。采用RT-PCR方法扩增H3N2亚型猪源流感病毒的NS1基因(693bp),并将该片段克隆至pET-28(a)构建重组表达质粒pET-NS1。将重组质粒转化E.coliBL21(DE3)感受态细胞,以终浓度1mmol/L的IPTG在不同时间进行诱导表达,SDS-PAGE检测蛋白表达情况,并经Western-blot分析表达产物的抗原性。pET-NS1重组表达质粒表达的NS1蛋白相对分子质量约为26kD,1mmol/L的IPTG诱导4h时蛋白表达量达到高峰。Western-blot印迹分析证实表达蛋白能与阳性血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应。NS1基因的原核表达产物可用来鉴别流感感染猪群和灭活疫苗免疫猪群。
- 李敏向华宣华蔡建平王贵平
- 关键词：猪流感病毒H3N2NS1原核表达
- RNAi靶向N基因抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒的复制被引量：7
- 2010年
- 根据编码猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N)基因的序列,设计3个干扰靶位(N12、N23、N26),构建siRNA表达载体,转染Marc-145细胞后接毒,测定病毒TCID50、CPE,并利用实时荧光定量PCR及间接免疫荧光检测病毒在Marc-145细胞上的复制情况。结果表明,利用RNAi技术靶向N基因,其中N12干扰靶位可以高效抑制PRRSV的增殖,证实N基因可能是病毒复制所必需的结构基因,所选的干扰靶位是病毒复制的关键性位点。
- 杨闽楠李志杰丁壮张泉鹏宣华王贵平
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因RNA干扰
