王靓
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人表面活性物质蛋白B基因启动子荧光素酶报告基因重组质粒的构建及活性检测
- 2013年
- 目的构建人表面活性物质蛋白-B（SP-B）基因启动子荧光素酶报告基因重组质粒，并分析其在H441细胞中的转录活性。方法（1）以人基因组DNA为模板，PCR扩增SP-B启动子（-218／＋435bp）序列片段，并通过TA克隆方法连接到pGM-T载体上，筛选阳性克隆将目的片段进行测序。测序鉴定正确后的目的片段被克隆到荧光素酶表达载体pGL3-Basic上构建pGL3-basic-SP-B-promoter重组质粒，酶切及测序鉴定重组质粒；（2）将构建的pGL3-basic-SP-B-promoter重组质粒酶切改造，sP-B启动子克隆进pGL4．17载体构建pGL4．17-SP-B-promoter重组质粒；经酶切及基因测序确认无误后，采用脂质体法将构建的两种重组质粒分别和内参质粒pRL-TK同时转染H441细胞，检测双荧光素酶活性。结果构建的重组质粒经酶切及测序鉴定完全正确，转染H441细胞后，检测细胞裂解液萤火虫荧光素酶（firefly）及海肾荧光素酶（renilla）活性，两者比值间接反映启动子活性，pGL3-basic／pGL4．17-SP-B-promoter重组质粒的firefly／reniUa比值（2．8±1．1、66．5±3．8）较空载体质粒pGL3-basic、pGIA．17（0．2±0．1，4．3±0．4）均明显升高（t=4．182，27．419，P=0．000）。pGL4．17重组质粒firefly／renilla比值明显高于pGL3-basic重组质粒，其差异有统计学意义（t=27．712，P=0．000）。结论成功构建具有sP-B基因转录活性的pGL3-basie／pGIA．17-SP-B-promoter重组质粒，oGL4．17萤组质粒荧光素酶活性高，为后续研究SP-B基因转录调控奠定了理论基础。
- 王席娟蔡保欢李文斌刘伟王靓常立文
- 关键词：肺表面活性剂遗传学遗传学质粒遗传学
- 地塞米松对氧化应激状态下H441细胞肺表面活性蛋白A、B、C和D的mRNA及蛋白质表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨地寒米松对氧化应激时H441细胞肺表面活性蛋白（surfactant protein．SP）A、B、C和D表达的影响。方法采用H2O2制作H441细胞氧化晦激模型。实验分为对照组、不同浓度地塞米松（1、10和100μmol／L）组、H2O2（100μmol／L）损伤组、H2O2（100μmol／L）±地塞米松（100μmol／L）组。共培养24h后采用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测各组培养细胞中SP-A、B、C和DmRNA的表达水平，采用Western印迹技术榆测SPA、B、C和D蛋白的表达。多组间比较采用单因素方差分忻，并采用Dunnett’s T3检验进行两两比较。结果（1）H2O2损伤组SP-A mRNA表达水平明娃高丁对照组（4．0016±0．3618与0．9914±0．4170），向SP-C与SPD表达明显低于对照组（SP-C：0．2840±0．0586与0．9719±0．1022；SP—D：0．6199±0．0074与0．9518±0．0614），差异均有统计学意义（P均〈0．05）；与H2O2损伤组相比，H2O2±地寒米松组SPAmRNA的表达水平下降（2．5191±0．3463），而SP-D mRNA的表达水平升高（0．9076±0．0167）。差异均有统计学意义（P均〈0．05）。（2）H2O2损伤组SP-A蛋白表达水平明显高于对照组（2．1795±0．0645与0．9728±0．0090），SP-B、SP—C与SPD蛋白表达水平明显低于对照组（SP-B：0．2593±0．0086与0．7253±0．0134；SP-C：0．5592±0．0111与0．9472±0．0052；SP-D：1．1550±0．0237与1．2991±0．0298）；与H2O2损伤组相比，H2O2±地塞米松组SPA蛋白表达降低（1．4974±0．0185），而SP-B、SP-C与SP-D蛋白表达水平升高（0．7389±0．0182、0．9244±0．0282和1．3339±0．0136），筹砰均有统计学意义（P均〈0．05）。结论地塞米松可能通过调节SP的表达，对H441细胞氧化心激损伤发挥保护作用。
