祝令伟
- 作品数：94 被引量：317H指数：10
- 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划吉林省科技发展计划基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 猪链球菌2型一个新基因岛的发现
- 通过对猪链球菌2型强毒株与弱毒株和无毒株中可能的基因岛的比较分析,发现了一个存在于强毒株而不存在于弱毒株和无毒株的基因岛。基因岛命名为SSGI4,序列长度11289bp,两端有噬菌体整合酶和噬菌体相关蛋白,说明可能是通过...
- 祝令伟蔡雪辉刘军孙洋齐翀纪雪李鹏田园冯书章
- 关键词：猪链球菌2型致病机制
- 文献传递
- 布鲁氏菌S2菌壳的安全性和免疫学特性研究被引量：1
- 2016年
- 目的利用小鼠模型对布鲁氏菌菌壳、布鲁氏菌S2活菌和福尔马林灭活菌的安全性和免疫学特性进行比较研究。方法利用猪布鲁氏菌S2株和重组裂解质粒制备出布鲁氏菌菌壳,将布鲁氏菌菌壳、布鲁氏菌S2活菌和福尔马林灭活菌通过腹腔注射免疫小鼠,进行安全性比较分析。监测免疫后小鼠的血清抗体水平、脾脏T淋巴细胞分型,并进行免疫攻毒实验。结果与布鲁氏菌弱毒疫苗菌株S2比较,布鲁氏菌菌壳具有更好的安全性,免疫小鼠后能产生与弱毒菌株相似的血清抗体水平、脾CD3+和CD4+T淋巴细胞反应,并具有与之相当的免疫保护作用。结论布鲁氏菌菌壳具有良好的安全性,能刺激机体产生体液免疫和细胞免疫反应,可作为预防布鲁氏菌病的新型候选疫苗。
- 苗玉强刘军孙洋纪雪祝令伟周伟郭学军刘爽陈萍冯书章
- 关键词：布鲁氏菌安全性免疫原性
- 肠出血性大肠杆菌O157∶H7主要保护性抗原单克隆抗体的研制及特性分析被引量：10
- 2006年
- 以基因重组技术构建工程菌株表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7主要保护性抗原紧密素和志贺毒素的融合蛋白。融合蛋白采用凝胶分离电洗脱法回收纯化,用纯化的蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,细胞融合后获得的3株杂交瘤细胞株1G2、3C6、1B10,能分别稳定分泌针对紧密素、志贺毒素Stx1和Stx2的单克隆抗体。3株单抗分别制备腹水并纯化,ELISA检测效价分别为1∶6.4×105、1∶1.2×106、1∶3200。Western-blot检测表明,3株单抗与融合蛋白发生特异性反应。应用3株单抗均可特异性检出EHECO157∶H7,而3株单抗与其他不产生紧密素和志贺毒素的大肠杆菌不反应。
- 祝令伟冯书章刘军陈萍
- 关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体志贺毒素
- 猪链球菌2型和9型菌株的多重PCR检测被引量：39
- 2005年
- 目的建立一种快速、特异且敏感的检测方法。方法以猪链球菌2型和9型的荚膜多糖抗原编码基因簇中的cps2J和cps9H基因、猪链球菌2型的主要毒力因子编码基因epf和mrp为靶基因设计了四对引物,建立了检测猪链球菌的多重PCR反应体系。用编码cps2J和cps9H基因的引物可对猪链球菌2型和9型进行分型,用编码epf和mrp基因的引物可鉴定猪链球菌2型的主要毒力相关基因。用该多重PCR反应体系对10株猪链球菌分离株进行了鉴定,并以其它几株阴性对照菌株进行对照,检测了该反应体系的特异性。以新鲜培养的猪链球菌2型菌株进行倍比稀释后进行菌落计数,并将之作为模板,对该多重PCR反应体系检测的敏感性进行了鉴定。结果10株猪链球菌分离株中有5株是9型菌株,另有5株是2型菌株,2型菌株有2种基因型:3株cps2+mrp+epf+型,2株cps2+mrp-epf-型。同时还表明该多重PCR反应体系有高度的特异性和敏感性,当模板含量在10cfu时仍能检出目的菌株。结论该多重PCR反体系是一种检测和鉴定猪链球菌2型的快速、特异且敏感的方法。
- 刘军冯书章尹铁勇孙洋郭学军祝令伟
- 关键词：猪链球菌多重PCR毒力基因
- 猪链球菌2型对家兔的试验感染及其病理学观察被引量：5
- 2010年
- 利用猪链球菌2型四川分离强毒菌株458#,通过腹腔注射接种日本大耳白家兔,观察其临床症状和病理学变化。结果表明,猪链球菌2型强毒株458#可引起家兔发病或死亡,并能从发病家兔的组织样品中分离到所接种毒株。感染家兔的特征性组织病理学变化表现为典型的弥漫性血管内凝血和微血栓形成。猪链球菌2型感染家兔动物模型的建立,对于评价猪链球菌2型的毒力,探索其发病机制具有重要的意义。
