许芳
- 作品数：12 被引量：25H指数：4
- 供职机构：甘肃农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家奶牛产业技术体系项目科技基础性工作专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 某规模化奶牛场牛肺外结核的病理学诊断被引量：4
- 2017年
- 验证牛结核菌素阳性反应牛的结核病变及其病变的组织分布及病变特征,追踪感染源及传播途径,为奶牛场结核检疫净化提供技术支持。在新疆某规模化奶牛场应用牛结核菌素皮内变态反应(SIT)、IFN-γ试验、PPD点眼反应、ELISA抗体检测4种方法联合检疫,综合判定感染牛23头,全部扑杀并进行系统剖检,采集病料,进行病理组织学和细菌学诊断。剖检结果表明,23头牛中14头牛在肝、脾、淋巴结等肺外组织器官发现眼观结核病变而未见肺脏结核病变,仅有2头发现肺脏及肺门淋巴结病变,7头牛在全身组织器官未能发现眼观结核病变;病理组织学检查结果表明,剖检的23头牛均呈现早、中、后期典型结核结节病变,11头牛的病料分离培养到牛分枝杆菌。该奶牛场结核主要表现为肺外结核,经典肺结核较少,这可能是该奶牛场在以往扑杀的阳性牛中很少发现肺脏结核病变的原因。
- 许芳田莉莉刘朋孙翔翔曾巧英刘思当范伟兴
- 关键词：奶牛肺外结核病理学诊断细菌学诊断
- 甘肃省猪香港病毒的巢式PCR检测及VP1基因序列的系统发育分析被引量：2
- 2015年
- 猪香港病毒(PHoV)于2008年在我国香港首次发现,属细小病毒新成员。本研究自甘肃省兰州、张掖、天水市养猪场和屠宰场采集血液样品147份,针对PHoV的VP1基因保守区(GenBank No.EU200677)设计2对引物,用巢式PCR(nPCR)检测PHoV。结果,甘肃省生猪PHoV总阳性率为38.10%(56/147)。其中,12周龄以上猪的阳性率(55.56%)显著高于6周龄以下猪(25.00%)(P<0.05);三地区间的阳性率差异不显著(P>0.05)。从56份阳性样本中挑选具地域代表性的12份,对VP1扩增片段测序(GenBank注册号:JQ177084~JQ177095),并和GenBank中的所有VP1序列一起进行系统发育分析。结果表明,12个VP1片段序列之间的相似性为95.2%~99.0%。其中,JQ177093、JQ177085和JQ177089构成一个独立的分支;其余9株和来自GenBank的12株参考序列均处于另一分支。9株中,JQ177095、JQ177087和JQ177091构成一个亚分支,紧邻罗马尼亚野猪株(JF738366);JQ177086、JQ177090和JQ177094构成第二个亚分支,紧邻香港株HK3;JQ177088、JQ177092和JQ177084构成第三个亚分支,紧邻香港株HK5。12株PHoV的VP1基因片段序列与香港株HK1~HK6的总体相似性为96.7%~99.7%,与罗马尼亚野猪株为95.2%~99.0%。本研究结果表明,源于罗马尼亚野猪株和香港株的PHoV均在甘肃省猪群中高水平流行。
- 黄晓锋潘阳阳许芳曾巧英
- 关键词：巢式PCR基因序列系统发育分析
- 我国部分地区牛结核病调查与牛肺外结核病病原分离鉴定及生物学特性研究
- 牛结核病(bovine tuberculosis,bTB)是一种主要由牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis,M.bovis)感染引起的慢性消耗性人兽共患传染病。该病可通过病牛咳嗽喷出的飞沫或悬浮在空气中的带...
- 许芳
- 关键词：牛结核病牛分枝杆菌肺外结核消化道传播
- 文献传递
- 牛结核病PPD-PE/C-IFN-γ诊断方法的建立
- 以牛分枝杆菌PPDB为刺激抗原的IFN-γ试验(PPDB-IFN-γ)是OIE推荐的牛结核病实验室辅助诊断方法,ESAT-6(PE)和CFP-IO(Pc)蛋白是结核分枝杆菌复合群致病菌株的特异性抗原,其基因在非结核分枝杆...
