- 细胞周期末期促进复合物及其调节亚基Cdh1在缺血性脑损伤中的作用被引量：1
- 2009年
- 研究认为泛素-蛋白酶体系统与细胞周期成分在脑缺血后神经元凋亡及胶质细胞增殖活化中起着重要作用。细胞周期末期促进复合物（anaphase promoting complex，APc）及其调节亚基Cdh1是联系细胞内泛素．蛋白酶体系统与细胞周期成分的中间枢纽，是细胞周期进程调控的关键蛋白。现就APC-Cdh1在缺血性脑损伤中的作用作一综述。
- 邱瑾钱巍张传汉
- 关键词：脑缺血胶质细胞细胞周期蛋白
- 永生化神经前体细胞治疗大鼠局灶性脑缺血的实验研究
- 2008年
- 目的探讨永生化神经前体细胞（INPC）移植对局灶性脑缺血大鼠神经功能的影响及移植细胞在模型大鼠脑内的存活以及分化情况。方法雄性sD大鼠24只，均采用线栓法建立大脑中动脉缺血（MCAO）模型，随机分为2组（每组12只）：脑缺血对照组、INPC移植组。缺血后3d通过立体定位注射方法分别将等体积的磷酸盐缓冲液、5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记的INPC悬液注射到2组大鼠纹状体缺血半暗带区。缺血再灌注后对大鼠进行神经损害严重程度评分（NSS）。细胞移植后1和4周分别随机处死2组大鼠各6只，取脑组织制作冰冻切片，通过免疫荧光双标技术检测BrdU、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）双阳性细胞和BrdU、神经元特异性烯醇化酶（NSE）双阳性细胞，观察INPC在移植区域的存活及分化情况。结果脑缺血对照组与INPC移植组比较，细胞移植前后各时点的NSS评分差异均无统计学意义（均P〉0．05）。INPC移植组细胞移植后1及4周，均可在移植针道附近及缺血灶周围检测到聚集较明显的BrdU免疫荧光染色阳性的植入细胞，并观察到BrdU染色阳性细胞扩散至全脑，免疫荧光双标技术检测见部分细胞为BrdU、GFAP双阳性的星形胶质细胞或BrdU、NSE双阳性神经元。结论INPC可在局灶性脑缺血大鼠脑内存活并分化为神经元和星形胶质细胞。
- 钱巍姚文龙祝畅柳璐桂伶俐刘志恒张传汉
- 关键词：抗原干细胞脑缺血
- 大鼠脊髓部分横切损伤后APC-Cdh1在损伤脊髓组织中的表达被引量：1
- 2009年
- 目的观察大鼠脊髓部分横切损伤后损伤脊髓组织中APC-Cdh1 mRNA的表达变化,探讨APC-Cdh1在脊髓损伤修复中的作用。方法建立成年SD大鼠脊髓部分横切模型(T_(10)～T_(11)),将40只成年雄性SD大鼠随机分成对照组和模型组,于损伤后不同时间点按实验性脊髓损伤神经功能综合评分标准进行CBS评估,采用实时荧光定量PCR检测损伤区脊髓组织APC-Cdh1 mRNA的表达,并用免疫组化染色检测Cdh1表达的部位。结果对照组和模型组术后不同时间点CBS评分差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,术后第1天Cdh1 mRNA表达减少(P<0.05),术后第7天显著升高(P<0.05),术后第14天又降低(P<().05)。免疫组化检测结果显示在脊髓前角和后角中有大量APC-Cdh1表达。结论 APC-Cdh1在损伤脊髓组织中大量表达,表明其可能参与脊髓损伤修复的病理生理过程。
- 祁月红钱巍李平姚文龙邱瑾张传汉
- 关键词：脊髓损伤
- 大鼠全脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡及认知功能的研究被引量：4
- 2010年
- 目的探讨大鼠脑缺血再灌注海马神经元凋亡及认知功能变化。方法雄性SD大鼠60只,随机分成假手术组(SH组)、模型组(IR组)。模型组采用4-VO法建立SD大鼠全脑缺血模型,不同时间点进行水迷宫测试。TUNEL法检测海马CA1区凋亡细胞。结果尼氏染色显示,与假手术组间比较,缺血组海马CA1区神经元数量显著下降(P<0.01);TUNEL法检测显示:与假手术组相比,凋亡指数显著增加(P<0.01)。Morris水迷宫检测,与假手术组相比,模型组大鼠学习阶段寻台时间明显延长,而其记忆测试潜伏期也明显长于假手术组。结论大鼠全脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡显著增加,认知功能明显下降。
- 陈志则钱巍祁月红张雪张传汉
- 关键词：脑缺血再灌注损伤凋亡
- 局灶性脑缺血大鼠永生化神经前体细胞移植的可行性被引量：2
