刘宇卓
- 作品数：160 被引量：315H指数：8
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- H9N2亚型禽流感病毒NA基因的序列分析
- 引言 我国自1994年首次报道鸡感染H9N2亚型AIV以来，该病毒迅速传播至其它地区，目前已成为我国主要的禽流感流行毒株，给家禽养殖业造成了巨大的经济损失.神经氨酸酶(NA)是流感病毒表面的一种重要糖蛋白，不仅是制备疫苗...
- 黄欣梅李银赵冬敏刘宇卓杨婧韩凯凯
- 7株H9N2亚型禽流感病毒NA基因的序列分析
- 用RT-PCR方法扩增了7 株分离自江苏地区的H9N2亚型禽流感病毒神经氨酸酶(NA)基因片段,进行测序分析.结果表明：7株病毒NA 基因同源性为86.0％～99.6％,其中5株分离自鸡的毒株属于h9.4.2分支,2株分...
- 黄欣梅李银刘宇卓赵冬敏杨婧韩凯凯
- H9N2亚型禽流感病毒感染树突状细胞的转录组分析
- <正>引言H9N2亚型禽流感病毒（AIVs）属于低致病性禽流感病毒,在临床上并不能像H5和H7高致病性禽流感病毒那样导致鸡的大批死亡[1,2]。但是,H9N2 AIVs感染却可以引起鸡的免疫抑制,进而导致疫苗的免疫失败或...
- 刘青涛李银杨婧赵冬敏刘宇卓韩凯凯黄欣梅毕可然刘娜田宇杰
- 文献传递
- 鹅坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅲ的原核表达及抗原性分析被引量：3
- 2015年
- 【目的】获得鹅坦布苏病毒(GTMUV)E蛋白结构域III的原核表达重组蛋白并明确其免疫原性,为进一步研究其生物学功能及研制亚单位疫苗奠定基础。【方法】根据Gen Bank中GTMUV JS804株E蛋白结构域III的同源基因序列设计1对引物,在其两端加入Flag标签序列和酶切位点,采用PCR扩增GTMUV的E蛋白结构域III基因(EIII),然后与p ET32a原核表达载体连接构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)后用IPTG诱导融合蛋白表达,并以Western blotting鉴定其免疫原性。【结果】PCR扩增获得携带Flag标签序列的EIII基因片段约430 bp,将其插入p ET32a载体可成功构建重组质粒p ET32a-EIII。阳性重组菌经IPTG诱导表达5 h即可得到融合蛋白,分子质量约33.0 k Da,主要以包涵体形式存在。Western blotting鉴定结果显示,融合蛋白与抗Flag标签单克隆抗体、小鼠抗坦布苏病毒多克隆抗体均可发生特异性反应,检测到预期的目的条带。【结论】GTMUV E蛋白结构域Ⅲ能在大肠杆菌中成功诱导表达,且获得的融合蛋白具有良好的免疫原性,可用于研制GTMUV诊断抗原和亚单位疫苗。
- 黄欣梅赵冬敏刘宇卓杨婧韩凯凯李银
- 关键词：E蛋白原核表达免疫原性
- 鸭源副粘病毒Y03株F基因的克隆及序列分析被引量：8
- 2006年
- 从安徽某发病鸭场分离鉴定出1株副粘病毒Y03株,采用RT-PCR法扩增出包括裂解位点在内的部分F基因,对其进行序列测定,并与GenBank中的各基因型代表毒株进行比较。结果表明:所克隆片断长度为385 bp;Y03株F基因的裂解位点序列为112R-R-Q-K-R-F117,并且具有第101位的K(赖氨酸)和121位的V(缬氨酸),为基因Ⅶ型副粘病毒强毒株的特征序列;Y03株与NDV代表毒株间的同源性在80.3%至97.4%,与国内标准强毒F48E9的同源性只有83.6%,差异达到18.1%。
- 张青娴李银张敬峰刘宇卓鲍恩东
- 关键词：副粘病毒基因
- H9N2亚型禽流感病毒对鸡的免疫抑制机制被引量：7
- 2018年
- 通过评价H9N2亚型禽流感病毒(AIVs)感染对于鸡新城疫和传染性支气管炎活疫苗免疫效力的影响,研究了H9N2 AIVs的免疫抑制机理。结果显示,H9N2 AIVs感染可降低鸡对鸡新城疫和传染性支气管炎活疫苗的抗体应答,但与对照组相比差异并不显著;而流式分析结果显示,与对照组相比H9N2 AIVs感染可显著降低鸡外周血中CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞的比率(P<0.05);抗原特异性的T淋巴细胞增殖试验结果显示,与对照组相比H9N2 AIVs感染鸡的外周血T淋巴细胞增殖活性显著下降(P<0.05);另外,H9N2 AIV感染还导致鸡血清中细胞因子IFN-γ和IL-4应答水平的下降,其中IFN-γ的应答水平与对照组相比差异显著(P<0.05)。说明H9N2 AIVs感染可抑制鸡的免疫应答,其中对细胞免疫应答的抑制更为明显。
