蔡双虎
- 作品数：79 被引量：205H指数：7
- 供职机构：广东海洋大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学文化科学医药卫生更多>>
- 哈维氏弧菌glyA基因的克隆及原核表达分析被引量：2
- 2020年
- 【目的】哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是存在于海水中的正常菌群,但近几年大密度养殖使它成为海水鱼致病甚至死亡的原因之一。对哈维氏弧菌ZJ0603株中的glyA基因进行克隆及原核表达分析,以期为下一步研制亚单位疫苗奠定基础。【方法】应用PCR技术克隆哈维氏弧菌菌株ZJ0603的glyA基因,并对其编码的丝氨酸羟甲基转移酶(serine hydroxylmethyltransferase,SHMT)进行理化性质、信号肽、亚细胞定位及高级结构分析。将克隆获得的glyA基因与表达载体pET-28a连接构建重组质粒pET-28a-glyA,然后构建BL21-pET-28a-glyA重组菌株,测序后选取正确的菌株用IPTG诱导并对重组蛋白进行Western blot分析鉴定。对表达重组菌株BL21-pET-28a-glyA的表达条件进行优化以获得大量蛋白。【结果】生物信息学分析结果表明,glyA基因全长为1296 bp,共编码431个氨基酸,SHMT的理论等电点为6.18,不稳定系数为28.66,总平均亲水性为-0.200,整体表现为亲水且分布在细胞质中,预期蛋白分子量为46.60 ku。成功构建表达重组质粒pET-28a-glyA并转入表达菌株中,经IPTG诱导后进行Western blot分析,结果表明成功获得了SHMT重组蛋白。【结论】用控制变量法对表达条件优化后发现,IPTG最佳诱导时间、浓度以及温度分别为4 h、0.4 mmol/L和37℃。
- 孙国荣马少鸿韦光本张依琳谭慧明蔡双虎
- 关键词：哈维氏弧菌克隆原核表达
- 一种石斑鱼用中草药免疫增强剂及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种石斑鱼用中草药免疫增强剂及其制备方法和应用，属于水产品养殖技术领域。本发明的石斑鱼用中草药免疫增强剂，包括以下重量份的原料：熟地黄5‑15份、绿豆10‑30份、葛根5‑20份、茯岺1‑10份、甘草1‑10...
- 汤菊芬简纪常蔡佳黄瑜王蓓黄郁葱蔡双虎鲁义善
- 文献传递
- 溶藻弧菌hutB基因的克隆及其在不同铁源下的表达分析
- 2015年
- 根据已发表的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)血红素结合蛋白(Periplasmic Hemin-Binding Protein,HutB)基因序列设计引物,PCR扩增溶藻弧菌HY9901株的hutB基因,序列分析结果显示该基因全长870 bp,共编码289个氨基酸,分子量约为30.59 ku,PI为6.45。细胞定位、SignalP4.0、TMHMM Server 2.0和SoftB erry-Psite预测结果显示,hutB位于外周质中,存在信号肽切割位点,没有跨膜结构域,氨基酸序列含有1个cA MP和cG MP的蛋白激酶磷酸化位点,4个蛋白激酶C磷酸化位点等多个活性位点。系统进化树结果显示,溶藻弧菌hutB与坎氏弧菌(Vibrio campbellii)和哈氏弧菌(Vibrio harveyi)聚为一簇。qR T-PCR技术初步探究hutB在不同铁源下的表达量,结果表明,溶藻弧菌hutB在含有FeC l3的富铁培养基中,表达量与对照组相比差异不显著;在含有血红素的条件下表达量上调;在同时含有2-2'二联吡啶和血红素时上调极显著(P<0.01);在含2-2'二联吡啶的铁限制环境下,表达量下调极显著(P<0.01)。
- 庞欢瑛薛丽丽简纪常蔡双虎鲁义善吴灶和
- 关键词：溶藻弧菌
- 案例教学在水产养殖学专业基础课教学中的应用被引量：4
- 2020年
- 以水产养殖学专业基础课“虾蟹类生物学”为例,从专业基础课教学存在的问题出发,结合案例教学的特点与生产实际,提出水产养殖学专业基础课案例教学的实施策略,以促进学生对知识点的理解与掌握,从而培养学生的创新创业能力。
- 杨世平刘慧玲蔡双虎
- 关键词：案例教学水产养殖专业基础课
- 溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统效应蛋白HY322基因的克隆和生物信息学分析
- 2018年
- 本研究从溶藻弧菌中成功克隆获得HY322基因的编码区序列（GenBank：KX245317.1）,该基因全长969 bp,可编码322个氨基酸,应用生物信息学的方法和工具对溶藻弧菌HY9901效应蛋白HY322的理化性质、蛋白结构、遗传进化关系和抗原特性等方面进行预测和分析。结果表明：HY322蛋白为不稳定的亲水性蛋白,蛋白呈酸性,无跨膜区,无明显的信号肽;二级结构以α螺旋为主,进化分析显示溶藻弧菌HY9901与哈维氏弧菌（V.harveyi）聚为一支,表明在进化关系上最为接近。HY322序列中包含有一个与鞭毛形成有关的Fli N功能结构域。多种参数预测了HY322可能的B细胞抗原优势表位,分别是第32~33、100~102、138~140、215~216、235~238、246~249区段。利用SWISS-MODEL软件,得到了HY322亚基三维模型。本研究从生物信息学角度验证了HY322作为弧菌共同抗原的可行性,为下一步的疫苗研发提供了理论依据。
- 宋大伟庞欢瑛庞欢瑛邱明生蔡双虎林紫薇汤菊芬蔡双虎
- 关键词：溶藻弧菌生物信息学分析
- 溶藻弧菌外膜蛋白OmpU基因克隆、表达及作为亚单位疫苗的应用
- 溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是我国南方海水养殖中重要的病原病之一,其外膜蛋白在细菌致病过程中发挥重要作用,也是目前作为亚单位疫苗的重要候选蛋白.本研究克隆了溶藻弧菌HY9901株外膜蛋白OmpU基...