- 2006年
- 目的:观察局灶性脑缺血大鼠移植永生化神经前体细胞在脑内的存活情况,为进一步研究细胞移植及转基因治疗脑缺血提供有意义的数据及图像资料。方法:实验于2005-10/2006-03在华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学实验室进行。①选取健康雄性SD大鼠18只,随机数字表法分为假手术组、脑缺血对照组、细胞移植组,6只/组。②脑缺血对照组、细胞移植组采用线栓法建立大鼠右侧大脑中动脉缺血模型。假手术组仅分离血管,不进行脑缺血处理。③应用无血清Neurobasal培养基进行INPC培养,移植前加入BrdU,使终浓度为10μmol/L,标记3d,然后取出细胞爬片,无水甲醇固定10min,SP法检测BrdU标记细胞阳性率。④将BrdU标记3d的永生化神经前体细胞用胰蛋白酶消化,离心重悬后使细胞密度达到2×1010L-1,细胞移植组于大鼠脑缺血后3d取5μL永生化神经前体细胞移植到右侧纹状体缺血半暗带区,以前囟为零点,即A:-0.5mm,R:2.5mm,V:-4.5mm。脑缺血对照组仅注射等量磷酸盐缓冲液。⑤各组分别于缺血后6h,1d,3d及细胞移植后1周对大鼠进行Longa神经功能评价(0～4分,分数越高表示神经功能损伤越严重),缺血后6h神经功能评分≥1分视为模型成功。⑥细胞移植后1周处死各组大鼠,取脑组织制作冰冻切片,通过免疫组织化学SP法检测BrdU的表达,观察移植的永生化神经前体细胞在脑内缺血半暗带区的存活情况。结果:18只大鼠均进入结果分析。①体外检测移植细胞BrdU标记阳性率:永生化神经前体细胞加入BrdU标记3d后,免疫组化检测阳性细胞胞核呈棕黄色,细胞阳性率达95%以上。②造模后不同时间点各组大鼠神经功能评价:缺血后6h,脑缺血对照组与细胞移植组每只大鼠神经功能Longa评分均≥1分,表明造模成功,且Longa评分均明显高于假手术组[(1.70±0.48)分,(1.60±0.52)分,0分,P<0.05]。缺血后6h,1d,3d及细胞移植后1�
- 姚文龙张传汉钱巍祝畅桂伶俐刘志恒
- 关键词：干细胞脑缺血
- 原代缺氧缺糖损伤神经元模型Cdh1及其下游底物的表达被引量：1
- 2015年
- 背景:课题组前期实验已证实Cdh1在大鼠海马、皮质均有大量表达,且体外实验发现神经元中Cdh1表达高于神经干细胞,可能与神经干细胞向神经元分化有关。但细胞周期末期促进复合物调节亚基Cdh1在缺血性神经元损伤中的作用,尚不明确。目的:体外构建原代缺氧缺糖损伤神经元模型,观察Cdh1及其下游底物表达变化。方法:取出生24 h内乳鼠大脑皮质,体外培养原代神经元并通过免疫荧光染色进行鉴定。使用无糖Earle’s液替代细胞培养液,利用三气培养箱充以氮气建立原代神经元缺氧缺糖模型,缺氧处理1 h后复氧。于缺氧前、缺氧缺糖损伤后6 h、1 d,3 d,7 d采用实时荧光定量PCR检测神经元Cdh1及其下游底物Skp2、Cyclin B1的表达。结果与结论:体外缺氧缺糖损伤后,原代神经元Cdh1及其下游底物Cyclin B1表达上调(P<0.05),Skp2表达均下调(P<0.05)。提示,体外缺氧缺糖损伤后神经元Cdh1表达升高,可能通过泛素化降解Skp2参与缺氧性神经元凋亡等病理过程。
- 钱巍邱瑾祁月红姚文龙张雪张传汉
- 关键词：CDH1缺氧缺糖
- APC-Cdh1在中枢神经系统中的表达分布特点被引量：4
- 2009年
- 目的:探讨细胞周期末期促进复合物(APC)-Cdh1在中枢神经系统中的表达分布特点.方法:取健康成年雄性SD大鼠脑组织制作冰冻切片,免疫组化染色检测Cdh1的表达部位;免疫荧光双标检测Cdh1表达的细胞定位情况.取出生24h内乳鼠,原代培养神经元及神经干细胞,免疫组化检测NeuN进行神经元鉴定;Nestin染色进行神经干细胞初步鉴定;采用GFAP,MAP2免疫组化染色鉴定NSC分化特性.分别提取神经干细胞与神经元总RNA,采用实时定量PCR检测APC2个调节亚基Cdh1与CDC20的表达.结果:大鼠脑片免疫组化DAB染色显示Cdh1在海马、皮层均有大量表达,免疫荧光双标显示Cdh1表达主要定位于神经元中,星形胶质细胞表达较少.与神经干细胞相比,神经元中Cdh1 mRNA表达升高[(1.00±0.05)vs(2.10±0.07),P<0.05],但CDC20 mRNA几乎没有表达(1.00±0.04,0.02±0.01,P<0.05).结论:APC-Cdh1在大鼠脑组织中有大量表达,主要定位于神经元,且神经元中Cdh1表达高于神经干细胞.
