孙健 作品数:19 被引量:92 H指数:5 供职机构: 上海中医药大学附属普陀医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 上海市教育委员会创新基金 上海市卫生局科研基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
实时荧光定量PCR检测抑癌基因PHBI在胃肠肿瘤中的表达 被引量:2 2010年 目的检测抑癌基因PHBI在胃肠肿瘤中的表达情况,探讨PHBI在胃肠肿瘤的发生和发展过程中所起的作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术进行检测。结果抑癌基因PHBI在胃肠肿瘤组织的表达比在癌旁组织中有显著增高,差异有统计学意义(P<0.01);另外对照胃肠肿瘤组织病理切片,发现低分化胃癌组织中PHBI的表达比中分化胃癌组织高,差异有统计学意义(0.01
季青 张隆 孙健 康向东关键词:实时荧光定量聚合酶链反应 胃肠肿瘤 阻抑素在胃肠癌中的表达情况及其临床意义 被引量:5 2006年 目的检测阻抑素(PHB)在胃肠癌中的表达情况,探讨PHB对胃肠肿瘤诊断的价值。方法采用免疫组织化学法检测PHB在胃肠癌癌组织和癌旁组织中的表达情况。结果PHB在胃肠癌组织的表达量明显高于其相应癌旁组织的表达量,差异有极显著性(P<0.01);PHB在低分化胃癌、肠癌组织中的表达量明显高于中分化癌组织,差异有极显著性(P<0.01)。结论PHB在胃肠癌中特异性高表达,检测胃癌、肠癌组织中PHB的表达对胃癌、肠癌及其分化程度具有潜在诊断价值,为胃肠癌的临床诊断和治疗奠定了实验基础。 康向东 张隆 吴蓉 盛霞 孙健 陈小波关键词:胃肠癌 免疫组织化学 新型萘酰亚胺类衍生物8c诱导结肠癌耐药细胞HCT116/L-OHP凋亡作用研究 被引量:1 2015年 背景与目的:细胞凋亡受阻是肿瘤细胞产生耐药的重要因素,从细胞凋亡的研究入手,将为肿瘤的治疗和耐药性的逆转开辟新的途径。本研究观察一种新型萘酰亚胺类衍生物8c对结肠癌HCT116/L-OHP耐药细胞的作用,探讨诱导HCT116/L-OHP耐药细胞凋亡的分子机制。方法:采用CCK-8法检测8c对HCT116/L-OHP细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞术观察8c对HCT116/L-OHP细胞凋亡的影响;采用实时定量PCR(realtime PCR)检测p53 m RNA、Bax m RNA及Bcl-2 m RNA水平变化;蛋白[质]印迹法(Western blot)检测p-p53、Bax、Bcl-2及细胞色素c(Cyt-c)的蛋白表达水平。结果:8c抑制HCT116/L-OHP细胞增殖的半数抑制浓度(IC50=8.16μmol/L)低于阳性对照氨奈菲特(IC50=28.37μmol/L);药物作用后,8c诱导耐药细胞产生凋亡,凋亡通路中p53(Ser15)磷酸化水平上升,但p53 m RNA水平不受影响;Bax蛋白水平及m RNA水平明显上升,Bcl-2蛋白及m RNA水平下降,使得Bax/Bcl-2比例增加,同时8c又引起细胞色素c的释放。结论:8c通过磷酸化p53 Ser-15位点激活p53,随即激活细胞凋亡通路相关蛋白的表达,这可能是8c抑制结肠癌HCT116/L-OHP耐药细胞增殖的重要机制之一。8c具有良好的抗肿瘤及抗耐药潜力和开发应用前景。 王子元 殷佩浩 许建华 季青 倪振华 孙健 马艳春关键词:结肠癌 凋亡 中医药防治幽门螺杆菌相关性胃病的研究进展 被引量:25 2012年 查阅近几年国内外文献,对中医药抗幽门螺杆菌的实验研究相关文献进行整理并分析。检索万方医学数据库、中国知网(CNKI)和西文生物医学期刊数据库的38篇文献,将中药抗Heticobacter pylori的体外实验、体内实验的研究进展做一总结,并分析其机制。以往的研究从有效成分的筛选、抑菌浓度实验、抗菌机制研究和中医药对幽门螺杆菌感染动物模型的疗效研究,逐步扩展到细胞分子水平的观察。在今后的实验中还应紧密结合中医理论指导,合理选择中药和复方,规范动物模型制作和辨证分型,并严谨实验设计,才能更好的说明问题,以期为中医药防治幽门螺杆菌相关性胃病的更深入研究及临床应用奠定基础。 周宁 吴琼 孙健 李琦关键词:幽门螺杆菌 胃病 体内外实验 人源化甲状腺球蛋白单链抗体FR区突变对其抗原结合力的影响 2010年 筛选具有活性人源化甲状腺球蛋白单链抗体,并探索FR区基因突变对人源化甲状腺球蛋白单链抗体抗原结合力的影响。利用噬菌体展示技术克隆Tg人源化抗体基因,获得FR区基因突变的克隆,鉴定并分析其对单链抗体抗原结合力的影响。通过基因序列分析,突变类型共有3种:FR-3区Met91→Ile91、FR-4区Gln117→His117及两种突变同时存在。抗原结合力实验显示,突变单链抗体与抗原的结合活性显著降低。