- 许芳田莉莉曾巧英范伟兴
- 关键词：牛结核病ESAT-6CFP-10
- 牛结核病PPD_B-P_(E-C)-IFN-γ诊断方法的建立
- 2014年
- 对结核分枝杆菌复合群致病菌株的特异性抗原ESAT-6(PE)和CFP-10(PC)分别进行原核表达并纯化。用PPDB、PE、PC和PE-C(PE、PC等量混合)作为4种刺激抗原(以PPDB作为参照),分别体外平行刺激56份已知的牛结核病阳性牛全血和460份阴性牛全血,孵育、收获血浆,采用间接ELISA检测产生的IFN-γ水平。经统计学分析,绘制ROC曲线,分别确定PPDB-IFN-γ、PE-IFN-γ、PC-IFN-γ和PE-C-IFN-γ的阳性判定最佳临界点及其敏感性和特异性;并据此进一步分析PPDB分别与PE、PC或PE-C联用(PPDB-PEIFN-γ、PPDB-PC-IFN-γ、PPDB-PE-C-IFN-γ,串联和并联)的敏感性和特异性。结果显示,PE、PC的分子质量分别为27.8ku和16.4ku;PPDB-IFN-γ的最佳临界点为0.02,其敏感性和特异性分别为94.6%和92.2%,PE、PC、PE-C的最佳临界点相同,均为0.01,其中PE-C-IFN-γ的敏感性和特异性最高,分别为92.9%和95.7%;联用时,PPDB-PE-C-IFN-γ的敏感性和特异性最高,其串联时敏感性和特异性分别为89.3%和96.5%,并联时分别为98.2%和91.3%。PE-C-IFN-γ的敏感性比PPDB-IFN-γ低1.7%,但特异性高3.5%;PPDB-PE-C-IFN-γ并联时,敏感性比PPDB-IFN-γ高3.6%,串联时特异性比PPDB-IFN-γ高4.3%。结果表明,本试验建立的PPDB-PE-C-IFN-γ诊断方法具有高敏感性和高特异性,具有极大的应用价值。
- 许芳曹青张喜悦田莉莉杜鹏飞呼西旦曾巧英范伟兴
- 关键词：IFN-Γ牛结核病ESAT-6CFP-10
- 牛分枝杆菌FixB、HspX和MPB83基因的原核表达及鉴定
- 2017年
- 为了给原核表达牛分枝杆菌Fix B、Hsp X和MPB83基因并纯化Fix B、Hsp X和MPB83蛋白,进一步研究它们在牛结核病诊断中作为特异性抗原的诊断价值及应用奠定基础,试验用PCR方法从牛结核分枝杆菌AF2122/97基因组中扩增出Fix B、Hsp X和MPB83基因片段,构建p ET-28a-Fix B、p ET-28a-Hsp X和p ET-28a-MPB83重组质粒,克隆到DH5ɑ感受态细胞,提取测序正确的阳性重组质粒,转化BL21(DE3)感受态细胞,用1 mmol/L IPTG于37℃诱导表达,SDS-PAGE分析目的蛋白的表达形式,Western-blot分析鉴定并用Ni-NTA层析柱纯化蛋白。结果表明:成功扩增了大小依次约为957 bp、435 bp和663 bp的Fix B、Hsp X和MPB83基因,将其连接p ET-28a原核表达载体,原核表达的Fix B、Hsp X和MPB83重组蛋白均以包涵体形式存在,分子质量依次约为37 ku、21 ku和28 ku。经Western-blot鉴定表达产物为Fix B、Hsp X和MPB83重组蛋白,Ni-NTA成功洗脱出目的蛋白。说明试验成功构建了牛分枝杆菌Fix B、Hsp X和MPB83基因的原核表达载体,并纯化了Fix B、Hsp X和MPB83重组蛋白,可用于进一步的应用研究。
- 陈爽许芳张林波张喜悦范伟兴
- 关键词：牛分枝杆菌HSPX原核表达纯化
