吴雅楠
- 作品数：13 被引量：13H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种检测Poly A尾长度的方法及其应用
- 本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种检测Poly A尾长度的方法及其应用。双端修饰的核酸接头，其5’端为磷酸基团修饰，3’端为间臂类修饰的一种。使用本发明的核酸接头，能够检测到不同长度和结构的mRNA的Poly A...
- 解云李明阳柳梦媛刘婧吴雅楠宋绍辉钏鸿云马雪峰廖国阳
- SARS-CoV-2S蛋白mRNA疫苗对不同毒株交叉中和活性的研究
- 2024年
- 新型冠状病毒(SARS-CoV-2)在感染和持续性进化过程中不断发生变异,导致现有疫苗的有效性降低,因此人类迫切需要能够建立广谱免疫保护的有效疫苗.作者采用mRNA疫苗技术,设计了原型(Prototype)株刺突(Spike,S)蛋白mRNA疫苗(P0).在S蛋白基因序列中引入氨基酸突变位点,制备了Prototype-mut mRNA疫苗P1~P7,并对小鼠进行了免疫.结果表明,引入Q498R-Y505H-H655Y和Q498R-N501Y突变位点的S蛋白mRNA疫苗可以显著提升对Delta株的中和抗体(neutralizing antibody,NAb)滴度(P<0.05).引入Q493R-Q498R-H655Y和Q498R-N501Y突变疫苗对Prototype、Alpha、Beta、Delta、Omicron BA.1等多个毒株的几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)分别为1∶194.0、1∶73.5、1∶32.0、1∶194.0、1∶16.0和1∶294.1、1∶294.1、1∶64.0、1∶256.0、1∶8.0.同时,引入Q493R-Q498R-H655Y、Q498R-Y505H和Q498R-Y505H-H655Y等突变疫苗对Prototype、Alpha、Beta、Delta 4种毒株的中和抗体阳转率可达到100%.通过在S蛋白mRNA疫苗中引入点突变的策略,验证了可能具有免疫逃逸或改变受体结合亲和力潜力的氨基酸突变位点的引入对mRNA疫苗交叉中和活性的影响,这为提升mRNA疫苗广谱性的研发提供了参考.
- 童菲赵蕊蕊张润芳张凤莲刘懿萱乔秋榕刘婧钏鸿云徐丽兰沈霏代小虎马雪峰宋绍辉解云洪超吴雅楠周健廖国阳
- 关键词：新型冠状病毒
- SARS-CoV-2 S蛋白单克隆抗体的制备及其双抗体夹心ELISA检测方法的建立被引量：2
- 2022年
- 目的 制备严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)棘突蛋白(spike protein,S)单克隆抗体(简称单抗),建立S蛋白抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证。方法 通过杂交瘤细胞融合技术制备单克隆抗体,并对单抗进行鉴定。用该单抗作为包被抗体,HRP标记的兔抗S蛋白多克隆抗体作为酶标抗体,建立双抗体夹心ELISA方法,检测SARS-CoV-2 S蛋白抗原含量。对方法的包被抗体浓度(10、5、2.5、1.25μg/mL)、酶标抗体浓度(4、2、1μg/mL)以及封闭液种类(未封闭、PBS稀释的1%BSA、2%BSA、1%BSA+1%蔗糖、2%BSA+2%蔗糖)进行优化,并对方法的线性范围及灵敏度、特异性和准确性进行验证。用建立的方法对10份疫苗生产工艺不同阶段已知S蛋白抗原含量的样本进行检测,计算该方法与中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所新冠疫苗定量方法检测结果的符合率。结果 筛选出18株S蛋白特异性单克隆抗体,7B10A2细胞株制备的腹水抗体纯化后浓度为4.487 mg/mL,纯度大于90%,可特异性结合新冠病毒S蛋白上S1亚基;抗体亚型为IgG2b型,抗体效价为1︰128 000,效应浓度为0.137μg/mL。