白晓阳
- 作品数：4 被引量：36H指数：2
- 供职机构：复旦大学生命科学学院遗传学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 耐热碱性磷酸酶的亚克隆和耐热机制的研究
- 对嗜热菌蛋白耐热机制的研究是当前生物学领域研究的热点之一.该实验室已从筛选得到的一株高度嗜热菌(Thermussp.3041)中克隆到了耐热碱性磷酸酶(FD-TAP)基因.
- 白晓阳
- 关键词：耐热碱性磷酸酶亚克隆热稳定性
- 文献传递
- 无机磷酸盐对耐热碱性磷酸酶耐热性的影响被引量：1
- 2001年
- 为研究体外磷酸根离子对嗜热菌 (Thermussp .30 4 1)碱性磷酸酶TAPND2 7耐热性的影响 ,通过克隆于高表达质粒上编码TAPND2 7的基因在E .coli中的诱导表达和蛋白产物的纯化 ,获得了电泳纯的TAPND2 7.耐热性实验表明磷酸根离子能显著提高该酶的热稳定性 ,在 10mmol L磷酸根离子存在下 ,TAPND2 7的Tm 值从 91℃上升到了 97℃ ;酶的动力学实验证实无机磷酸盐 (Pi)对TAP ND2 7的酶活性有可逆竞争性抑制作用 ,Ki 值为 0 99× 10 -4 mol L .上述结果说明 ,TAPND2 7耐热性的提高是由于磷酸根离子对TAPND2 7活性位点的竞争性结合 ,这种结合 ,推测为Pi 与氨基酸残基间的非共价相互作用 ,减小了TAPND2 7的自由能 。
- 白晓阳季朝能姜涛盛小禹毛裕民
- 关键词：耐热碱性磷酸酶磷酸盐热稳定性
- 信号肽去除的耐热碱性磷酸酯酶FD-TAP在大肠杆菌中的亚克隆和高表达被引量：29
- 2000年
- 通过计算机辅助分析 ,发现在耐热碱性磷酸酯酶 (简称FD TAP)的N端存在 2 6个氨基酸的信号肽序列。但一般信号肽切点并非是完全专一的 ,所以利用基因工程手段将FD TAP的N端分别缺失 2 4、2 5、2 6和 2 7个氨基酸 ,得到了N端分别缺失 2 4、2 5、2 6和 2 7个氨基酸的克隆子 pTAPND2 4、pTAPND2 5、pTAPND2 6和 pTAPND2 7。考虑到这样的克隆子其翻译起始区所形成的能量较低结构稳定的二级结构可能阻碍基因的表达 ,所以在保证氨基酸序列不变的前提下另外设计了 4个引物 ,得到了二级结构能量大大提高的 4个克隆子pTAPND2 4C、pTAP ND2 5C、pTAPND2 6C和 pTAPND2 7C。结果表明pTAPND2 4、pTAPND2 5和 pTAPND2 7没有表达 ;pTAPND2 6和pTAPND2 4C的表达量较低 ,pTAPND2 5C、pTAPND2 6C和pTAPND2 7C的表达量较高。通过测定 pTAPND2 5C、pTAPND2 6C和pTAPND2 7C的表达蛋白TAPND2 5、TAPND2 6和TAPND2 7的比活和热稳定性 ,发现无论比活和热稳定性TAPND2 7明显比TAPND2 5和TAPND2 6高且比野生型FD TAP略高。
- 季朝能白晓阳盛小禹张冰毛裕民
- 关键词：耐热碱性磷酸酯酶信号肽
- 耐热碱性磷酸酯酶(TAPND27)的表达、纯化和性质测定被引量：10
- 2000年
- 通过分离纯化和酶学性质测定 ,确定耐热碱性磷酸酯酶 (TAPND2 7)为八聚体 ,最适反应温度为 6 5℃ .在 99℃保温 30min仍保留 49 4%的活性 ,在质量分数为 5 %的SDS和Tween2 0体系中 ,依然有 70 %以上的酶活性 ,并且有很宽的pH稳定范围 .这表明TAPND2 7适合在高温条件和高浓度去污剂的体系中应用 .
- 季朝能盛小禹白晓阳白晓阳姜涛
- 关键词：热稳定性纯化蛋白质
