蒋磊
- 作品数：10 被引量：18H指数：2
- 供职机构：四川大学华西医学中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程电子电信更多>>
- 魔芋葡甘聚糖(KGM)亲和层析载体在分离纯化生物大分子中的应用
- 蒋磊
- 关键词：金属螯合亲和层析血清白蛋白均匀设计法
- 急性肺栓塞的影像学诊断及其进展被引量：1
- 2005年
- 肺栓塞(pulmonary embolism，PE)是以各种栓子阻塞肺动脉系统为其发病原因的一组疾病或临床综合征的总称。在美国肺栓塞发病每年可达60万，约1／10的患者在发病1小时内死亡，余下的仍有1／3死亡，占人口死因的第三位，仅次于肿瘤和冠心病。我国尚无确切的流行病学资料，但近年来国内报道的病例呈增多趋势，其临床表现多样，有时隐匿，缺乏特异性，影像检查是肺栓塞诊断的主要手段。近年来影像学的发展对肺栓塞诊断有重大推进。因此如何提高PE诊断尤其是影像学诊断水平，仍是当前面临的重要问题。
- 蒋磊
- 关键词：影像学诊断急性肺栓塞肺栓塞诊断流行病学资料肺动脉系统人口死因
- 人VIGILINN端融合蛋白的表达及亚细胞定位被引量：2
- 2009年
- 目的原核表达人VIGILINN端基因,制备抗人VIGILIN的多克隆抗体,对人VIGILIN作亚细胞定位。方法用PCR扩增人VIGILIN基因N端,克隆到表达载体pGEX-4T-2中,并在大肠杆菌中以IPTG诱导表达。产物经Glutathion Sepharose 4B纯化后免疫新西兰白兔制备抗人VIGILINN端融合蛋白抗体,采用ELISA和Western blot鉴定抗体的效价及特异性。通过细胞免疫荧光染色,观察VIGILIN在细胞中的分布。结果在28℃1、mmol/L IPTG诱导3 h的最优条件下成功表达GST-VIGILIN N端融合蛋白,抗体ELISA滴度为1∶16000,Western blot证实抗体特异性较高,VIGILIN在细胞质和核中均有分布,核中的分布集中在核膜内侧和靠近DAPI染色显著的区域。结论成功表达人VIGILIN N端融合蛋白和制备兔抗人VIGILIN抗体,并应用于亚细胞定位,为研究人VIGILIN的性质和功能奠定基础。
- 魏玲张朝良蒋磊杨文理谢晓砚覃扬
- 关键词：原核表达多克隆抗体亚细胞定位
- 人CTCF N端融合蛋白的表达、抗体制备及鉴定被引量：1
- 2010年
- 为研究CTCF的功能,进一步探索肿瘤的发病机制,我们成功制备了人转录因子CTCF N端融合蛋白多克隆抗体,并初步用于肿瘤细胞CTCF表达状态的分析。采用已构建的表达质粒PGEX-4T-2-CTCF-N,经IPTG诱导表达GST-CTCF N融合蛋白,亲和层析纯化GST-CTCF N融合蛋白,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。并通过Western blot,对肿瘤细胞和组织CTCF蛋白表达状态进行初步分析。本实验成功在大肠杆菌BL21中诱导表达了GST-CTCF N融合蛋白,经亲和层析纯化获得了纯化的融合蛋白。免疫新西兰大白兔获得了较高生物活性和特异性的多克隆抗体,Western blot证实此多克隆抗体能够特异性识别HepG2、HeLa、MCF-7癌细胞及组织的内源性CTCF蛋白,为今后从蛋白质水平研究CTCF基因表达调控研究打下了基础。
- 张迎春蒋磊魏玲柴新娟葛亚俊覃扬
- 关键词：CTCF多克隆抗体WESTERNBLOT肿瘤细胞表达
- 超宽带MMIC及宽带MIC低噪声放大器设计研究
- 蒋磊