建立的双抗体夹心ELISA方法最适包被抗体和酶标抗体浓度分别为5和4μg/m L,最适封闭液为2%BSA+2%蔗糖;在2.5~160 U范围内,相关系数(R2)大于0.99,检测灵敏度为1.25 U;该方法特异性良好,与核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,N)、BSA、PBS及流感病毒等不发生反应;准确性验证的回收率在92.10%~111.58%之间。用建立的方法检测已知含量样本符合率在94.2%~109%之间。结论 制备了SARS-CoV-2 S蛋白特异性单抗,并建立了适用于SARS-CoV-2 S蛋白抗原含量检测的双抗体夹心ELISA方法,可用于疫苗产品及其工艺阶段样品和其他样本中S蛋白含量的检测。
- 李妮龙柏霖朱文勇钏鸿云宋绍辉刘婧吴雅楠廖国阳
- 关键词：单克隆抗体双抗体夹心ELISA
- 遗传重配制备B型流感病毒Vero细胞适应毒株
- 2019年
- 目的本研究旨在研究B型流感病毒Vero细胞适应株作为母本,遗传重配制备B型流感病毒Vero细胞适应株。方法选择WHO推荐2017—2018年疫苗株B/massa chusetts/2/2012(简称BX-51B)与实验室原有母本株B/Malaysia/2506/2004Va(简称Bv)共同感染鸡胚和Vero细胞,用抗Bv血清筛选重配病毒,空斑纯化筛选出含有流行株表面抗原的Vero细胞适应株。结果获得重配株命名为BX-51BVa,能在Vero细胞连续传代,通过血凝抑制试验和单向免疫琼脂扩散试验证明BX-51BVa与疫苗株BX-51B是同一型别,基因序列测定证明其HA和NA氨基酸序列与疫苗株BX-51B相同。结论本研究通过筛选出1株B型流感病毒Vero细胞适应株BX-51BVa证明Bv可以作为母本毒株,制备Vero细胞B型流感病毒疫苗毒种。
- 寸怡娜宋绍辉苏敏刘泽吴雅楠高菁霞马磊廖国阳李卫东
- 关键词：VERO细胞B型流感病毒
- ELISA法检测H3N2亚型流感病毒Vero细胞适应株被引量：2
- 2013年
- 目的:流感病毒Vero细胞适应株A/Yunnan/1/2005va(H3N2)是一株以Vero细胞为培养基质能高产的病毒株,可用于制备以Vero细胞为基质的流感病毒裂解灭活疫苗;通过在低温下连续传代培养,可选育出流感病毒Vero细胞冷适应株,用于制备Vero细胞流感病毒减毒活疫苗。为了便于对Vero细胞冷适应株的进一步研究,建立一个检测该病毒株的ELISA方法。方法:以流感病毒Vero细胞适应株A/Yunnan/1/2005Va(H3N2)的纯化抗原为免疫原制备羊抗A/Yunnan/1/2005Va(H3N2)和鸡抗A/Yunnan/1/2005Va(H3N2)的抗血清。将抗血清先后经硫酸铵沉淀法和Protein G亲和层析柱纯化后,以纯化的羊抗A/Yunnan/1/2005Va(H3N2)IgG为包被抗体,鸡抗A/Yunnan/1/2005Va(H3N2)IgG为第二抗体,测定包被抗体、第二抗体和酶标抗体最佳工作浓度,建立双抗体夹心ELISA检测方法。结果:羊抗A/Yunnan/1/2005Va(H3N2)IgG的最佳工作浓度为5μg/mL,鸡抗A/Yunnan/1/2005Va(H3N2)IgG的最适浓度为10μg/mL,酶标抗体最佳稀释倍数为1:4000。对已知的阳性样品,经双抗体夹心ELISA法测定的病毒滴度比血凝方法测定病毒滴度灵敏度高。结论:通过测定包被抗体、第二抗体和酶标抗体最佳工作浓度,建立了双抗体夹心ELISA检测流感病毒Vero细胞适应株病毒含量的方法。该方法操作简单、方便快速、敏感性高,可应用于Vero细胞冷适应株选育时对流感病毒Vero细胞适应株A/Yunnan/1/2005va(H3N2)的检测,对于研制Vero细胞流感减毒活疫苗有重要意义。
- 卢勇宋绍辉蔡玮马磊吴雅楠李卫东廖国阳
- 关键词：流感病毒H3N2亚型VERO细胞适应株ELISA
- 一种降低副产物dsRNA产量的体外转录体系
- 本发明属于生物技术领域，涉及一种降低副产物dsRNA产量的体外转录体系。采用本发明的体外转录缓冲液及体外转录体系，能够逆转体外转录效率与Mg<Sup>2+</Sup>离子的正相关性，使得在较低Mg<Sup>2+</Sup...
