迭小红 作品数:19 被引量:44 H指数:4 供职机构: 重庆医科大学附属儿童医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 重庆市自然科学基金 重庆市卫生局科研项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 更多>>
siRNA沉默Id1基因对小鼠骨肉瘤细胞增殖、迁移及凋亡的影响 被引量:5 2015年 目的 探究沉默分化抑制因子1 (Id1)表达对小鼠骨肉瘤(K7M2-WT)增殖、迁移及凋亡的影响及可能的分子机制,为骨肉瘤的治疗提供新的靶点.方法 实验分3组,空白对照组(Control组),细胞未做任何处理;siRNA组重组腺病毒组(AdsiRNA组),用带表达红色荧光蛋白基因的空载体腺病毒感染细胞;simId1重组腺病毒组(AdsimId1组),特异性针对小鼠Id1基因的小干扰RNA重组腺病毒感染细胞.按分组分别处理K7M2-WT,用RT-PCR、Western bolt检测Id1的mRNA水平及蛋白水平表达,MTT法检测细胞增殖,划痕试验、Transwell检测细胞迁移能力,DAPI染色检测凋亡.结果 AdsimId1感染K7M2-WT 3d能沉默骨肉瘤细胞Id1基因mRNA及蛋白水平的表达.MTT显示Control组、AdsiRNA组和AdsimId1组OD值分别为0.520±0.032、0.490±0.010、0.220±0.006.沉默Id1基因抑制K7M2-WT细胞的增殖,相对Control组及AdsiRNA组抑制率分别为58%和55%(P<O.05).细胞划痕实验结果提示AdsimId1组细胞的迁移较Control组、AdsiRNA组减慢.Transwell实验结果:AdsimId1组的穿膜细胞数为(44.7±3.7)个,显著少于Control组(100.3±3.8)个及AdsiRNA组(103.8±4.4)个(P<0.05).AdsimId1组细胞凋亡较Control组、AdsiRNA组明显.结论 沉默Id1基因使骨肉瘤细胞增殖和迁移能力减弱,增强骨肉瘤细胞的凋亡,为骨肉瘤治疗提供新的靶点. 迭小红 罗庆 毕杨 罗光金 仇超 刘敏 康权关键词:骨肉瘤 细胞增殖 细胞凋亡 儿童DCD供肝肝移植术后肝动脉并发症的诊治体会 目的 探讨进一步降低儿童DCD 供肝肝移植术后肝动脉并发症的措施.方法 回顾性分析2011 年7 月至2014 年4 月我院完成的17 例儿童DCD 供肝肝移植临床资料.本组供肝符合DCD 器官捐献标准,均由中国人体器官... 刘敏 迭小红 罗光金 康权儿童闭合性肝脏外伤的诊治体会 2014年 目的:探讨儿童闭合性肝脏外伤的诊断及治疗方法。方法:回顾分析本中心6年来收治儿童闭合性肝脏外伤共32例。创伤原因包括车祸伤11例,跌伤9例,钝物挤压及击打伤7例,高处坠落伤5例。根据1989年美国创伤外科学会的分级法,Ⅰ级19例(60%)、Ⅱ级9例(28%)、Ⅲ级3例(9%)、Ⅳ级1例(3%)。28例行保守治疗,4例行手术治疗。结果:28例行保守治疗后痊愈,4例手术治疗行肝脏裂伤修补术,1例术后再次出血手术,皆痊愈出院。结论:儿童闭合性肝脏外伤多数在严密监护及积极保守治疗下均可获得满意的疗效。如何根据儿童生命体征变化及B超、CT等资料判断是否及时中转手术是治疗儿童肝脏外伤的关键,即使并无明显腹腔积血等,如CT提示肝脏裂伤程度较重,也应积极行手术修补裂伤。 刘敏 迭小红 罗光金 康权关键词:儿童 β-catenin协同BMP9诱导骨肉瘤TE85细胞成骨分化 被引量:1 2015年 目的:检测β-连环蛋白(β-catenin)联合骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)对骨肉瘤TE85细胞成骨分化的影响。