- 姚文龙张传汉钱巍邱瑾柳璐祝畅桂伶俐
- 关键词：神经元神经干细胞
- 脊髓损伤后大鼠Cdh1 mRNA表达的变化被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨大鼠脊髓损伤(SCI)后损伤区脊髓组织Cdh1 mRNA的表达变化。方法:32只雄性SD大鼠随机分成对照组(C组)、SCI组(M组),每组16只。M组采用改良Allen打击法建立SCI模型;C组行假手术,仅暴露脊髓。术后第l、3、5、7天对大鼠后肢运动功能采用Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分进行评估;取损伤节段脊髓,提取组织总RNA,采用实时荧光定量PCR检测损伤区脊髓组织Cdh1 mRNA的表达。结果:术后各时点M组BBB评分均低于C组(P<0.05)。术后各时点C组Cdh1 mRNA表达比较,差异无显著性意义,M组Cdh1mRNA表达逐渐降低(P<0.05)。与C组相比,M组术后第1天Cdh1 mRNA的表达增加(P<0.05),术后第5、7天Cdh1mRNA的表达减少。结论:大鼠SCI后损伤区脊髓组织Cdh1 mRNA表达降低,提示APC-Cdh1可能参与SCI后的病理生理过程。
- 李平姚文龙钱巍张传汉
- 关键词：脊髓损伤基因表达
- 表达大鼠Cdh1基因的重组慢病毒载体的构建及鉴定
- 2012年
- 目的构建表达大鼠Cdh1基因的重组慢病毒载体。方法根据大鼠Cdh1基因的核苷酸序列，合成目的基因片段并亚克隆到慢病毒表达载体pGC-FU的AgeI酶切位点间，命名为pGC-FU-Cdh1。对pGC-FU-Cdh1进行PCR扩增及测序鉴定。将293T细胞按完全随机法分为实验组（每组3只）及对照组（每组3只），分别将pGC-FU-Cdh1及空质粒pGC-FU以脂质体法转染至293T细胞，倒置荧光显微镜观察后，Western blot法检测Cdh1-GFP的表达情况，慢病毒载体LV-Cdh1的包装浓缩及滴度测定。结果重组慢病毒表达载体pGC-FU-Cdh1经PCR扩增鉴定及测序鉴定均显示有特异性基因片断，证明大鼠Cdh1基因正向插入慢病毒表达载体pGC-FU中；转染293T细胞后，Westernblot法检测到实验组有外源性融合蛋白Cdh1-GFP的表达（每组3只），对照组无Cdh1-GFP的表达（n=0）（P=0．014）；慢病毒载体LV-Cdh1包装浓缩后，Reahime PCR法测定滴度为2E＋8TU／ml。结论成功构建表达大鼠Cdh1基因的重组质粒pGC-FU-Cdh1，并包装为慢病毒，为进一步研究Cdh1功能及基因治疗奠定了基础。
- 邱瑾姚文龙钱巍张传汉
- 关键词：细胞周期蛋白慢病毒转基因技术
- APC-Cdh1在体内外神经元缺氧损伤中的作用
- 研究背景和目的:
缺血缺氧性中枢神经系统损伤在临床常见，包括心搏骤停、失血性休克等引起的全脑缺血，以及栓塞、血栓形成引起的局灶性脑缺血等。神经元对缺氧缺血十分敏感，缺血即时损伤和继发的免疫炎症反应、钙超载、自由基损...
- 钱巍
- 关键词：脑缺血神经元星形胶质细胞RNA小干扰