- 刘青涛李银刘娜刘娜杨婧韩凯凯刘宇卓赵冬敏黄欣梅
- 关键词：H9N2亚型禽流感病毒免疫抑制
- 小鼠转录因子STAT1真核表达质粒的构建及生物学功能分析被引量：3
- 2019年
- 本研究以小鼠组织的总RNA为模板,通过RT-PCR扩增得到小鼠信号转导子和转录激活子1(STAT1)基因完整开放阅读框的碱基序列,然后将其克隆到真核表达载体p DsRed-N1中,构建p DsRed-N1-STAT1重组质粒。测序成功的真核质粒转染至BHK-21细胞,通过α干扰素(IFN-α)分子刺激,检测细胞中STAT1分子的活化状态与定位,最终通过坦布苏病毒刺激,荧光显微镜检测STAT1分子的细胞内定位。结果表明,小鼠的STAT1基因开放阅读框为2 250 bp,编码749个氨基酸。同源性比对结果表明,小鼠STAT1与人、大鼠、猪、马等哺乳动物STAT1氨基酸序列的一致性分别为92%、97%、91%、91%。转染结果表明,构建的p DsRed-N1-STAT1真核表达质粒在BHK-21细胞中成功表达,无IFN-α刺激时,红色荧光只在BHK-21细胞的细胞质中出现,而加入IFN-α后,红色荧光则大多分布于细胞核内。用坦布苏病毒感染细胞后,红色荧光多分布于细胞质中。说明,构建的真核质粒p DsRed-N1-STAT1在哺乳动物细胞中能够正确表达融合蛋白质Red-STAT1,而且在IFN-α刺激下,Red-STAT1可由细胞质向细胞核转运,同时发现,坦布苏病毒感染能够有效抑制STAT1分子的核转运。
- 韩凯凯赵冬敏毕可然章丽娇刘青涛刘宇卓黄欣梅杨婧李银
- 关键词：小鼠Α干扰素
- 鸭疫里氏杆菌RA JS01菌株的PCR鉴定及生物学特性被引量：1
- 2011年
- 在临床疑似鸭传染性浆膜炎的病鸭组织中分离了1株RA JS01菌株,通过形态观察、生化试验和PCR鉴定,确定该菌株为鸭疫里氏杆菌,结果表明:该菌株对多数抗生素都具有耐药性和较强的致病性;经静脉和足底接种的鸭在接种后24 h时开始死亡,接种96 h时全部死亡;连续传至22代时菌株的生物学特性均未发生变化。
- 张敬峰李银刘宇卓黄欣梅赵冬敏
- 关键词：鸭疫里氏杆菌PCR鉴定生物学特性
- 华东地区H9N2亚型禽流感病毒HA基因的遗传演化分析被引量：5
- 2015年
- 为了解华东地区H9N2亚型禽流感病毒（AIV）的遗传特点和流行规律,利用RT-PCR方法扩增华东地区2008～2013年分离的17株H9N2亚型AIV血凝素（HA）基因片段,进行序列测定和遗传进化分析,并对HA蛋白质的裂解位点、受体结合位点和潜在的糖基化位点进行分析。结果显示,17株H9N2亚型AIV HA基因核苷酸和推导的氨基酸同源性分别为84.6%～99.3%和86.0%～99.5%,均属于欧亚分支。其中15株鸡源病毒属于Y280-like亚系,2株鸭源病毒属于G1-like亚系。HA裂解位点都是非连续碱性氨基酸,属于低致病力毒株。HA受体结合位点149、150、191、198和234位氨基酸存在变异,尤其是234位氨基酸有14株毒株变为L,表现出人流感病毒受体结合特性。有2株毒株在145位氨基酸出现新的糖基化位点,5个毒株在218位氨基酸缺失1个糖基化位点,13个毒株在313位氨基酸增加了一个新的糖基化位点。研究结果表明华东地区近年来H9N2亚型AIV存在一定的变异,应加强对该类病毒的分子流行病学监测。
- 黄欣梅李银刘宇卓赵冬敏杨婧韩凯凯
- 关键词：H9N2亚型禽流感病毒HA基因进化分析
- 一株鹅源副粘病毒分离株全基因组序列的克隆与序列分析
- 从发病的鹅分离到一株鹅源副粘病毒(GPMV),血清学鉴定表明该分离病毒为禽副粘病毒-Ⅰ型(PMV-Ⅰ).运用RT-PCR方法获取了E01株鹅副粘病毒全基因组序列,并对其进行了比较分析.此株鹅副粘病毒(E01)的全基因组序...
- 魏雪涛李银刘宇卓张敬峰
- 关键词：副粘病毒全基因组
- 文献传递