- 尹铁勇刘军祝令伟冯书章夏志平高丰
- 关键词：猪链球菌2型家兔病理学
- 肠出血性大肠埃希菌O157：H7多重PCR检测方法的建立被引量：2
- 2017年
- 为建立肠出血性大肠埃希菌O157:H7的多重PCR检测方法,针对O157菌特异性eaeA基因、fliC基因、志贺毒素基因(stx1和stx2)及rfbE基因设计5对引物,构建多重PCR反应体系,优化反应的引物浓度和温度检测其特异性和敏感性,并对牛、猪、鸡及犬等不同动物来源的样品进行了大肠埃希菌O157检测。结果显示,该方法具有良好的特异性和敏感性,敏感性达到5×10~3CFU。从检测阳性样本中均分离到目的菌。应用建立的方法在确定样品中是否含有大肠埃希菌O157的同时,还能对菌株毒力进行初步判定。成功建立了肠出血性大肠埃希菌O157:H7多重PCR检测方法,为该病原菌感染的预防和监测提供了简便、快速的技术手段,具有良好的应用前景。
- 纪雪张雪孙洋孙诗雯祝令伟刘军姜海艳周伟梁冰郭学军刘彦晶
- 关键词：肠出血性大肠埃希菌O157:H7多重PCR
- 双重溶菌质粒制备鸡痢疾志贺菌菌壳的研究
- 2013年
- 通过将2种不同的重组溶菌质粒转化至鸡痢疾志贺菌中,构建含有双重溶菌质粒的志贺菌重组菌株,以提高该菌菌壳制备的裂解率和稳定性,并对其特性进行研究。用重组溶菌质粒pBV220::E和pBBRIMCS-E共同转化到鸡痢疾志贺菌,构建志贺菌重组菌株Sd(pBV220::E/pBBRI MCS-E),重组菌株于28℃培养至D600值为0.5时升至42℃继续培养,间隔30min检测菌液D600值,进行重组菌株的溶菌裂解动力学比较试验,绘制裂解曲线图并计算出裂解率,制备菌壳并对其形态进行电镜观察。重组菌株Sd(pBV220::E/pBBRIMCS-E)经42℃诱导后可形成菌壳且保留了基本的细胞形态,裂解率达到了99.999 9%。本研究成功制备出鸡痢疾志贺菌菌壳,为研究利用该菌菌壳预防鸡痢疾志贺菌病的可行性奠定了基础。
- 蒋大伟刘军张瑞安夏力亮孙洋祝令伟冯书章许兰菊
- 关键词：志贺菌疫苗
- 猪链球菌2型毒力相关基因的分析
- 本研究用抑制消减杂交方法寻找强毒菌株与无毒参考菌株基因组水平的差异,采用三种不同的内切酶酶切上述菌株基因组获得了三套酶切片段,分别进行消减杂交。结果获得了三套差异文库共计42个特异性差异片段,所有差异片段均与已发表的全基...
- 齐翀刘军祝令伟孙洋纪雪尹铁勇冯书章
- 关键词：猪链球菌2型抑制性消减杂交毒力相关基因
- 文献传递
- 猪链球菌2型表面蛋白sp融合基因的构建与高效表达被引量：1
- 2007年
- 利用PCR方法从猪链球菌2型四川资阳分离株449-1扩增出sp基因,克隆到pMD18-T载体中,构建出克隆载体pMD18T-sp。以SalⅠ和BamHⅠ从pMD18T-sp中切下目的sp基因片段并克隆到质粒pMAL-p2X中,构建重组表达质粒pMALp2X-sp,转化宿主菌TB1中进行诱导表达。分析表明sp基因序列比GenBank报道序列AY864331少了270 bp;SDS-PAGE电泳检测结果表明,重组菌株表达出了136 Ku左右的目的蛋白MBP-Sao,目的蛋白为可溶表达,约占菌体蛋白总量的12.3%。表达的蛋白可用Amylose树脂纯化。将纯化的融合蛋白MBP-Sao免疫家兔,所得抗血清经ELISA检测,结果显示融合蛋白MBP-Sao包板抗体效价达1:16 000,且与猪链球菌2型和9型呈阳性反应,而与沙门氏杆菌及巴氏杆菌呈阴性反应。本试验对猪链球菌2型表面蛋白Sao的高效表达及其免疫原性进行了初步研究,为进一步研究猪链球菌2型表面蛋白Sao的结构和功能奠定了基础。
- 刘燕刘军冯书章郭学军孙洋祝令伟
- 关键词：猪链球菌2型表面蛋白
- 粗糙型布鲁菌M111菌壳的制备被引量：4
- 2014年
- 将含有裂解酶基因重组温控裂解质粒pBBR1MCS∷PR-PL-E电转化至粗糙型布鲁菌M111中,构建重组布鲁菌M111(pBBR1MCS∷PR-PL-E)。重组菌株在28℃培养,42℃诱导表达裂解酶E,从而制备布鲁菌菌壳。绘制布鲁菌生长曲线及裂解曲线,计算裂解率并用透射电镜观察布鲁菌菌壳的形态。结果显示,成功制备了布鲁菌菌壳,温控裂解质粒pBBR1MCS∷PR-PL-E对布鲁菌的裂解率为100%。透射电镜观察可见细菌内容物部分流出,细菌表面出现不同程度的皱缩,细胞形态发生变化。结果表明,本试验成功制备了粗糙型布鲁菌菌壳,初步研究了其基本特性,为下一步开展布鲁菌菌壳疫苗的研究奠定了基础。
- 张瑞安刘军蒋大伟夏力亮孙洋祝令伟纪雪郭学军冯书章