软件分析显示:突变造成了抗体的CDR区及FR区空间结构的细微变化,抗体疏水性、亲水性及电势也明显发生改变。获得了具有活性的人源化甲状腺球蛋白单链抗体,FR区的突变对人源化甲状腺球蛋白单链抗体的抗原结合力影响显著。 吴蓉 胡玉娜 孙健 赵晓艳 康向东关键词:甲状腺球蛋白 人源化抗体 噬菌体展示技术 VEGF_(165)的载体构建、表达及其生物学活性 被引量:1 2007年 目的:构建血管内皮生长因子(VEGF)165原核表达载体,在大肠杆菌中表达,获得重组VEGF165,并通过细胞和鸡胚尿囊膜试验鉴定其生物学活性。方法:本实验室保存的T-VEGF165质粒,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切,将其克隆至原核表达载体pET28a(+)中,获得含人VEGF165全序列基因的表达载体pET28a(+)-VEGF165,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,对表达产物进行纯化,获得VEGF165蛋白。通过体外促进HUVEC细胞增殖及鸡胚尿囊膜血管增生实验鉴定其生物学活性。结果:成功构建了VEGF165蛋白的原核表达载体,表达纯化了VEGF165蛋白,经过细胞增殖试验及鸡胚尿囊膜血管增生实验,证明该蛋白具有良好的促进血管内皮细胞增殖的生物学活性。结论:成功地获得了人VEGF重组蛋白,并证实了该蛋白具有促进血管内皮细胞增殖活性。 陈小波 黄锡全 张隆 马艳春 孙健 季青 康向东关键词:血管内皮细胞生长因子 鸡胚尿囊膜 血管内皮细胞 去甲斑蝥素对环氧合酶-2过表达人大肠癌裸鼠移植瘤的抑制作用 被引量:2 2013年 目的:探讨去甲斑蝥素对环氧合酶-2(COX-2)过表达人肠癌移植瘤裸鼠模型的抑制作用。方法:建立COX-2过表达的人肠癌移植瘤裸鼠模型,观察去甲斑蝥素(NCTD)对瘤体生长、裸鼠生存期和COX-2表达的影响。结果:成功建立COX-2过表达的移植瘤裸鼠模型,且HCT-116/COX-2实验组中COX-2蛋白表达显著上调,与对照组比较具有统计学差异(P<0.05);HCT-116/COX-2组的瘤体生长速度明显高于HCT-116组及空质粒组,差异有统计学意义(P<0.05);COX-2过表达组生存天数明显少于HCT-116组和空质粒组,差异有统计学差异(P<0.05);NCTD对COX-2过表达裸鼠瘤体生长有明显的抑制作用,并且呈剂量依赖性;NCTD低剂量组、中剂量组、高剂量组裸鼠平均生存天数分别为(80.6±6.9)、(92.8±16.5)、(93.4±14.5)d,与HCT-116-COX-2(75.7±11.2)d比较均有统计学差异(P<0.05);NCTD对COX-2的表达有明显抑制作用,且呈剂量依赖性。结论:COX-2对人结肠癌裸鼠移植瘤的生长有明显的促进作用,且降低了裸鼠的生存期;NCTD能够抑制裸鼠移植瘤的生长,呈现剂量依赖性,并能延长荷瘤裸鼠的生存期,可能通过降低COX-2的表达抑制裸鼠结肠癌的生长。 金赟 范跃祖 孙健 季青 李琦关键词:去甲斑蝥素 环氧合酶2 肠癌 移植瘤 阻抑素基因在诱导胃癌BGC823细胞凋亡过程中的作用研究 2010年 目的:研究阻抑素(prohibitin,PHB)基因在诱导胃癌BGC823细胞凋亡过程中的作用。方法:使用RNA干扰技术和基因转染技术,分别获得PHB基因低表达和高表达的胃癌BGC823细胞。然后采用MTT法和FCM法分别检测PHB基因低表达和高表达的胃癌细胞的增殖率、细胞周期和凋亡情况,Western印迹法检测Bax、Bcl-2和细胞质内细胞色素c的表达水平,并且检测caspase-3和caspase-9的激活情况。结果:PHB基因转染胃癌BGC823细胞后,细胞生长速度减缓,G1期细胞所占比例明显下降,G2期细胞比例略有上升,S期细胞比例和细胞凋亡率明显上升,Bax表达上调,Bcl-2表达下调,细胞质内细胞色素c水平显著上升,caspase-3和caspase-9的激活程度增加。PHB基因特异性RNA干扰胃癌细胞BGC823后,细胞生长加速,G1期和G2期细胞所占比例变化不大,S期细胞比例略有上升,细胞凋亡率小幅下降,Bax表达下调,Bcl-2表达上调,caspase-3和caspase-9的激活程度减弱。结论:PHB是抑制胃癌细胞生长和诱导细胞凋亡的重要因子之一,推测该作用可能是通过线粒体途径实现的。 张隆 季青 吴蓉 孙健 刘丽丽 康向东关键词:基因低表达 BGC823细胞 凋亡过程 细胞凋亡率 BAX表达 WESTERN印迹法 不同浓度的肛愈散对痔术后并发症的疗效影响 目的:观察不同浓度的肛愈散治疗混合痔术后并发症的临床疗效;通过临床观察,记录治疗前后各症状积分的改善情况。 方法:将124例符合纳入标准的患者随机分为治疗A、B、C组及对照组,每组各31例。治疗A组(低浓度)将肛愈散3... 孙健关键词:混合痔 术后并发症 临床药理 疗效评价 熊果酸对人胃癌细胞BGC-823的作用研究初探 季青 赵晓艳 胡玉娜 张隆 倪振华 孙健 康向东