黄惟巍 作品数:43 被引量:17 H指数:2 供职机构: 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所 更多>> 发文基金: 中央高校基本科研业务费专项资金 云南省应用基础研究计划面上项目 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 更多>>
呈递预测的小鼠OX40胞外域抗原表位重组病毒样颗粒的制备 2021年 目的制备呈递预测的小鼠OX40胞外域抗原表位重组病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),为进一步以主动免疫方式靶向OX40调控T细胞免疫功能奠定基础。方法通过抗原数据库中氨基酸的出现频率,对肽段氨基酸组成进行分析,获得其作为抗原表位的潜能,从而预测潜在的OX40线性B细胞表位;经基因重组技术将抗原表位插入至乙型肝炎核心抗原(hepatitis B core antigen,HBcAg)的优势表位区域,在大肠埃希菌中表达,超声裂解菌体,上清中目的蛋白经硫酸铵沉淀及Sepharose 4 Fast Flow凝胶层析纯化,沉淀中目的蛋白经2%TritonX-100洗涤、尿素溶解及脱盐纯化,获得的蛋白经电镜观察VLPs形态。将VLPs经皮下免疫小鼠,ELISA法检测血清特异抗体水平。结果经分析预测获得7个潜在的抗原表位;嵌合表位的重组HBcAg蛋白(P1~P7)在大肠埃希菌中均获得了有效表达,其中P3、P6和P7蛋白存在于超声裂解菌体的可溶性上清中,而P1、P2、P4和P5蛋白存在于沉淀中。纯化的目的蛋白均以VLPs形式存在,免疫小鼠可有效激发OX40特异的抗体应答。结论成功构建并纯化制备了呈递OX40抗原表位的重组VLPs。 袁明翠 张启书 李维冉 叶超 谢航航 黄惟巍 马雁冰关键词:OX40 抗原表位预测 乙型肝炎核心抗原 病毒样颗粒 纯化 主动免疫治疗慢性哮喘的呈递IL-33的VLP疫苗构建方法 本发明提供一种主动免疫治疗慢性哮喘的呈递IL-33的VLP疫苗构建方法,包括以下步骤:从小鼠提取IL-33总RNA,通过逆转录得到IL33总cDNA,用设计的特异性引物将得到的总cDNA通过PCR扩增,得到编码IL-33... 马雁冰 龙琼 黄惟巍 姚宇峰 杨旭 孙文佳 金晓媚 李杨 褚晓杰 刘存宝文献传递 一种以ATP为佐剂的HPV纳米疫苗组合物及其制备方法 本发明提供了一种以ATP为佐剂的HPV纳米疫苗组合物及其制备方法,所述组合物包括E7‑PLGA纳米疫苗和ATP佐剂,且所述HPV纳米疫苗组合物中ATP的浓度为10‑100μM。腺苷三磷酸(ATP)是机体最重要的胞内代谢产... 马雁冰 张启书 李思瑾 李维冉 袁明翠 黄惟巍文献传递 自组装肽折叠形成的纳米纤维抗肿瘤疫苗及方法 本发明涉及一种自组装肽折叠形成的纳米纤维抗肿瘤疫苗及方法,属于分子生物学及免疫学技术领域。本发明将HPV16 E7<Sub>44‑62</Sub>肽通过Ser‑Gly‑Ser‑Gly,连接到自组装肽Q11的N段,在1×P... 马雁冰 李思瑾 张启书 谢航航 白红妹 黄惟巍 孙文佳一种细菌生物膜囊泡(BBV)作为疫苗载体的构建方法和应用 本发明提供了一种细菌生物膜囊泡(BBV)作为疫苗载体的构建方法和应用,首次利用超高压强来驱动工程化修饰的细菌生物膜完成高效自组装,并利用ClyA在细菌外膜上组装成孔的能力携带RBD在原核系统中构建了突刺样的细菌囊泡(RB... 