葛淑敏
- 作品数：10 被引量：34H指数：4
- 供职机构：解放军军需大学军事兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- H_5N_1亚型禽流感病毒核蛋白基因的克隆及分子进化分析被引量：1
- 2004年
- 用RT＿PCR法,以1株H5N1亚型禽流感病毒RNA为模板,扩增了NP全基因cDNA。将cDNA克隆于pMD18＿T载体,并对其进行测序。测序结果表明所克隆的1542个核苷酸的片段包含了核蛋白完整阅读框架,其中编码区为1497个核苷酸,编码498个氨基酸。将其序列与6株A型流感病毒NP基因序列进行比较,各毒株之间NP基因核苷酸序列同源性为92 5%～95 9%,编码的氨基酸同源性为97 0%～98 4%。本研究通过分子进化分析揭示了各毒株间的亲源关系。
- 王振国金宁一马鸣潇金扩世张洪勇尹革芬葛淑敏
- 关键词：RT-PCR禽流感病毒NP基因分子进化分析
- O型口蹄疫病毒不同基因型联合RT-PCR检测方法的建立被引量：7
- 2005年
- 在比较国内外口蹄疫病毒 (FMDV)流行毒株序列的基础上 ,设计了检测 FMDV的 PCR引物及 O型 FMDV不同基因型即中国型 (Cathay)与乏亚株 (Pan Asia)的二联 PCR引物。在确定单项 RT- PCR反应条件的基础上 ,建立、优化了二联 RT- PCR反应体系和条件 ,并进行了相关病毒检测试验。结果表明 ,建立的检测 O型 FMDV不同基因型中国型与泛亚株的二联 RT- PCR,有效、特异且敏感 ,为 FMD的诊断。
- 葛淑敏金宁一尹革芬郑敏张洪勇王振国马鸣潇
- 关键词：FMDVO型口蹄疫基因型RT-PCR检测口蹄疫病毒
- 以猪白介素18为细胞因子佐剂与口蹄疫病毒P1-2A重组核酸疫苗的联合免疫
- 白细胞介素18具有多种生物学活性,作为佐剂可以增强机体细胞免疫反应.重组DNA疫苗技术可使细胞因子的免疫调节作用得到较为广泛的应用.包含有特异性细胞因子基因的重组DNA疫苗易于构建,与其它特异的免疫原基因共表达的重组核酸...
- 张洪勇金宁一尹革芬葛淑敏刘棋郑敏李昌李子健江文正
- 关键词：口蹄疫病毒核酸疫苗白细胞介素18
- 文献传递
- 6株O型口蹄疫病毒结构蛋白vp1基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2004年
- 提取6株O型口蹄疫病毒(FMDV)(T1-T6)的RNA,用一对通用引物经RT-PCR方法将6株FMDVVP1基因片段扩增出来。克隆测序,核苷酸序列分析表明,T1-T6六株vp1基因的核苷酸序列同源性在95%～99.8%之间,氨基酸序列同源性在94.8%～100%之间。T1-T6六株病毒vp1基因的核苷酸序列与已经发表的O/HKN/14/82、O/TAW/81/97、O/PHI/7/96、O/HKN/1/99和O/HKN/16/96的同源性较高,核苷酸序列同源性在86.1%～95.8%之间;发现6株毒株的主要中和抗原表位140-160、200-213位的氨基酸序列完全相同,推测它们有相近的中和抗体表位和抗原性。故推断本试验中的6株FMDV株属于同一基因型,即FMDVO型中国拓朴型(Cathaytopotype)。
- 葛淑敏金宁一尹革芬郑敏王振国马鸣潇
- 关键词：口蹄疫病毒克隆
- 口蹄疫病毒二价DNA疫苗的构建及实验免疫研究被引量：6
- 2004年
- 通过PCR方法从本室已构建的克隆载体pGEMT-P1-2A获得O型口蹄疫病毒主要保护性抗原VP1基因，以基因突变获得A型VP1基因。将这两种血清型的VP1基因串联后连接到真核表达载体PVAX1 PCMV启动子下游，构建成口蹄疫二价核酸疫苗pVAX1-OA。经Western blot和IFA检测，目的蛋白在HeLa细胞中获得正确表达。动物实验表明，免疫小鼠T淋巴细胞明显增殖，特异性CTL杀伤活性较对照组显著提高；血清抗体能分别与O型和A型抗原反应，抗体效价均高于空白对照组，但较灭活苗低。
- 尹革芬金宁一张洪勇郑敏李昌葛淑敏秦晓冰
- 关键词：口蹄疫病毒VP1基因CTL活性抗体效价免疫指标检测
