葛瑜
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
- 供职机构：上海交通大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 锌指蛋白265在大鼠睾丸Sertoli细胞中的特异性表达被引量：6
- 2008年
- 目的:研究锌指蛋白265(ZNF265)在大鼠睾丸Ser-toli细胞中的特异性表达。方法:分离培养SD大鼠睾丸Ser-toli细胞,以免疫荧光染色、流式细胞术(FCM)检测ZNF265在Sertoli细胞的表达,且抽提Sertoli细胞总RNA,用PT-PCR法检测ZNF265的表达。结果:经免疫荧光染色,实验组Ser-toli细胞核核周呈现明亮特异荧光,对照组未见特异性荧光;FCM检测结果显示实验组Sertoli细胞ZNF265的表达较对照组明显增高;RT-PCR扩增出目的条带ZNF265。结论:大鼠睾丸Sertoli细胞特异性表达ZNF265,且多表达于Sertoli细胞核核周胞质。
- 席晔斌李荣平王保国葛瑜沈天伟蒋黎华李伟毅
- 关键词：SERTOLI细胞SD大鼠
- 灭活自体T细胞增强小鼠免疫功能作用机制的研究
- 2009年
- 接种灭活自身反应性T细胞用于治疗自身免疫性疾病已获初步成效。本研究采用辐射方法灭活ConA活化自体T细胞,经皮下和腹腔免疫正常的C57BL/6J小鼠,结果发现,该免疫方案可明显上调T细胞功能,表现为:免疫小鼠体内活化T细胞增多且Th1型细胞因子分泌增加,淋巴细胞体外增殖能力增强且凋亡细胞明显减少。进一步研究结果提示,接种灭活自体T细胞可能通过上调Fas、GADD45β及下调FasL基因表达而促进T细胞的活化和存活,并增加其生物学功能。这些结果表明,自体T细胞免疫具有增强机体的细胞免疫功能,为其抗肿瘤免疫作用提供了一定的实验依据。
- 张秋玉史媛林锦骠葛瑜吴娟娟张壮壮沈佰华张艳李宁丽王利
- 关键词：AICDGADD45ΒFASFASL
- 肿瘤相关抗原线粒体蛋白12基因的RNA干扰对HeLa细胞的抑制作用被引量：3
- 2007年
- 目的:探讨肿瘤相关抗原线粒体蛋白质12基因(tumor-associated antigen mitochondrial protein 12 gene,TAMP12)表达变化对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用。方法:利用计算机辅助设计并化学合成3对针对TAMP12的siRNA片段,通过脂质体法将siRNA转染于TAMP12高表达的HeLa细胞中,筛选有效的siRNA片段。以RT-PCR、实时定量PCR及流式细胞术(FCM)检测肿瘤细胞TAMP12 mRNA及蛋白表达的变化。以激光扫描共聚焦显微镜(confocal lyser scarning microscope,CLSM)观察双色荧光标记蛋白的亚细胞定位和定量表达。以3H-TdR掺入实验和FCM检测阻断TAMP12基因表达对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。结果:CLSM检测显示TAMP12蛋白主要表达在HeLa细胞线粒体中。转染siRNA-TAMP12的肿瘤细胞中TAMP12 mRNA及蛋白的表达显著降低,与对照组对比,抑制率分别为81%和87%(P<0.01);转染细胞的DNA合成受抑制,抑制率达42%(P<0.01);转染siRNA-TAMP12肿瘤细胞的凋亡率由对照细胞的8.14%上升到15.59%(P<0.01)。结论:RNA干扰可阻断TAMP12基因的表达,从而对人宫颈癌Hela细胞产生抑制作用。
- 丁永霞王树军张勇张惠珍王颖金姝沈天伟葛瑜葛海良
- 关键词：SIRNAHELA细胞线粒体凋亡
- 肿瘤相关线粒体蛋白12对肝癌细胞凋亡的抑制作用
- 2009年
- 目的:探讨肿瘤相关线粒体蛋白12(TAMP12)对肿瘤细胞凋亡的抑制作用。方法:(1)构建重组逆转录病毒表达载体并转染包装细胞PA317,将获得的病毒颗粒感染TAMP12低表达的肝癌细胞株HepG2。应用RT-PCR检测TAMP12 mRNA表达变化;激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)观察双色荧光标记蛋白的亚细胞定位和定量表达。(2)应用Hoechst 33258染色和FACS检测5-氟尿嘧啶(5-FU)处理后对诱导HepG2细胞凋亡的影响。结果:(1)CLSM检测显示TAMP12主要表达于HepG2细胞线粒体中。转染细胞中TAMP12基因和蛋白呈稳定高表达。(2)5-FU诱导细胞发生凋亡后,转染细胞的核形态较为完整,但对照细胞的染色质发生凝聚、边缘化、核固缩;且FACS检测显示转染细胞的凋亡率显著低于对照细胞(P<0.05或P<0.01)。结论:TAMP12具有抑制肝癌细胞凋亡的作用。
- 金姝王俐王颖谢国化陈惠娟王树军张惠珍张勇葛瑜葛海良
- 关键词：线粒体逆转录病毒载体HEPG2细胞氟尿嘧啶细胞凋亡
- FasL^+组织工程化猪软骨细胞的同种异体移植被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨表达FasL的猪组织工程化软骨细胞在同种异体内的生长状况和免疫排斥反应。方法:实验于2002-09/2004-03在上海交通大学医学院,上海市免疫学研究所进行。①分离制备猪软骨细胞。②制备FasL+软骨细胞,构建重组pGCEN-FasL反转录病毒载体,转染PA317细胞。经G418筛选获得分泌pGCEN-FasL病毒颗粒的PA317细胞克隆,选择高滴度的病毒液,感染猪软骨细胞。再经过G418筛选获得FasL+的软骨细胞克隆,扩增培养。③FACS检测FasL的表达,应用JAM试验测定FasL+的软骨细胞诱导Fas+的Jurkat细胞及活化的T细胞的凋亡率。同时制备转染pGCEN反转录病毒空载体的软骨细胞为对照。④取FasL+的软骨细胞与可注射性生物材料PluronicF127混合,注射于同种异体猪的腹壁皮下。在第4,5周取材,通过组织病理和免疫组织化学等方法,检测软骨细胞生长和免疫排斥反应。结果:①经转染的软骨细胞表面FasL的表达率为57%。②FasL+的软骨细胞具有明显诱导Fas+细胞和活化的同种异体T细胞的凋亡,最大的凋亡率分别为53.41%,30.38%(效/靶=10∶1),对照组分别为32.27%,13.16%(效/靶=10∶1)。③组织工程化猪软骨结节的结构与正常软骨组织基本一致,可见清晰的软骨凹陷和软骨膜,仅细胞排列较正常软骨略显混乱、不均匀现象。④免疫组织化学染色显示FasL+的组织工程化猪软骨结节的Ⅱ型胶原蛋白分布均匀,形状清楚,与正常软骨比较基本一致。⑤第5周的软骨细胞表面的FasL分子表达明显,周围的炎性细胞浸润相对较少。而对照组的软骨细胞周围可见到大量浸润的炎性细胞。结论:成功构建FasL+软骨细胞并有效表达,抑制免疫排斥反应,为建立同种异体软骨细胞移植的免疫耐受提供了实验依据。
- 王树军张惠珍王颖金姝丁永霞葛瑜沈天伟葛海良
- 关键词：软骨细胞
