- 羟喜树碱对体外培养的人Tenon囊成纤维细胞自噬的诱导作用被引量：4
- 2015年
- 背景 滤过道瘢痕化及人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）增生是抗青光眼滤过手术失败的主要原因.目前已有羟喜树碱诱导成纤维细胞凋亡及其机制的相关报道,但是羟喜树碱对HTFs自噬的影响鲜见报道. 目的 探讨羟喜树碱对体外培养的HTFs自噬的影响.方法 收集3例接受斜视手术患者的Tenon囊组织,以组织块培养法,用含体积分数10％胎牛血清（FBS）的DMEM培养基原代培养HTFs并传代,取第3～6代细胞进行培养.分别在培养基中加入0.0、0.5、1.0、4.0、10.0 mg/L羟喜树碱,继续培养HTFs 24 h,以细胞计数试剂盒8（CCK-8）检测各组细胞的增生情况.选取4.0 mg/L羟喜树碱作用HTFs 24 h,用Cyto-ID自噬检测试剂盒进行荧光染色,观察各组细胞中自噬小体和自噬溶酶体成分的分布,用荧光显微镜和流式细胞仪分别对Cyto-ID染色阳性细胞数量及其荧光强度进行测定,并与对照组比较.用逆转录定量检测PCR（qRT-PCR）和Western blot法分别检测各组HTFs中自噬相关蛋白Beclin-1、自噬相关基因5（ATG-5）和微管相关蛋白1轻链3（LC-3）蛋白及其mRNA的相对表达水平.结果 随着羟喜树碱质量浓度的增加,HTFs细胞活力逐渐下降,0.0、0.5、1.0、4.0、10.0 mg/L羟喜树碱组HTFs细胞活力的总体差异有统计学意义（F=19.040,P＜0.001）,1.0、4.0、10.0 mg/L羟喜树碱组HTFs的细胞活力均低于对照组,以10.0mg/L组最低,差异均有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01）.qRT-PCR检测显示,4.0 mg/L羟喜树碱组HTFs中Beclin-1 mRNA、ATG-5mRNA和LC-3 mRNA的相对表达量分别是对照组的（3.225±0.346）、（2.839±0.418）和（3.761±0.224）倍,与对照组比较差异均有统计学意义（P=0.020、0.027、0.007）.Western blot检测表明,4.0 mg/L羟喜树碱组HTFs中Beclin-1、ATG-5和LC-3蛋白表达的灰度值较对照组明显上升,LC-3Ⅱ/Ⅰ灰度值比值分别为0.965±0.159和0.275±0.860,差异均有统计学意义（P=0.003）.Cyto-ID染�
- 徐心雨童俊范舒欣袁志兰
- 关键词：自噬羟喜树碱成纤维细胞青光眼
- TGF-β1诱导人Tenon囊成纤维细胞增殖及其机制
- 2014年
- 目的：观察TGF-β1是否促进人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）增殖并且探讨其作用机制。方法：用TGF-β1（0、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 ng/ml）作用于体外培养的3-6代HTFs 24 h,CCK-8法、EdU染色法检测其增殖;采用Western blot法检测HTFs中RhoE的表达及其下游细胞增殖相关蛋白cyclinD1和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达,用慢病毒建立RhoE敲降细胞系。结果：TGF-β1可以剂量依赖性促进HTFs增殖,以5 ng/ml TGF-β1处理后有统计学差异,EdU掺入法检测发现,5 ng/ml TGF-β1组EdU标记率明显高于对照组。5 ng/ml TGF-β1组HTFs中RhoE蛋白的表达平均灰度值明显低于对照组,细胞增殖相关蛋白cyclinD1、PCNA的表达平均灰度值高于对照组。细胞中RhoE沉默后,CCK-8法检测细胞活力较对照组上升,流式细胞术发现S期也升高,cyclinD1、PCNA灰度值也上升。结论：TGF-β1可以通过降低RhoE引起下游周期蛋白cyclinD1的表达升高,诱导人Tenon囊成纤维细胞增殖。
- 童俊周宁天袁志兰
- 关键词：TGF-Β1成纤维细胞细胞增殖青光眼