方法 :采用构建有β-catenin和BMP9基因的重组腺病毒Adβ-catenin和Ad BMP9,单独或联合感染人骨肉瘤TE85细胞,并用半定量RT-PCR法检测β-catenin和BMP9 m RNA在TE85细胞中表达水平的改变;荧光素酶报告基因系统检测β-catenin/TCF4相对活性的变化,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色和读数法分析TE85细胞的早期成骨能力,茜素红染色法检测细胞的晚期成骨能力;半定量RT-PCR法检测骨保护蛋白(osteoprotegerin,OPG)以及晚期成骨分化指标骨钙蛋白(osteocalcin,OC)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)m RNA的表达水平,蛋白质印迹法检测OC和OPN蛋白的表达水平。结果:重组腺病毒Adβ-catenin与AdBMP9感染TE85细胞后能显著提高外源性β-catenin与BMP9 mRNA的表达水平(P值均<0.05),Adβ-catenin能明显增强β-catenin/TCF4的相对活性(P<0.05)。Adβ-catenin与AdBMP9能分别诱导骨肉瘤细胞TE85早期成骨分化指标ALP活性增加(P<0.05),但增加的程度有限;对晚期成骨指标OC和OPN mRNA和蛋白表达以及钙盐沉积无明显上调的作用。Adβ-catenin与AdBMP9联合作用之后,上述各项早晚期成骨指标的表达均显著增强,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论:β-catenin和BMP9单独诱导骨肉瘤细胞TE85成骨分化的能力有限,而联合作用后诱导成骨分化的能力显著增强,β-catenin能协同BMP9诱导骨肉瘤细胞TE85成骨分化。 罗光金 罗庆 毕杨 张璇 迭小红 仇超 刘敏 康权关键词:骨肉瘤 Β-连环蛋白 腺病毒感染 先天性复杂肛门直肠畸形合并脊髓发育异常患儿排便功能的临床研究 被引量:3 2019年 目的探讨脊髓发育异常与先天性复杂肛门直肠畸形(anorectal malformations, ARMs)的关系及其对排便功能的影响。方法回顾性分析2012年10月至2017年2月我科148例经分期手术治疗的ARMs患儿的临床资料,按腰骶部MRI检查结果分为脊髓发育正常组和脊髓发育异常组,分析脊髓发育异常在各类型ARMs中分布的差异及对肛门直肠周围肌肉发育情况、肛门直肠测压和术后排便功能的影响。结果①本组148例ARMs患儿中34例(23.0%)检查结果提示脊髓发育异常,包括终丝脂肪变21例(61.8%)、椎管内脂肪瘤7例(20.6%)、脊髓空洞1例(2.9%)、椎管内囊性占位3例(8.8%)、混合型2例(5.9%);②按照Krickenbeck国际分类法对患儿的肛门直肠畸形进行分型,合并有脊髓发育异常的病例包括肛管直肠狭窄1例(占20.0%)、ARMs不伴瘘管5例(25.0%)、ARMs伴复杂直肠会阴瘘1例(20.0%)、ARMs伴直肠尿道球部瘘8例(22.2%)、ARMs伴直肠尿道前列腺部瘘6例(18.2%)、ARMs伴直肠膀胱颈部瘘1例(25.0%)、ARMs伴直肠舟状窝瘘8例(24.2%)、ARMs伴直肠阴道瘘2例(66.7%)、一穴肛2例(22.2%),各病理类型组间脊髓发育异常比例差异无统计学意义(P=0.874);③145例患儿在术中进行了肛门直肠周围肌肉发育情况评估,其中有26例肛门直肠周围肌肉发育好、105例发育良、14例发育差,脊髓正常组和异常组间肛门直肠周围肌肉发育差异有统计学意义(P=0.005);④44例患儿关瘘术6个月后行肛门直肠测压,脊髓发育正常组和异常组肛管静息压分别为(35.0±14.8)、(27.9±14.3)mmHg(P=0.268),脊髓发育正常组直肠肛管抑制反射(rectoanal inhibitory reflex, RAIR)引出率低于脊髓发育异常组(45.9%vs 71.4%),但差异无统计学意义(P=0.412);⑤按修正的Rintal评分量表随访患儿的排便功能,脊髓发育正常组和异常组间排便功能构成比差异无统计学意义(P=0.416)。