陈南颖
- 作品数：10 被引量：7H指数：2
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- 发文基金：国家自然科学基金国家重点实验室开放基金国家绒毛用羊产业技术体系建设专项更多>>
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- 捻转血矛线虫Hc38基因部分功能域的原核表达与鉴定
- 2012年
- 为原核表达捻转血矛线虫Hc38基因的保守结构域,本研究参照GenBank中Hc38基因序列设计引物,扩增出Hc38基因的保守结构域序列,命名为HcP,将其克隆到表达载体pET32a中,并转化到大肠杆菌BL21中,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE和western blot结果表明,HcP基因在大肠杆菌中高效表达,表达的重组蛋白分子量约为49.4 ku,并且表达产物能够与感染捻转血矛线虫的山羊血清产生特异的免疫印记条带,具有良好的反应原性。
- 陈南颖何延华王新华薄新文张兴亚
- 关键词：捻转血矛线虫原核表达保守结构域
- 捻转血矛线虫Hc38重组蛋白的表达纯化及抗原性鉴定被引量：1
- 2011年
- 【目的】通过表达和纯化捻转血矛线虫新功能基因Hc38最大开放阅读框ORF1,确定完整的Hc38蛋白天然表达形式、分子量大小和免疫学活性鉴定,为研究该基因功能和基因工程应用奠定基础。【方法】参照本实验室在GenBank上登录的捻转血矛线虫ZJ株的Hc38基因序列(AY594263)设计引物,PCR扩增目的基因并克隆到表达载体中,重组表达载体转化大肠杆菌后IPTG诱导表达,SDS-PAGE和薄层扫描检测分析表达产物,通过亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western bloting和ELISA方法检测其抗原性。【结果】Hc38基因在大肠杆菌中高效表达,表达的融合蛋白相对分子量约为68 KD,表达量占菌体蛋白总量的30%,亲和层析柱纯化出目的蛋白,并能被捻转血矛线虫病绵羊阳性血清和重组表达产物免疫小鼠血清识别,具有反应原性。【结论】实现了Hc38基因的原核表达和纯化,验证了Hc38基因在虫体内的表达形式和抗原性。
- 何延华王新华薄新文陈南颖张兴亚康立超
- 关键词：捻转血矛线虫
- 副猪嗜血杆菌分离方法的探索及临床病料的分离
- 2011年
- 以猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,App)标准菌株1、2、7型为研究对象,对其生长特性以及部分药物敏感性进行试验,探索副猪嗜血杆菌的分离培养方法。试验证明,在加入40μL/mL自制V因子脑心浸液培养基中App生长速度极快,6 h即有简单菌落形成,18 h后长成圆形灰白色半透明的黏液样小菌落,在麦康凯培养基上不生长,绵羊血琼脂上有溶血现象。同时实验还发现,在培养基中添加50μg/mL万古霉素或375μg/mL林可霉素可有效抑制革兰阳性菌及部分革兰阴性菌的生长,可以提高分离效率。采用以上培养基对北疆地区部分猪场采集的肺脏、鼻拭等进行细菌的分离鉴定,结果分离到2株副猪嗜血杆菌(Hps)。
- 刘麟陈南颖
- 关键词：APP选择培养基
- RNA干扰及其在寄生线虫研究中的应用
- 2011年
- RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)是一种基因沉默技术,它通过特异性降解靶序列的mRNA而引起转录后基因沉默(post transcriptional gene silence,PTGS),该技术现已广泛应用于基因组功能和某些疾病的基因治疗研究。作者就RNAi的产生机制、作用特点、研究策略及其在寄生线虫研究中的应用情况等方面作一阐述。
- 陈南颖何延华薄新文王新华
- 关键词：RNA干扰寄生线虫
- 捻转血矛线虫Hc38基因保守结构域的原核表达及基于RNAi的功能初步研究
- 捻转血矛线虫（Haemonchuscontortus）属毛圆科（Triehostrongylidae）血矛属（Haemonchus）线虫，分布较广。寄生于反刍动物第四胃和小肠，因吸血可导致宿主贫血和衰弱，引起幼龄动物，尤...
