黄华
- 作品数：5 被引量：18H指数：3
- 供职机构：大连海洋大学更多>>
- 发文基金：海洋公益性行业科研专项辽宁省高等学校优秀人才支持计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 鮰爱德华菌单克隆抗体的制备及其在黄颡鱼“红头病”研究中的应用被引量：8
- 2014年
- 以黄颡鱼Pelteobagrus fulvidraco"红头病"病原——鮰爱德华菌Edwardsiella ictaluri A86为抗原,利用杂交瘤技术制备了鮰爱德华菌黄颡鱼分离株的菌体单抗5D11、1B8、1G7、3G8、5A9、3H8,其效价分别为1∶1280、1∶1280、1∶2560、1∶320、1∶160和1∶80。结果表明:6株单抗与11株鮰爱德华菌黄颡鱼分离株均可以结合,与迟缓爱德华菌、气单胞菌、大肠杆菌、链球菌、弧菌等10株参考菌株均无交叉反应,单抗5D11和1B8可与鮰爱德华菌参考菌株结合。应用免疫荧光和免疫组织化学法检测了鮰爱德华菌对黄颡鱼的侵染规律。结果表明:黄颡鱼经人工注射鮰爱德华菌A86感染6 h后,在其肝、肾、脾、心、肠和胃中检测到了阳性细菌,其中脾脏中最多,心脏中最少;感染24 h后,脑中检测到阳性细菌;30 h后,鳃中显示有阳性信号;54 h后,在眼的外边缘检测到少量阳性细菌。研究结果可为进一步研究鮰爱德华菌在黄颡鱼体内的致病机理提供技术手段及基础,对揭示黄颡鱼"红头病"的发病机制具有重要意义。
- 李强黄华张显昱叶仕根李华
- 关键词：黄颡鱼红头病单克隆抗体
- 单克隆抗体在水产病原微生物检测中的应用被引量：4
- 2012年
- 随着水产养殖集约化程度的提高,病原微生物对水产养殖的危害日益严重,主要以细菌和病毒的危害性最大。单克隆抗体的出现,对生物学各个领域产生了巨大而深远的影响,其在水产养殖中也发挥了巨大的作用。对近几年来单抗在水产病原微生物检测中的应用进行了概述。
- 黄华杜天舒李强王轶南李华
- 关键词：单克隆抗体水产细菌病毒
- 鮰爱德华菌黄颡鱼分离株外膜蛋白的抗原性分析被引量：6
- 2011年
- 以黄颡鱼"红头病"致病菌——鮰爱德华菌(Edwardsiella ictaluri)A86作为实验菌株,通过十二烷基肌氨酸钠(Sarkosyl)抽提并结合超速离心的方法提取主要外膜蛋白(OMPs),SDS-PAGE图谱分析结果显示,OMPs主要有6条条带,相对分子质量分别为45 000、42 000、41 000、36 000、30 000和22 000。用A86 OMPs免疫新西兰大白兔,获得多克隆抗体22 mL,抗体效价为1∶20 480,抗体按照1∶2 560稀释时具有较高的特异性,仅与迟缓爱德华菌(E.tarda)、海豚链球菌(Streptococcus iniae)和创伤弧菌(Vibrio vulnificus)存在微弱的交叉反应,与鮰爱德华菌参考株及不同地区的分离株呈现特异性结合。多克隆抗体与OMPs的免疫印迹结果显示,主要有2条明显的免疫反应发色带,相对分子质量分别为36 000和30 000,且36 000蛋白染色最为明显。多克隆抗体与包括菌株A86在内的分离自南北方不同地区的10株鮰爱德华菌全菌免疫印迹试验发现,所有受检菌株反应结果相同,主要有4条明显的反应条带,相对分子质量分别为106 000、54 000、36 000和30 000,其中36 000和30 000两条蛋白带染色最深。因此,认为从黄颡鱼体内分离的鮰爱德华菌OMPs中36 000和30 000蛋白具有很好的免疫原性,36 000蛋白尤甚。
- 李强刘海燕黄华李华
- 关键词：黄颡鱼外膜蛋白抗原性
- 鮰爱德华菌单克隆抗体的制备及两种快速检测方法的建立
- 本实验用福尔马林灭活的鮰爱德华菌(Edwardsiella ictaluri)1×109 cells/ml作为抗原,免疫Balb/C小鼠.取小鼠的脾细胞与同系小鼠的骨髓瘤细胞进行细胞融合,通过Dot-ELISA...
- 李强黄华李华
- 关键词：单克隆抗体DOT-ELISA
- 两种鮰爱德华菌ELISA快速检测方法的建立与应用被引量：3
- 2013年
- 为了对水产动物致病菌鮰爱德华菌进行早期、快速地检测,以鮰爱德华菌单克隆抗体5D11作为检测抗体,分别建立了间接ELISA和竞争ELISA两种快速检测鮰爱德华菌的方法,并用棋盘滴定法进行了条件的优化。结果显示,间接ELISA实验中采用37℃过夜这种包被方法能有效促进酶标板对细菌的吸附作用,单克隆抗体和二抗的最佳稀释倍数分别为1∶80和1∶1 000,病原菌的检测灵敏度为5×106cells/mL,交叉反应实验证明该方法特异性强,并且可用于对鮰爱德华菌标准菌株及其分离株的快速检测;同时采用棋盘滴定法确定了竞争ELISA实验中包被抗原-抗体最佳工作组合为5×108～1∶80、抗体和竞争抗原比例为3∶7,并制作出了相关系数为0.990 1的标准曲线,该方法特异性强,最低检出限106cells/mL,可在一定范围内对鮰爱德华菌进行定性和定量检测,弥补了间接ELISA的不足。
- 张显昱李强李明黄华叶仕根李华
- 关键词：间接ELISA竞争ELISA