- 蔡双虎黄郁葱鲁义善简纪常吴灶和
- 关键词：溶藻弧菌疫苗红笛鲷
- 一株具有广谱抑菌活性的解淀粉芽孢杆菌ZJLMBA1908及其应用
- 本发明公开了一株具有广谱抑菌活性的解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)ZJLMBA1908菌株及其应用。ZJLMBA1908菌株于2019年11月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通...
- 李亚蔡双虎柯心如刘登艳刘月廉
- 溶藻弧菌减毒活疫苗的构建及其免疫保护性被引量：4
- 2014年
- 采用Overlap PCR和同源重组技术,结合氯霉素(Cm)正向筛选和sacB基因蔗糖负向筛选,构建了溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)Ⅲ型分泌系统(Type III secretion system,T3SS)注射装置蛋白vscO基因无标记框内缺失突变株ZJ03ΔvscO。在以石斑鱼(Epinephelus coioides)为模型的感染实验中发现ZJ03ΔvscO的毒力较ZJ03下降约150倍。将ZJ03ΔvscO作为减毒活疫苗通过注射、浸泡的途径免疫石斑鱼(Epinephelus coioides)后,发现其对溶藻弧菌有很好的保护效应,其中注射组的免疫保护率达84%,浸泡组次之(68%)。血清效价分析显示,免疫后第4周注射组和浸泡组的效价均达到最高值,分别为1:2 048和1︰128。上述结果表明,所构建的ZJ03ΔvscO减毒活疫苗可有效提高石斑鱼对溶藻弧菌的免疫力,并且免疫和攻毒的途径可能是影响免疫保护效果的因子。本研究旨在为溶藻弧菌引起的鱼类疾病防治提供技术支撑。
- 庞欢瑛周泽军丁燏闫秀英蔡双虎简纪常吴灶和
- 关键词：溶藻弧菌减毒活疫苗免疫保护
- 一种可快速检测罗非鱼无乳链球菌的试剂盒及其制备方法
- 本发明属于试剂盒制备技术领域，公开了一种可快速检测罗非鱼无乳链球菌的试剂盒及其制备方法，所述可快速检测罗非鱼无乳链球菌的试剂盒包括：试剂盒壳体和试剂盒内部组件，所述试剂盒壳体包括试剂盒上壳体与试剂盒下壳体，所述试剂盒上壳...
- 王蓓王忠良黄瑜蔡双虎简纪常
- 文献传递
- 罗非鱼无乳链球菌DNA疫苗的构建及免疫效果研究被引量：5
- 2013年
- 为研究罗非鱼源无乳链球菌重组DNA疫苗对鱼体的免疫保护作用,将Sip基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)构建重组质粒pcDNA-Sip,并以肌肉注射方式免疫吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)。免疫后第7、28天取样,采用PCR及RT-PCR方法检测pcDNA-Sip在各个组织(包括肌肉、脾脏、头肾、鳃及肝脏)中的表达情况;分别于免疫后第7、14、21、28天采集血清,使用ELISA方法检测抗体效价;免疫28d后进行攻毒实验,计算疫苗的免疫保护率。结果表明,重组质粒pcDNA-Sip可以在上述各组织中被检测到;免疫21d后抗体效价出现峰值达1∶5 120;免疫保护率为90%。由此证实,pcDNA-Sip重组质粒可以转染到罗非鱼组织细胞,并可在鱼体中持续表达,同时有较高的免疫保护率。
- 王蓓简纪常蔡双虎黄郁葱汤菊芬吴灶和
- 关键词：无乳链球菌免疫罗非鱼
