- 日本血吸虫Nanos样蛋白基因的获得、表达及初步鉴定
- 2011年
- 目的获得日本血吸虫Nanos样蛋白基因的cDNA序列,克隆、表达和纯化原核蛋白并初步鉴定。方法应用PCR法扩增获得日本血吸虫Nanos样基因的完整开放阅读框(ORF),将该基因亚克隆到原核表达载体pET28a(+),诱导表达并纯化融合蛋白。用纯化后的蛋白免疫家兔,制备该蛋白的多克隆抗体,分别用ELISA和Western blot法对表达蛋白进行初步鉴定。结果该基因为日本血吸虫的一个新基因,其编码序列的ORF为672 bp,编码223个氨基酸,理论相对分子量为25 ku;半定量RT-PCR技术分析显示该基因在日本血吸虫的虫卵及各期虫体有不同的表达量;成功构建了该基因的重组表达质粒pET28a(+)-SjNanos,并在大肠埃希菌中获得表达,Western blot分析表明该重组蛋白具有较好的免疫原性。结论获得日本血吸虫Nanos蛋白编码基因的全长ORF,在大肠杆菌中克隆表达了日本血吸虫Nanos样基因,并制备了特异性多克隆抗体,为进一步研究其在日本血吸虫生殖生物学中的功能奠定了基础。
- 赵前峰陈红霞任翠平刘淼沈际佳
- 关键词：日本血吸虫原核表达
- CARex和PTDtat基因重组5型腺病毒的包装及鉴定
- 2013年
- 目的分别构建和包装携带CARex基因、PTDtat基因、CARex和PTDtat融合基因的重组腺病毒。方法采用基因重组技术将CARex基因、PTDtat基因、CARex和PTDtat融合基因克隆在腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV,经过Pme I线性化后转化BJ5183感受态细胞,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组,构建重组腺病毒质粒pAd-CARex、pAd-PTDtat、pAd-CARex-PTDtat,然后转化DH5α感受态细胞,大量制备重组腺病毒质粒,经过Pac I线性化后回收,在脂质体介导下转染293A细胞,通过倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达来确定病毒在细胞内复制,当细胞发生病变时证明病毒包装成功。结果在293A包装细胞系中成功包装携带CARex、PTDtat、CARex和PTDtat基因的重组5型腺病毒,倒置荧光显微镜观察到明显的GFP表达,PCR检测表明包装病毒含有目的基因,半数培养组织感染量(TICD50)显示重组腺病毒具有较高的滴度。结论成功包装了pAd-CARex、pAd-PTDtat、pAd-CARex-PTDtat重组腺病毒,为进一步探讨CARex和PTDtat基因对腺病毒感染肿瘤细胞效率的影响奠定了实验基础。
- 陈红霞赵前锋周海胜刘淼任翠平沈际佳
- 关键词：CAREX同源重组重组腺病毒载体
- 提高腺病毒载体的感染效率的研究进展
- 2013年
- 人类腺病毒(adenovirus,Ad)常作为肿瘤治疗的溶瘤细胞介质或抑瘤基因递送载体,其中最为常用的就是腺病毒5型(Ad5)。然而Ad感染效率主要依赖于瘤细胞表面柯萨奇-腺病毒受体(CAR)的表达水平,而许多癌症细胞低表达CAR,这就限制了Ad对这些癌症治疗效果。本文就近年来有关如何提高Ad转基因效率的方法进行了综述。
- 陈红霞沈际佳
- 关键词：腺病毒基因治疗CAR重组腺病毒
- 携带CARex和PTDtat的重组5型腺病毒的获得及其对日本血吸虫童虫感染效率的研究
- 目的RNAi已经成为生物体基因功能分析的非常重要的工具，虽然有文献报道成功地将dsRNA通过浸泡或电穿孔方法导入血吸虫各期达到基因沉默作用，然而这一技术在血吸虫研究应用中目前仍然存在一些问题，包括如何高效的将dsRNA、...
- 陈红霞
- 关键词：腺病毒CAREX日本血吸虫童虫
- 文献传递