- 多功能转录因子CTCF重组质粒构建及其表达鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的构建人CTCFcDNA全长及N端、Zn指、C端3个片段的原核融合表达载体,纯化融合蛋白并进行鉴定。方法以编码CTCF全长序列的质粒为PCR模板,分别构建GST融合表达重组质粒pGEX-4T-2-CTCF,pGEX-4T-2-CTCF-N,pGEX-4T-2-CTCF-Zn,pGEX-4T-2-CTCF-C,转化大肠杆菌BL21,酶切、测序鉴定;优化IPTG诱导表达条件,并对亲和层析纯化的GST融合蛋白CTCF,CTCF-N,CTCF-Zn,CTCF进行Far-Western blot鉴定。结果重组质粒经双酶切和测序鉴定证实构建成功。GST融合蛋白CTCF,CTCF-N,CTCF-Zn,CTCF-C均在大肠杆菌中成功诱导表达,融合蛋白经亲和层析纯化获得纯化蛋白。各纯化蛋白经SDS-PAGE和Far-Western blot鉴定,均为诱导表达蛋白质。结论成功构建了GST融合表达CTCF,CTCF-N,CTCF-Zn,CTCF-C的重组质粒,对融合蛋白表达条件进行了优化,获得了高效表达的GST融合蛋白。
- 蒋磊覃扬孙芝琳武静杨文理张军哲
- 关键词：融合蛋白
- 经鼻持续气道正压通气治疗阻塞型睡眠呼吸暂停低通气综合征最佳压力的预测及评价
- 根据整夜多导睡眠图(PSG)的监测指标及身体测量指标推导阻塞型睡眠呼吸暂停综合征患者(OSAHS)的经鼻持续气道正压通气(n-CPAP)治疗的最佳压力的回归方程，并验证其方程的可靠性与准确性，为临床提供一种简便的决定处方...
- 蒋磊
- 关键词：经鼻持续气道正压通气睡眠呼吸暂停综合征肺疾病
- 文献传递
- 以魔芋葡甘聚糖凝胶为载体亲和层析分离纯化猪血SOD被引量：10
- 1996年
- 以魔芋葡甘聚糖（ＫＧＭ）凝胶作为铜金属螯合亲和层析的载体一步亲和纯化猪血ＳＯＤ，得到电泳均一，比活为８６２２Ｕ／ｍｇ，纯化倍数为７７．８倍的ＳＯＤ，其回收率为８５．４％．探讨了魔芋葡甘聚糖凝胶作为亲和载体的可能性及前景．
- 周立郑远旗李建吾蒋磊贾成禹
- 关键词：超氧化物歧化酶魔芋提纯猪血
- 多功能转录因子CTCF与Vigilin片段体外相互作用的初步研究
- 背景和目的：人类基因组计划完成以后，生命科学的研究进入了后基因组时代。蛋白质介导细胞的许多生物学活性，而且大部分蛋白质都是和其他蛋白质形成复合物来发挥作用。为了更好理解细胞的生命活动，必须很好了解蛋白质单体和复合物的功能...
- 蒋磊
- 关键词：CTCF蛋白质相互作用
- 文献传递
- 限制性内切酶结合半巢式PCR法检测人肝癌P16抑癌基因启动子区甲基化研究被引量：2
- 2007年
- 目的建立甲基化敏感的限制性内切酶结合半巢式降落PCR方法,研究原发性肝癌P 16基因启动子区甲基化状态。方法针对P 16基因启动子区富含CpG的序列,设计3条引物,进行半巢式降落PCR扩增,检测原发性肝癌P 16基因启动子区甲基化状态;并将P 16基因启动子区340 bp片段克隆到pM D 18-T载体,E.coli JM 109扩增此质粒后经CpG甲基化酶M.S ssⅠ处理,再用Hp aⅡ酶切验证获得P 16基因启动子区甲基化阳性的质粒P 16Pm+并进行特异性和灵敏度实验。以此甲基化敏感的限制性内切酶结合半巢式降落PCR方法检测40例人原发性肝癌和3例正常人肝组织DNA样品的P 16基因启动子区甲基化状态。结果所采用的Hp aⅡ酶切后半巢式PCR方法的特异性强,灵敏度达100 fg;对40例人原发性肝癌组织DNA样品P 16基因的启动子区甲基化状态检测显示甲基化阳性率为30%(12/40),3例正常人肝组织均为阴性(0/3)。结论P 16抑癌基因启动子区甲基化可能与肝癌发生发展有关。本实验方法简便、成本低廉,并有高度的特异性与灵敏度,在大规模检查中有实际应用价值。
- 蒋磊覃扬孙芝琳孙泽芳王锦红杨鲁川
- 关键词：半巢式PCR人原发性肝癌