结论脊髓发育异常与ARMs肛周肌肉发育情况有关,提示ARMs� 赵焓滨 侯金平 侯金凤 迭小红 孙静 张敏 王佚关键词:肛门直肠畸形 肛门直肠测压 排便功能 骨形成蛋白家族成员2、7对小鼠胚胎肝干细胞分化的体外研究 被引量:6 2013年 目的探讨骨形成蛋白2、7(BMP2、BMP7)对小鼠胚胎肝干细胞(HP14.5)定向诱导分化为肝细胞样细胞的影响。方法将表达BMP2、BMP7、肝细胞生长因子(HGF)和绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒作为4个组分别感染HP14.5,诱导其分化,在病毒感染后的第1、4、7天通过检测荧光素酶报告基因读数,在第7天通过细胞免疫荧光染色,观察肝细胞标志物白蛋白(ALB)的表达情况;并在第4、7、10天通过PAS染色、尿素氮合成功能检测,观察诱导后HP14.5向肝细胞方向的分化成熟度。结果 BMP2组、HGF组荧光素酶读数较GFP对照组明显上升;免疫荧光染色显示,诱导7d后BMP2组、HGF组细胞质内表达肝细胞特有的ALB,而GFP对照组几乎无表达;糖原染色可见BMP2组、HGF组胞质存在紫红色颗粒,呈阳性反应;尿素合成功能检测显示BMP2组、HGF组培养液中尿素氮随时间而升高。BMP7组诱导后,细胞免疫荧光染色、荧光素酶活性、PAS染色和尿素合成检测均呈阴性或弱阳性反应。结论 BMP2具有一定的诱导HP14.5向成熟肝细胞分化的作用,并初步具备肝细胞的合成分泌功能,而BMP7对其无诱导作用。 陈聪 康权 罗庆 迭小红 田雯关键词:骨形态发生蛋白质类 重组腺病毒 骨形态发生蛋白9、6双表达腺病毒载体的构建及其成骨诱导作用 被引量:3 2013年 目的构建双表达骨形态发生蛋白(BMP)9、6重组腺病毒并探讨其对C3H10细胞成骨的影响。方法以单一表达的BMP9或BMP6 AdEasy质粒为模板,PCR自扩增BMP9和BMP6基因序列,先后将其插入穿梭质粒pASG2,获得双表达穿梭质粒pASG2-BMP9、6,然后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183中同源重组,酶切鉴定成功后,转染至HEK293细胞中包装和扩增得到高滴度双表达腺病毒AdBMP9、6,体外转染C3H10细胞,RT-PCR方法检测BMP9、BMP6 mRNA水平的表达,早期成骨指标碱性磷酸酶染色、晚期指标钙茜素红染色检测其成骨作用。结果成功构建双表达重组腺病毒AdBMP9、6,RT-PCR证实双表达腺病毒能成功转染C3H10细胞,并且转染的C3H10细胞早晚期成骨指标碱性磷酸酶染色及钙茜素红染色活性较单一表达BMP9或BMP6的腺病毒组均增强。结论双表达重组腺病毒载体AdBMP9、6具有定向诱导C3H10细胞成骨分化的能力,且较单一表达BMP9或BMP6强。 迭小红 罗庆 陈聪 罗光金 康权关键词:重组腺病毒 成骨 Id1基因对人骨肉瘤细胞恶性逆转向成骨分化的影响 被引量:13 2016年 目的探讨分化抑制因子1(inhibitor of differentiation factor 1,Id1)对人骨肉瘤细胞MG63恶性逆转向成骨分化的影响。方法用重组腺病毒调控MG63细胞中Id1过表达后,RT-PCR及Western blot检测验证Id1的表达情况,CCK-8检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞周期,ALP读数法检测成骨分化早期指标ALP的活力。结果 Ad Id1重组腺病毒可以使MG63细胞中的Id1表达量增高,Adsi Id1重组腺病毒可以使MG63细胞中的Id1表达量降低(P<0.05);Id1过表达后,MG63细胞的增殖能力、迁移能力、侵袭能力等恶性生物学行为均增强,G1期细胞比例降低,Id1表达量下调后则逆转MG63细胞的恶性生物学行为,G1期细胞比例增高(P<0.05);Id1表达量下调后,正常成骨分化的早期指标碱性磷酸酶(ALP)表达量增高(P<0.05)。