刘方欣
- 作品数：32 被引量：87H指数：5
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- 相关领域：医药卫生生物学化学工程文化科学更多>>
- 靶向Bcl-2基因转录shRNA重组质粒的构建和序列分析
- 2006年
- [目的]利用RNA干扰技术,以Bcl-2为靶基因,设计构建重组体,并进行序列分析,探索肿瘤基因治疗的新途径。[方法]设计有小发夹结构的两条DNA序列,经退火形成互补双链,克隆至转录载体Pgenesil-1上构建重组体,转化DH5a菌株,提取质粒行酶切鉴定后,进行测序分析。[结果]将合成的DNA片段退火后克隆至载体上,经酶切及序列鉴定为目的序列,靶向Bcl-2基因转录shRNA重组质粒构建成功。[结论]靶向Bcl-2基因转录shRNA重组质粒的成功构建,为下一步利用该重组体干扰肿瘤细胞中Bcl-2的mRNA转录,探索肿瘤基因治疗的新途径奠定基础。
- 周琦张玉诺刘方欣龚旭
- 关键词：基因BCL-2重组质粒
- ^(99)Tc^m-EC-ASODN反义探针的合成和标记被引量：8
- 2005年
- 报道反义探针99Tcm-EC-ASODN的合成和标记。将次乙酰双半胱氨酸(L,L-ethylenedicysteine,EC)与反义寡脱氧核苷酸(Antisenseoligodeoxynucleotides,ASODN)进行偶联,形成复合物EC-ASODN,通过核磁共振图谱(1H-NMR)、红外图谱(IR)、紫外(A260)吸收和电泳,鉴定EC-ASODN复合物的结构。用锝(99Tcm)标记EC-ASODN,通过薄层层析评价99Tcm-EC-ASODN的标记率、放化纯和稳定性。结果显示,1H-NMR、IR谱图、紫外吸收和电泳都证实EC与ASODN联结形成EC-ASODN,99Tcm-EC-ASODN的标记率为77.28%,放化纯为97.52%,Rf=0.95—1,4h内具有很好的稳定性。结论:EC与ASODN能形成稳定的复合物EC-ASODN,用99Tcm标记,方法简便,能得到标记率高和稳定性好的反义探针。
- 谢娟刘方欣王颖李少林
- 关键词：核磁共振光谱红外光谱
- 前列腺素E1脂微球载体制剂治疗脑梗塞临床观察及其预后分析
- 2004年
- 目的：探讨前列腺素E1脂微球载体制剂治疗脑梗塞临床疗效及其对预后的影响。方法：对收治的脑梗塞120例按入院时间随机分为实验组和对照组各60例，实验组采用前列腺素E。脂微球载体制剂治疗，对照组采用复方丹参针治疗，疗程均2w，同时合理控制血压，降低颅压及其合并症和有关并发症的处理。治疗前后均行血糖、血脂、血粘度等检查，观察临床疗效并随访3mo。结果：实验组疗效明显优于对照组(P<0．05)，实验组3mo内发生TIA或脑梗塞也少于对照组，有显著性差异(P<0．05)。结论：前列腺素E1脂微球载体制剂能有效治疗脑梗塞，并能有效改善其预后。
- 刘方欣张玉诺龚旭
- 关键词：前列腺素脑梗塞预后
- 与表皮生长因子结合的c－erbB2癌基因的反义短核苷酸及其应用
- 本发明提供了一种c－erbB2癌基因的反义短核苷酸，其序列为：SEQID NO 1。该反义短核苷酸经多聚赖氨酸与表皮生长因子结合后的结合物注入体内存在的肿瘤细胞，利用EGFR受体与c－erbB2同属表皮生长因子受体家族，...
- 李少林吴永中季平段红王颖彭志平杜铭庞华谢娟黄家君李兵傣家富刘方欣
- 文献传递
- Bcl-2基因反义寡核苷酸对乳腺癌细胞株药物敏感性的影响被引量：3
- 2004年
- 目的:探讨bcl-2基因反义寡核苷酸对人乳腺癌细胞株MCF-7的bcl-2蛋白的表达和药物敏感性的影响。方法:用人工合成bcl-2基因反义寡核苷酸预培养人乳腺癌细胞株MCF-7,以免疫组化法检测细胞bcl-2蛋白的表达水平;以MTT法检测bcl-2反义寡核苷酸、阿霉素单独及联合应用对MCF-7细胞生长的抑制情况,比较bcl-2蛋白表达与肿瘤细胞药物敏感性之间的相关性。结果:联合应用bcl-2反义寡核苷酸与阿霉素能够明显增加MCF-7细胞对阿霉素的敏感性,细胞存活率明显下降。免疫组化结果显示MCF-7细胞bcl-2表达水平与细胞药物敏感性有相关性。结论:bcl-2反义寡核苷酸能够抑制MCF-7乳腺癌细胞bcl-2基因的表达,提高MCF-7细胞对阿霉素的敏感性。
- 刘方欣李晓愚张玉诺
- 关键词：BCL-2基因反义寡核苷酸乳腺癌药物敏感性
- ^(99m)Tc-ASODN-EGF的小鼠体内分布和兔药动学被引量：1
- 2005年