- 蔡保欢李文斌刘伟王席娟赵玲霞莫璐霞王靓常立文
- 关键词：氧化性应激细胞系肺表面活性物质相关蛋白质类地塞米松
- 双胞胎新生儿呼吸窘迫综合征易感性的研究被引量：3
- 2016年
- 目的:通过双胎研究探讨遗传因素在新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)发病中的作用。方法:以2010-01-2014-12华中科技大学同济医学院附属同济医院新生儿重症监护室收治的101对双胞胎患儿为研究对象,每对双胞胎中至少有1例患有NRDS。通过产检资料、产科出生记录、胎盘、性别及血型信息来确定卵型,其中单卵双胎40对,异卵双胎61对;比较单卵双胎和异卵双胎患儿NRDS发病率和同患病率的差异。临床资料用计量资料和计数资料描述,计量资料采取非参数检验,计数资料采用χ2检验比较2组资料的差异,所有数据采用Stata 11.0软件包进行分析。结果:单卵双胎组平均胎龄和出生体重分别为(30.94±2.40)周和(1 509±452)g;异卵双胎组分别为(30.86±1.89)周和(1 573±396)g,2组比较差异无统计学意义;单卵双胎组和异卵双胎组胎膜早破时间(定义为≥18h)、母妊娠糖尿病、产前足疗程糖皮质激素使用率、剖宫产率、5min Apgar评分≤8分、性别构成比等指标比较均差异无统计学意义。40对单卵双胎和61对异卵双胎患儿NRDS发病率分别为85%(68/80)和73%(89/122),2组比较差异有统计学意义(χ2=4.050,P<0.05)。单卵双胎组,双胎均发生NRDS的同患病率为70.0%(28/40),而异卵双胎组NRDS同患病率为45.9%(28/61),差异有统计学意义(χ2=5.68,P<0.05)。结论:单卵双胎组患儿NRDS发病率和同患病率均较异卵双胎组高,提示NRDS具有遗传易感性。
- 杨敏常立文李文斌刘伟容志惠蔡保欢王靓李玮胡柳宇
- 关键词：单卵双胎新生儿呼吸窘迫综合征遗传易感性
- 长时间高体积分数氧暴露对角化上皮生长因子保护胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞效应的抑制作用被引量：2
- 2014年
- 目的 探讨高体积分数氧（高氧）环境下,角化上皮生长因子（KGF）对Sprague-Dawley（SD）大鼠胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（ATⅡCs）增殖/存活、凋亡及死亡水平的影响.方法 提取SD大鼠胎鼠ATⅡCs进行原代培养,在常氧环境下[210 mL/L氧气（O2）]、高氧环境（950 mL/L O2）下分别培养细胞,并给予不同质量浓度的KGF（15 μg/L、25 μg/L、50 μg/L、75 μg/L、100 μg/L）,将细胞按随机数字表法分为单纯常氧组、常氧＋KGF组、单纯高氧组、高氧＋KGF组,采用流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）水平,采用细胞增殖检测法（MTT比色法）、乳酸脱氢酶释放试验（LDH法）检测细胞存活、死亡情况,Western Blot检测细胞凋亡指标活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）蛋白的表达.结果 常氧环境下培养细胞,常氧＋KGF组KGF 15～ 100 μg/L质量浓度范围内,各质量浓度组MTT水平显著高于单纯常氧组,25～ 100 μg/L质量浓度范围内各浓度组LDH显著低于单纯常氧组.与单纯常氧组相比,高氧环境暴露下细胞内ROS水平明显升高,呈现时间依赖性,高氧暴露4h以上,细胞活力显著下降、细胞死亡水平明显升高.高氧暴露0.5～1.0 h,高氧＋KGF组15～75 μg/L质量浓度范围内,各质量浓度组MTT水平显著高于单纯高氧组,15 ～75 μg/L KGF内各质量浓度组LDH显著低于单纯高氧组.高氧暴露4h后,15 μg/L及25 μg/L高氧＋KGF组细胞MTT水平高于单纯高氧组,25 ～ 100 μg/L范围内LDH释放水平低于单纯高氧组.延长高氧暴露时间达8h,仅高氧＋50 μg/LKGF组细胞存活水平高于单纯高氧组,高氧＋75 μg/L KGF组细胞死亡水平低于单纯高氧组.高氧暴露达12 h时,与单纯高氧组相比,高氯＋KGF各质量浓度组细胞存活、死亡水平均无显著差异.高氧暴露4～8 h时,与单纯常氧组相比,细胞凋亡指标活化的Caspase-3水平显著升高;与此同时,在上述时间点分别需要25 μ
- 王靓刘伟李文斌程婷婷高春芳莫露霞常立文