结论抑制Id1基因表达可以促使骨肉瘤的恶性生物学行为逆转并诱导骨肉瘤细胞发生成骨分化。 仇超 康权 迭小红 罗光金 吕凤香 肖程 罗庆关键词:骨肉瘤 分化抑制因子 增殖 分化 儿童心脏死亡器官捐献供肝肝移植术后肝动脉并发症的诊治体会 被引量:4 2015年 目的探讨进一步降低儿童心脏死亡器官捐献(DCD)供肝肝移植术后肝动脉并发症的措施。方法回顾性分析2011年7月至2014年4月我院完成的17例儿童DCD供肝肝移植临床资料。本组供肝符合DCD器官捐献标准,均由中国人体器官分配与共享系统(COTRs)分配。本组17例受者中胆道闭锁伴胆汁性肝硬化14例,原发性肝硬化失代偿1例,糖原累积症2例。术中14例供肝为全肝,1例供肝为左半肝,2例供肝为劈离肝,均无重要血管及胆道损伤。供体吻合动脉直径0.2~0.5cm,受体吻合动脉直径0.2~0.4cm。结果术后6例发生肝动脉血栓(hepatic artery thrombosis,HAT),经介入或再次肝动脉吻合及微动脉插管持续尿激酶灌注后恢复供血,其中2例分别于术后21d及7d死于严重肺部肺炎克雷白杆菌感染,1例术后7d死于肝动脉血栓形成,1例术后5d死于严重毛细血管渗漏综合征,1例术后23d死于肠漏后感染性休克,1例术后1d死于因凝血功能严重障碍所致的失血性休克,其余11例顺利出院,健康生活至今。结论儿童DCD供肝肝移植术后肝动脉血栓发生率较高,有效的选择肝动脉支进行吻合及良好的动脉吻合技术可以降低肝动脉血栓发生率,对肝动脉栓塞的可疑患儿行剖腹探查、肝动脉介入造影检查及溶栓治疗可有效诊断和治疗肝动脉血栓。 刘敏 罗庆 迭小红 罗光金 康权关键词:肝移植 供体 重组腺病毒介导的骨形态发生蛋白-9对小鼠胚胎肝脏干细胞诱导分化的影响 2012年 目的探讨重组腺病毒介导的骨形态发生蛋白-9(Adv-BMP-9)诱导小鼠胚胎肝干细胞向成熟肝细胞定向分化的影响。方法将已构建的表达BMP-9、肝细胞生长因子(HGF)和绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒,分别感染小鼠胚胎肝干细胞,诱导其分化,然后采用半定量PCR、Real-time PCR、细胞免疫荧光、荧光素酶报告基因检测等方法检测甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)和细胞角蛋白18(CK18)等肝细胞标志物的表达。结果半定量及Real-time PCR检测,诱导7 d后的BMP-9组、HGF组AFP的mRNA表达△△Ct值分别为(0.027±0.003)、(0.023±0.002),较GFP对照组(0.103±0.018)显著下降,ALB的mRNA表达△△Ct值分别(0.041±0.005)、(0.031±0.001),较GFP对照组(0.013±0.002)明显升高,CK18的mRNA表达△△Ct值分别(0.094±0.003)、(0.083±0.007),较GFP对照组(0.040±0.008)明显升高(P<0.05);细胞免疫荧光染色,诱导7 d后的细胞胞浆内表达肝细胞特有的ALB、CK18等蛋白,而对照组几乎无表达;荧光素酶报告基因检测,诱导1、4、7 d的BMP-9组、HGF组的ALB表达荧光素酶A值分别[(5 509.35±213.08),(33 198.14±666.39),(50 815.03±1 730.75)]、[(5 539.25±132.62),(31 400.71±2 622.39),(49 088.28±1 868.03)],较GFP对照组(4 732.49±68.22),(9 407.71±487.84),(20 894.83±1 100.54)明显升高(P<0.05)。结论 BMP-9有诱导小鼠胚胎肝脏干细胞向成熟肝细胞样细胞分化的作用,并且BMP-9对小鼠胚胎肝干细胞的诱导分化作用甚至和传统的肝干细胞诱导分化因子HGF相当。 陈聪 罗庆 毕扬 陈肯 田雯 迭小红 曹光彪 周建武 康权关键词:分化 重组腺病毒