- 目的:研究c-erbB2反义寡脱氧核苷酸(ASODN)探针99mTc-ASODN-EGF的体内分布和药动学特性。方法:小鼠尾静脉注射99mTc-ASODN-EGF 370 kBq(10μC i).150μL-1,于0.5,1,2,4,8,24 h取血、肝、脾、肾等组织器官,测定每分钟放射性计数(cpm),并准确称重,计算每克组织百分注射剂量率(%ID.g-1)。兔经左侧耳缘静脉注射99mTc-ASODN-EGF 1110 kBq(30μC i).2 mL-1,于1,3,5,10,15,20,25,30,40,60,120,240,360 m in从右侧耳缘静脉采血约0.2 mL,测定cpm,准确称重,计算每克血液每分钟放射性计数,用3P97软件计算药动学参数。结果:99mTc-ASODN-EGF在小鼠肝、肾、脾和肺的放射性分布较高,1 h的%ID.g-1分别为22±8,7.4±2.0,46±28和13±7。在心、脑、骨和肌肉的放射性分布很低。兔药动学参数符合二室模型,t12α为(0.32±0.07)h,t12β为(9±3)h,Vc为(1.2±0.8)cpm.kg-1,Cl为(0.061±0.023)cpm.h-1。结论:99mTc-ASODN-EGF的组织器官分布和药动学特性能满足临床显像的要求,可用于肿瘤靶基因的显像。
- 谢娟李少林张玉诺刘方欣
- 关键词：药动学
- 低氧诱导因子1α对小鼠宫颈癌放射敏感性的影响
- 2007年
- 目的:探讨低氧诱导因子1α(HIF-1α)对小鼠宫颈癌皮下移植瘤放射敏感性的影响,探讨其可能的机制。方法:建立宫颈癌皮下移植瘤模型,随机分为对照组、单次γ射线大剂量照射组、小剂量分次照射组、大剂量照射联合高压氧组、小剂量分次照射联合高压氧组,采用不同的方案进行体外放射治疗。免疫组化法测定放射治疗后移植瘤内的HIF-1α、bcl-2的表达水平,观察各γ射线处理组照射后移植瘤的抑瘤率,并对HIF-1α与bcl-2的表达及抑瘤率进行相关性分析。结果:HIF-1α的表达与移植瘤抑瘤率呈负相关(r=-0.514,P<0.05);与Bcl-2表达无明显相关关系。结论:抑制HIF-1α的表达可提高肿瘤对放射治疗的敏感性,该效应可能与Bcl-2表达无关。
- 刘方欣张玉诺李晓愚任庆兰彭志平李少林
- 关键词：低氧诱导因子1Α宫颈癌
- 胸腺素α1与复合α干扰素融合蛋白的表达及其生物学活性被引量：3
- 2008年
- 实验旨在获得具有双重生物学活性的重组胸腺素α1(Thymosin alpha1,TM-α1)与复合α干扰素(IFNα-con)融合蛋白。选择大肠杆菌偏爱的密码子,将合成的TM-α1与IFNα-con编码序列构成的融和基因克隆至大肠杆菌表达载体pET-22b(+)、在宿主菌BL21(DE3)-Codon plus-RP-X中成功表达了可溶性融合蛋白(TM-α1-IFN-con)。表达量占总蛋白的20%以上。通过硫酸铵沉淀、疏水层析、阴离子交换层析、阳离子交换层析、分子筛层析后,产品纯度达到96%以上。采用细胞病变抑制法测定融合蛋白的抗病毒活性,采用细胞增殖实验检测融合蛋白对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。结果表明,融合蛋白的抗病毒活性优于市售的IFNα1b和IFNα2a。对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响与市售的合成胸腺素α1相同。已有研究证实,该融合蛋白具有良好的体外抗HBV作用,其体外抗HBV活性比联合应用TM-α1和干扰素α强,且细胞毒性明显低于联合应用TM-α1和干扰素α。以上结果表明,通过大肠杆菌表达的可溶性融合蛋白(TM-α1-IFN-con),既具有良好的干扰素α抗病毒作用,也具有胸腺素α1促淋巴细胞增殖作用。
- 刘先俊刘方欣黎波周辉云王琴琴
- 关键词：胸腺素Α1融合蛋白活性
- 环氧化酶抑制剂对人乳腺癌细胞株MCF-7的抑制作用研究被引量：3
- 2005年
- 目的:研究环氧化酶抑制剂阿司匹林和选择性环氧化酶2抑制剂尼美舒利对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的生长抑制作用,并初步探讨其作用机理。方法:用阿司匹林和尼美舒利分别作用人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,MTT法观察其生长抑制作用;免疫组化法检测阿司匹林和尼美舒利作用后MDA-MB-231细胞中COX-2和c-erbB-2的表达情况。结果:阿司匹林和尼美舒利能够抑制MDA-MB-231细胞的生长,并呈时间-剂量依赖型。COX-2在MDA-MB-231细胞中表达呈阳性,免疫组化发现细胞内c-erbB-2表达下降。结论:环氧化酶抑制剂能够有效的抑制肿瘤细胞的生长,其机制可能与下调c-erbB-2基因的表达有关。
- 刘方欣张玉诺李少林
- 关键词：环氧化酶抑制剂选择性环氧化酶2抑制剂
- 环氧化酶2抑制剂尼美舒利对乳腺癌细胞株放射敏感性的影响被引量：1
- 2008年
- [目的]探讨环氧化酶2抑制剂尼美舒利对乳腺癌细胞株MCF-7的放射增敏作用并初步探讨其机制。[方法]克隆形成实验检测尼美舒利对MCF-7的放射增敏作用;电镜观察肿瘤细胞形态学改变;流式细胞仪(FCM)检测肿瘤细胞调亡率及Bcl-2、Bax蛋白的表达。[结果]不同浓度的尼美舒利对乳腺癌细胞MCF-7均有放射增敏作用,且呈剂量依赖性关系;尼美舒利与射线照射联用能够上调Bax的蛋白表达,同时抑制Bcl-2蛋白表达,明显增加细胞凋亡率。[结论]COX2抑制剂尼美舒利对人乳腺癌MCF-7细胞株具有明显的放疗增敏作用。
- 刘方欣李晓愚任庆兰
- 关键词：乳腺癌凋亡