黄惟巍 马雁冰 杨忠倩 李维冉 华良群 张启书 龙琼 白红妹 杨旭 孙文佳文献传递 鲍曼不动杆菌亚单位疫苗抗原蛋白与应用 本发明涉及分子生物学及免疫学领域,具体的说,本发明提供了一种鲍曼不动杆菌的亚单位疫苗抗原蛋白与其应用方法。鲍曼不动杆菌外膜蛋白OmpW的基因核酸序列如序列表SEQ?IDNO:1所示,其编码的蛋白即为鲍曼不动杆菌亚单位疫苗... 马雁冰 黄惟巍 姚宇峰 王世杰 杨旭 夏烨 孙文佳 刘存宝 白红妹文献传递 在毕赤酵母中使用甲醛脱氢酶启动子指导人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1表达的方法 本发明涉及在甲醇营养型毕赤酵母宿主细胞中表达人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1的方法,其中人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1的表达受毕赤酵母甲醛脱氢酶启动子的控制,本发明主要包含:i)构建毕赤酵母甲醛脱氢酶启动子指导的毕... 马雁冰 金晓媚 姚宇峰 杨旭 黄惟巍 刘存宝 孙文佳 龙琼 李杨 褚晓杰文献传递 大肠埃希菌外膜囊泡作为新型外源质粒递送载体的研究 被引量:1 2019年 目的探讨大肠埃希菌外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)作为新型DNA疫苗递送载体的潜力及价值。方法从大肠埃希菌DH5α的培养上清中经过滤、超滤、超速离心等步骤收集天然分泌的OMVs,采用密度梯度离心法纯化OMVs。将纯化后的OMVs与哺乳动物吞噬细胞及非吞噬细胞进行体外孵育,观察不同细胞对OMVs的摄取效率。通过电击转化方式将带绿色荧光蛋白的真核表达质粒pIRES2-EGFP转入OMVs中,并与RAW264. 7细胞共孵育,观察OMVs携带真核表达质粒进入细胞并表达绿色荧光蛋白的情况。结果密度梯度离心法可有效纯化OMVs,纯化后的OMVs进入不同哺乳动物细胞的效率不同,进入吞噬细胞的效率高于非吞噬细胞,经电击转化后,质粒DNA可被导入OMVs中,并随吞噬细胞摄取及表达。结论约5 300 bp的真核表达质粒可用电击方式导入OMVs中,并通过OMVs介导该质粒在吞噬细胞中表达,提示OMVs具有作为新型质粒DNA递送载体的潜力。 舒聪妍 王世杰 高福兰 黄惟巍 马雁冰关键词:质粒 递送系统 DNA疫苗 鲍曼不动杆菌疫苗研究进展 2012年 近年来广谱抗生素的广泛使用,使感染性疾病救治水平不断提高。但在抗生素的强大压力下,医院内产生大量的耐药菌株,这些耐药菌对抗生素的敏感性减小甚至消失,致使抗生素对耐药菌的疗效降低甚至无效。不动杆菌是近年来院内感染中增长较快的菌种,其中鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,Ab)是目前院内感染最为常见的重要耐药菌之一。近年来,世界各地均报道了多重耐药甚至泛耐药鲍曼不动杆菌的院内感染及流行[1-7]。 陈冲 杨旭 杨旭 黄惟巍关键词:泛耐药鲍曼不动杆菌 广谱抗生素 耐药菌株 疫苗 救治水平 多重耐药 主动免疫治疗慢性哮喘的呈递IL-33的VLP疫苗构建方法 本发明提供一种主动免疫治疗慢性哮喘的呈递IL-33的VLP疫苗构建方法,包括以下步骤:从小鼠提取IL-33总RNA,通过逆转录得到IL33总cDNA,用设计的特异性引物将得到的总cDNA通过PCR扩增,得到编码IL-33... 马雁冰 龙琼 黄惟巍 姚宇峰 杨旭 孙文佳 金晓媚 李杨 褚晓杰 刘存宝文献传递