- 刘婧李明阳柳梦媛解云吴雅楠宋绍辉钏鸿云马雪峰廖国阳
- 一种检测Poly A尾长度的方法及其应用
- 本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种检测Poly A尾长度的方法及其应用。双端修饰的核酸接头，其5’端为磷酸基团修饰，3’端为间臂类修饰的一种。使用本发明的核酸接头，能够检测到不同长度和结构的mRNA的Poly A...
- 解云李明阳柳梦媛刘婧吴雅楠宋绍辉钏鸿云马雪峰廖国阳
- 脊髓灰质炎病毒及其疫苗研究现状被引量：3
- 2020年
- 脊髓灰质炎疫苗接种策略引发了全球根除脊髓灰质炎进程的转折。从口服脊髓灰质炎疫苗(OPV)转向灭活脊髓灰质炎疫苗(IPV),前者可能导致疫苗衍生的脊髓灰质炎病毒循环和恢复毒力。目前使用的所有疫苗均来源于脊髓灰质炎病毒培养,Salk IPV还涉及野生型病毒。通过重组技术产生空的病毒衣壳,可以实现不使用病毒生产疫苗的目标,但迄今为止这样的病毒样颗粒(VLP)非常不稳定。本文对脊髓灰质炎病毒的生物学特性、脊髓灰质炎疫苗的发展现状及研究进展进行概述。
- 吴雅楠廖国阳
- 关键词：脊髓灰质炎病毒口服脊髓灰质炎疫苗联合疫苗
- 卵清蛋白多克隆抗体的制备及其双抗体夹心ELISA检测方法的建立被引量：1
- 2021年
- 目的建立卵清蛋白(ovalbumin,OVA)双抗体夹心ELISA检测方法并进行验证,用于定量检测鸡胚流感疫苗中的OVA含量。方法建立双抗体夹心酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),对该方法的反应条件进行优化,确定定量范围及检测下限,并对重复性、特异性和准确度进行验证。结果建立的方法最适包被抗体和酶标抗体浓度分别为2.5μg/ml和0.5μg/ml,最适封闭液配方为1%BSA+1%蔗糖。该方法的cut-off值为0.134,线性范围为0.313-20.000ng/ml,定量下限为0.078ng/ml。重复性好,板内变异系数为3.428%~25.953%,板间变异系数为5.375%~27.614%。特异性好,准确度高,检测结果与试剂盒检测结果符合率为91.43%~102.96%。稳定性好,预包被的酶标板冻存于-20℃,半年内检测样本变异系数为1.976%~14.409%。结论建立了快速、简便、低成本的OVA定量检测方法,可用于鸡胚流感疫苗中OVA定量检测。
- 李妮朱文勇宋绍辉钏鸿云吴雅楠赵蕊蕊廖国阳
- 关键词：卵清蛋白多克隆抗体双抗体夹心ELISA
- 脊髓灰质炎病毒假病毒中和试验测定血清中和抗体滴度的研究
- 2020年
- 脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)的持续监测在全球消灭脊髓灰质炎的最后阶段起着至关重要的作用,对易感人群的脊髓灰质炎中和抗体的监测,是疫苗强化免疫的重要数据支持。但是伴随着脊灰活病毒的大范围封存计划的实施,传统的病毒中和试验将难以开展,为此本研究成功构建了SabinⅡ型PV假病毒,并将其运用到人群血清样本的中和试验进行验证。研究发现,PV假病毒具有型特异性,具有与脊灰病毒相似的电镜形态。所以本研究制备的脊灰假病毒能够满足人群血清中和抗体水平的检测要求,值得推广运用。
- 吴雅楠朱文勇周健刘泽马磊高菁霞廖国阳
- 关键词：脊髓灰质炎病毒假病毒