- 陈南颖
- 关键词：捻转血矛线虫免疫学方法保守结构域原核表达SIRNA介导
- 文献传递
- Hc38基因沉默对捻转血矛线虫L3期幼虫发育的影响被引量：2
- 2013年
- 通过研究Hc38基因对捻转血矛线虫L3期幼虫发育的影响,探索Hc38基因功能,为利用该基因防治捻转血矛线虫的进一步研究提供依据。针对Hc38基因序列设计并合成特异性dsRNA和siRNA,采用浸泡的方法对捻转血矛线虫L3期幼虫进行RNA干扰(RNAi)试验,利用实时荧光定量PCR分析Hc38基因在L3期幼虫中的转录抑制效果,同时将dsRNA和siRNA浸泡24h后的L3期幼虫感染绵羊,研究Hc38基因的沉默对捻转血矛线虫L3期幼虫在绵羊体内发育的影响,定期采集绵羊粪便检查虫卵数,30d后剖检绵羊皱胃,检查荷虫数的变化。实时荧光定量PCR检测表明,各试验组Hc38基因的相对含量显著低于对照组(P<0.01),浸泡72h后,Hc38-dsRNA组和Hc38-siRNA组Hc38基因的表达量分别仅为对照组的32.27%和14.93%。绵羊体内干扰沉默效果显示,试验组Hc38干扰组虫卵减少率最高,为50%,减虫率最高,为48.6%。通过浸泡法导入的dsRNA和siRNA均能有效抑制Hc38基因的转录,同时Hc38基因的沉默与幼虫的发育密切相关,为捻转血矛线虫及其他寄生线虫的基因功能研究提供一种新的方法。
- 何延华王新华薄新文陈南颖张平张兴亚韩猛立黄新康立超
- 关键词：捻转血矛线虫RNA干扰发育
- siRNA介导的捻转血矛线虫Hc38基因沉默条件的优化
- 2013年
- 将体外孵育的L3期幼虫分别在无血清和添加5%血清的生理盐水、PBS、EBSS(Earles balanced salt solution)中浸泡培养72h,根据L3期幼虫的生存状态确定最佳浸泡条件;然后分别用2.5%和5%的Lipofectamine 2000进行转染,根据转染效果确定转染试剂最佳浓度;最后分别用终浓度30,60,90,120nmol/L的siRNA浸泡24,48,72h,real-time PCR检测干扰效果,确定siRNA最佳浓度。结果表明,L3期幼虫在添加5%血清的EBSS中生存状态最好,采用5%的Lipofectamine 2000进行转染可以得到85%的转染效率,而用90nmol/L的siRNA浸泡72h,干扰效率可以达到85%以上。本研究对siRNA介导的捻转血矛线虫Hc38基因沉默条件进行了优化,为建立稳定的寄生虫功能基因沉默体系提供实验基础。
- 何延华陈南颖王新华薄新文韩猛立
- 关键词：SIRNARNA干扰捻转血矛线虫
- 扩展莫尼茨绦虫烯醇化酶基因的原核表达及抗原性鉴定被引量：3
- 2012年
- 为表达扩展莫尼茨绦虫(Moniezia expansa)的烯醇化酶(Enolase),本研究采用RT-PCR方法以M.expansa组织总RNA为模板扩增enolase基因,将其克隆到原核表达载体pET-28a中,并转化BL21(DE3)感受态细胞,以IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE结果显示表达的重组Enolase约为47 ku。Western blot分析表明,天然蛋白能够被重组表达产物免疫小鼠的血清识别,出现两条免疫印记条带,即天然蛋白以两种形式(约47 ku和40 ku)存在,并具有抗原性,为该蛋白功能研究奠定了基础。
- 夏党荣陈南颖马勋薄新文何延华康立超
- 关键词：扩展莫尼茨绦虫原核表达抗原性
- 应用RNA干扰技术抑制捻转血矛线虫Hc38基因转录的研究
- 2012年
- 为研究RNA干扰对捻转血矛线虫Hc38基因转录的抑制作用,针对Hc38基因序列设计并合成特异性dsRNA、3对siRNAs(siRNA1,siRNA2,siRNA3),采用浸泡方式分别将dsRNA、siRNAs导入捻转血矛线虫感染性L3期幼虫体内,利用实时荧光定量PCR分析Hc38基因在L3期幼虫中的相对含量以确定抑制效果。通过体外转录成功获得高浓度和高纯度的dsRNA,L3期幼虫经浸泡处理3d后,siRNAs组Hc38基因的相对含量分别为(14.93±1.75)%、(26.34±2.91)%和(15.86±2.54)%,dsRNA组为(32.27±1.50)%,均显著低于对照组。表明通过浸泡法导入的dsRNA和siRNAs均能有效抑制Hc38基因的转录,从而为捻转血矛线虫及其他寄生线虫的基因功能研究提供了一种新的方法。
- 陈南颖何延华王新华薄新文韩猛立张兴亚
- 关键词：捻转血矛线虫RNA干扰浸泡
- 牛病毒性腹泻病毒结构蛋白基因的克隆及其B细胞抗原表位的预测被引量：1
- 2012年
- 【目的】以免疫信息学和反向疫苗学为理论根据,应用生物信息学相关软件和方法,对BVDV结构蛋白(Structural Protein,SP)的二级结构的不同方面及其B细胞表位进行了预测,综合评价了BVDV结构蛋白的抗原特异性细胞表位,并计算出一些潜在的抗原位点。【方法】利用RT-PCR扩增法获得牛病毒性腹泻病毒结构蛋白序列,通过克隆、测序分析结构蛋白基因的基因组序列和蛋白序列,采用DNAStar Protean软件对结构蛋白的二级结构、可塑性、亲水性、表面可及性及抗原指数等参数进行综合分析,并预测其B细胞的抗原表位分布。【结果】P14、gp48和gp53蛋白含有的细胞优势抗原表位较多,有的甚至有可能成为优势抗原表位或对优势抗原表位有协同作用。【结论】与已鉴定的B细胞抗原表位相比,试验所用方法预测的结果有较高的准确度,是一种较为先进的表位研究方法。
- 何延华黄新薄新文钟发刚韩猛立陈南颖王新华
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒结构蛋白B细胞表位