- 奶牛肺外结核病的综合诊断与病原分离鉴定被引量：4
- 2017年
- 为揭示牛型提纯结核菌素(PPD)检测阳性牛与剖检肺脏病变不吻合的真实原因,综合运用皮内变态反应(SIT)、比较变态反应(SICCT)、IFN-γ试验,以及牛型PPD点眼反应、ELISA抗体检测等5种免疫学方法,对我国西部5个奶牛场进行牛结核病综合诊断,然后对锁定的后期感染牛进行扑杀、剖检,采集病料进行病理学和病原学诊断。结果显示:用5种方法综合检测确诊的95头后期感染牛中,有84头(88.42%)剖检可见明显结核病变,其中12头(14.29%)的病变发生在肺和肺门淋巴结,72头(85.71%)的病变发生在肝、脾、肠系膜淋巴结等肺外组织器官;95头后期感染牛中,有54头病料培养阳性;阳性菌经Xpert MTB/RIF和Enigma鉴定,均为牛分枝杆菌。该研究结果表明:我国牛结核病存在肺结核和肺外结核两种,因而增加了牛结核病的诊治难度;牛结核病确诊仅靠单一检测方法十分困难,需运用多种免疫学方法进行综合诊断;该结果可以解释目前出现的检测阳性与肺部剖检病变结果不一致的困惑。
- 许芳田莉莉齐亚银孙世雄孙翔翔剡根强曾巧英范伟兴
- 关键词：牛结核病病原学诊断肺外结核
- 甘肃省奶牛副结核分枝杆菌的调查与分离鉴定被引量：6
- 2020年
- 为进一步了解甘肃省某奶牛场牛副结核病的感染情况,采集该场227头奶牛血清进行ELISA抗体检测,结果,检出13头阳性奶牛,阳性率为5.73%。在13头抗体阳性奶牛中随机采集6头表现拉稀症状奶牛的直肠粪便,提取DNA进行荧光定量PCR检测,结果显示,6份粪便样品均为阳性。6份粪便样品用十六烷基氯化吡啶(HPC)处理后接种自行配制的Herrold’s卵黄琼脂培养基,经过7~14周培养得到5株分离菌株。采用IS900特异性序列PCR鉴定和限制性内切酶分析(REA)鉴定,结果表明,5株分离菌株均为副结核分枝杆菌。采用IS1311特异性序列PCR-REA鉴定,结果表明,5株分离菌株均为C型MAP。
- 常塔娜田莉莉许芳樊晓旭孙淑芳范伟兴
- 关键词：副结核病副结核分枝杆菌
- 奶牛肺外结核病的综合诊断与病原分离鉴定
- 为揭示牛型提纯结核菌素（PPD）检测阳性牛与剖检肺脏病变不吻合的真实原因,综合运用皮内变态反应（SIT）、比较变态反应（SICCT）、IFN-γ试验,以及牛型PPD点眼反应、ELISA抗体检测等5种免疫学方法,对我国西部...
- 许芳田莉莉齐亚银孙世雄孙翔翔剡根强曾巧英范伟兴
- 关键词：牛结核病病原学诊断肺外结核
- 文献传递
- 中国部分重点地区牛结核病的γ-干扰素试验流行病学调查被引量：5
- 2014年
- 为调查部分省份牛结核病(bTB)的流行情况,我们在山东等14个省份34个历史上疫情较重的县共129个场户采集牛全血2 201份,采用CO2培养箱或蜡罐方法进行bTBγ-干扰素检测,结果显示样品的个体阳性率为6.4%,群阳性率为42.6%。饲养模式对bTB感染影响的统计显示较大规模场的个体阳性率(6.9%)和群阳性率(60%)均高于散养户(分别为5.7%和35.6%)。而牦牛样品的检测结果均为阴性。5个牛群的禽型PPD阳性统计结果显示牛型PPD阳性率越高,则禽型PPD阳性牛在牛型PPD阳性牛中的所占比率越低。在所有阳性牛群中,阳性率≥10%的牛群所占比例高达81.8%(45/55),bTB感染呈现出一个"群发性"的特征。
- 张喜悦曹瑞杜鹏飞许芳束鸿鹏呼西旦范伟兴
- 关键词：牛结核病流行病学调查