- 共表达FMDV P1-2A和3C重组鸡痘病毒疫苗与核酸疫苗的实验免疫研究被引量：4
- 2004年
- 将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因分别插入到鸡痘病毒表达载体质粒pUTA-16Lac Z的复合启动子和单一启动子的下游，构建共表达重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL3CP1，与282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞，经RT-PCR、IFA及Western blotting检测，成功获得能正确表达目的蛋白的重组鸡痘病毒株vU-TAL3CP1。并与FMDV重组核酸疫苗免疫小鼠实验表明，各实验免疫组均能诱导小鼠产生特异性的细胞免疫和体液免疫反应，其中以重组鸡痘病毒与核酸疫苗联合免疫效果好于其它实验各组。
- 张洪勇金宁一葛淑敏尹革芬郑敏李子健江文正
- 关键词：FMDV重组鸡痘病毒疫苗
- 鸡IL-18成熟蛋白基因的克隆及分子进化分析被引量：2
- 2004年
- 根据已发表的鸡白介素18(IL-18)基因序列设计合成引物,以植物凝集素(PHA)和脂多糖(LPS)激活的AA肉鸡脾细胞mRNA为模板,通过RT-PCR扩增出编码鸡IL-18成熟蛋白的cDNA。将该cDNA克隆于pUCm-T载体,并对其进行测序,结果表明所克隆的核苷酸片段包含了全部成熟蛋白编码基因,成熟蛋白编码区507个核苷酸,编码169个氨基酸。把该基因编码的鸡成熟IL-18蛋白氨基酸序列与已公布的禽及哺乳动物IL-8成熟蛋白基因氨基酸序列进行比较,其同源性分别在96.5%～100%和20.1%～26.6%之间。分子系统进化树分析表明鸡IL-18与哺乳动物IL-18有共同的祖先,亲源关系较近,但在免疫系统选择性压力下,形成独特的种族特异性。鸡IL-18基因的克隆为体外表达鸡IL-18蛋白及作为免疫佐剂应用于预防接种的研究奠定了基础。
- 王振国金宁一张洪勇尹革芬葛淑敏
- 关键词：鸡IL-18基因序列克隆分子进化
- 猪圆环病毒2型内蒙古株全基因组的克隆及序列分析被引量：6
- 2004年
- 取内蒙古某猪场疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征 (PMWS)病猪的肝、淋巴结、肺、脾等器官组织病料 ,处理后负染 ,透射电镜观察到约 17nm的病毒粒子。用 PCR法从病料中扩增获得 2型猪圆环病毒的全基因组序列 ,其全长为176 7bp,与 Gen Bank中公布的 11株 PCV- 2型序列比较 ,同源性为 95 .2 %～ 99.8%
- 秦晓冰金宁一郑敏马鸣啸鲁会军张洪勇尹革芬葛淑敏邹啸环
- 关键词：猪圆环病毒2型基因组克隆多系统衰竭综合征
- 口蹄疫病毒二价DNA疫苗的构建及实验免疫研究
- 本研究在已构建口蹄疫O型DAN疫苗的基础上,构建了口蹄疫病毒O型和A型二价核酸疫苗,并进行小鼠免疫,测定了相关的免疫指标,实验结果表明,pVAX1-OA重组表达质粒能刺激机体产生较好的细胞免疫和体液免疫,所产生的抗体与相...
- 尹革芬金宁一葛淑敏张洪勇刘棋郑敏王宏张立树
- 关键词：口蹄疫病毒疫苗免疫抗原
- 文献传递
- 口蹄疫病毒3D基因在重组杆状病毒中的表达及检测被引量：7
- 2005年
- 利用杆状病毒表达系统进行了口蹄疫病毒3D基因在Sf9细胞中的表达研究。首先克隆了3D基因片段,将pMD18_3D质粒及杆状病毒转座载体质粒pFastBacⅠ分别用EcoRⅠ及XbaⅠ酶切后,用T4DNA连接酶连接,构建了重组质粒pFastBac_3D;再将该重组质粒转化DH10Bac感受态细菌,在体内进行重组,并经三重抗性与蓝白斑筛选,得到杆状病毒重组质粒Bacmid_3D;将Bacmid_3D转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒,并进行表达水平的检测。经SDS_PAGE和West ernblot检测,结果表明,3D蛋白在重组杆状病毒中获得表达。
- 鲁会军金宁一韩松郑敏尹革芬张洪勇葛淑敏金扩世
- 关键词：口蹄疫病毒3D基因杆状病毒
