申卫红
- 作品数：7 被引量：16H指数：2
- 供职机构：新疆农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白基因的克隆和原核表达质粒的构建被引量：5
- 2010年
- 通过设计特异性引物,以犬传染性肝炎患犬的全血基因组DNA为模板,经PCR扩增,获得了犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白基因,将其插入到pMD18-T载体进行测序、鉴定,构建原核表达质粒载体pGEX-6p-1-Hex-on。结果显示,犬传染性肝炎病毒Hexon基因已被成功地克隆,基因全长2 718 bp,包含从起始密码子ATG到终止密码子TAA的完整序列。与犬传染性肝炎病毒国际标准株Hexon蛋白基因的同源性为99.7%,通过实验鉴定表明pMD18-Hexon克隆载体和原核表达质粒载体pGEX-6p-1-Hexon已成功构建。
- 陶玉成马素贞陈胜男刘腾飞申卫红简子健
- 关键词：犬传染性肝炎克隆原核表达质粒
- 犬瘟热病毒N蛋白基因的克隆、原核表达及其重组蛋白的抗原性研究
- 犬瘟热是由犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)感染犬或其它食肉目动物引起的高传染性、致死性疾病,以双相热、红疹、结膜炎、白细胞减少及中枢神经系统损害为主要特征,为危害特种养殖业发展的一类重要...
- 申卫红
- 关键词：犬瘟热病毒N蛋白基因原核表达抗原性
- 文献传递
- 犬瘟热病毒N蛋白基因融合蛋白原核表达条件的优化与蛋白纯化被引量：1
- 2012年
- 【目的】提高犬瘟热病毒N蛋白基因在大肠杆菌中表达可溶性GST融合蛋白的含量。【方法】研究诱导剂(IPTG)的最佳加入时间、诱导剂(IPTG)浓度、诱导时间以及不同温度条件对GST-CDV N融合蛋白表达的影响,获得在大肠杆菌中的最佳的表达条件,然后再在最佳条件下大量的表达,用GST-Sepharose 4B亲和层析柱对GST-CDV N融合蛋白进行纯化,得到最大量的可溶性融合蛋白,并对蛋白含量进行测定。【结果】大肠杆菌BL21(DE3)转化菌在37℃培养3.5 h(OD600=1.314)时,加入IPTG使终浓度为1 mmol/L,然后在27℃诱导8 h,GST-CDV N融合蛋白可溶性表达量最高,达到0.862 mg/mL。【结论】确定了犬瘟热病毒N蛋白基因的优化表达条件,为犬瘟热病毒分子免疫学诊断和亚单位疫苗的研制奠定了基础。
- 简子健马素贞申卫红翟少华赵森
- 关键词：犬瘟热病毒N蛋白基因融合蛋白纯化
- 犬瘟热病毒N蛋白基因的克隆、原核表达及其表达产物抗原性鉴定被引量：8
- 2010年
- 参考GenBank中发表的CDVN蛋白基因序列，用Oligo6．0软件设计一对特异性引物，从患犬瘟热的犬全血样品中提取总RNA，经RT—PCR扩增得到1572bp的基因片段，将其插入pMD18-T克隆载体中构建了pMD18-CDVN重组质粒，将其转入到大肠杆菌DH5a中，进行鉴定、测序。将目的基因与原核表达载体pGEX-4T-2连接构建了pGEX-4T-2-CDVN重组质粒，转化到大肠杆菌BL21（DE3）中，进行鉴定、测序、IPTG诱导表达。序列分析表明克隆的CDVN蛋白基因从起始密码子ATG开始到终止密码子TAA结束全长为1572个核苷酸，与GenBank中发表的CDVN蛋白基因序列相比同源率达到93．9％～99．1％。Western-blotting分析显示表达产物为84kDa的融合蛋白，可被犬瘟热抗血清所识别，具有良好的抗原性。
- 申卫红马素贞陈胜男刘腾飞陶玉成简子健
- 关键词：犬瘟热病毒N蛋白基因克隆原核表达抗原性
- 犬副流感病毒NP基因的克隆与原核表达被引量：2
- 2010年
- 以犬副流感病毒RNA为模板,采用RT-PCR方法,连接pMD18-T载体获取NP蛋白编码基因核苷酸序列,并应用定向克隆技术,构建原核表达载体pGEX-6P-1-NP。经测序鉴定证实获取的NP蛋白核苷酸序列与GeneBank中标准序列存在两处碱基变异,导致编码的蛋白质出现一个氨基酸的变异。测序结果表明,克隆出的目的基因序列已定向克隆到pGEX-6P-1载体,成功构建了其原核表达载体,并能在大肠杆菌BL21(DE3)中得到表达。Westen-Blotting分析结果显示,表达的GST-pGEX-6P-1-NP重组融合蛋白为82.1 kDa,可被犬副流感阳性血清所识别,表明NP基因所编码的蛋白具有一定的免疫活性。
- 刘腾飞马素贞申卫红陶玉成陈胜男简子健
- 关键词：犬副流感病毒NP蛋白RT-PCR原核表达免疫活性
- 犬细小病毒VP2基因的克隆表达与免疫印迹分析被引量：1
- 2010年
- 根据基因库已发表犬细小病毒序列设计合成了VP2基因的1对特异引物,以细小病毒感染的犬粪样品中提取的总DNA为模板,进行PCR扩增。把扩增产物克隆至pMD18-T载体进行测序、鉴定。将克隆的VP2基因片段克隆至原核表达载体pGEX-4T-2,再将构建成功的原核表达质粒载体pGEX-4T-2-VP2转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,进行鉴定、测序、表达。结果表明,克隆的VP2基因片段全长1 755 bp,与13个VP2基因序列的同源性为98.4%～99.8%。系统进化树分析表明,所克隆的VP2 CSN830611序列同日本株(AB054222)、意大利株(AF306445)的进化途径一致。Western-blotting分析显示,表达产物为90 kD的融合蛋白,可被犬细小病毒阳性血清所识别,具有良好的反应原性。
- 陈胜男马素贞陶玉成申卫红刘腾飞简子健
- 关键词：犬细小病毒VP2基因克隆原核表达反应原性
- 犬瘟热病毒N蛋白基因真核表达质粒的构建与瞬时表达
- 2012年
- 【目的】构建犬细小病毒(CPV)VP2基因真核表达质粒,为研究核酸疫苗奠定基础。【方法】参考GenBank中发表的CDV N蛋白基因序列设计引物,采用RT-PCR方法从疑似犬瘟热病犬全血样品中扩增CDV N蛋白基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)。经测序验证后,小白鼠尾静脉注射瞬时表达CDV N蛋白基因,8 h取其肝脏提取总RNA,进行RT-PCR方法扩增。【结果】在病犬的全血样品中扩增得到1 572 bp的CDV N蛋白基因片段,并构建了真核表达质粒pcDNA3.1(+)-CDV N,从瞬时表达的小白鼠肝脏总RNA中可扩增到目的条带。【结论】构建了犬瘟热病毒N蛋白基因真核表达质粒,并在小白鼠体内进行了瞬时表达。
- 简子健马素贞申卫红翟少华赵森
- 关键词：犬瘟热病毒N蛋白基因真核表达载体
