王秀美
- 作品数：14 被引量：23H指数：3
- 供职机构：内蒙古农业大学动物科学与医学学院更多>>
- 发文基金：国家奶牛产业技术体系项目国家重点基础研究发展计划国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 黑白花奶牛乳腺上皮细胞冻存方法的研究
- 2011年
- 试验研究了北方地区黑白花奶牛乳腺上皮细胞的最佳冻存方法。采用内蒙古地区健康黑白花奶牛的新鲜乳腺组织,将组织进行Ⅱ型胶原酶消化后原代培养,培养的细胞经5代纯化后将密度调整为1×106个/mL。采用6种处理方法进行冻存,各设3个重复。液氮冻存1个月后,分别将6种不同方法冻存的细胞复苏后测定细胞活性,包括冻存死亡率、贴壁细胞占活细胞的比率、凋亡率等,同时进行形态学观察。结果显示,处理1组与2、3、5组间冻存死亡率存在极显著差异(P<0.01),处理1、4、6组间冻存死亡率无显著差异(P>0.05),处理2、6组间冻存死亡率存在极显著差异(P<0.01);处理4组的贴壁率高于处理2、5、6组,存在极显著差异(P<0.01)。形态学观察结果发现,处理1、4组细胞较其他组生长状态良好。因此,处理4可作为黑白花奶牛乳腺上皮细胞的最佳冻存方法。
- 王秀美考桂兰侯先志高爱武杨苗杨银芬
- 关键词：冻存凋亡率乳腺上皮细胞
- 奶牛乳腺上皮细胞三维培养的形态观察被引量：3
- 2009年
- 本研究利用原代培养后纯化的奶牛乳腺上皮细胞,以Matrigel为基质胶原,进行奶牛乳腺上皮细胞的三维培养,细胞接种浓度分别为1×104细胞/ml、1×105细胞/ml和1×106细胞/ml。经过16d培养后,用DAPI对细胞染色,利用荧光显微镜观察细胞生长状况。结果表明,当细胞接种浓度为1×104细胞/ml^1×105细胞/ml时,细胞形成了团块状结构,出现了类似腔状的腺泡形态。
- 王秀美考桂兰高爱武侯先志高民
- 关键词：奶牛乳腺上皮细胞基质
- 三维模式下培养时间对奶牛乳腺上皮细胞酪蛋白基因表达的影响被引量：3
- 2013年
- 本试验旨在研究三维模式下培养时间对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)酪蛋白基因表达的影响。采用3头健康的3～5岁泌乳黑白花奶牛的乳腺组织,将BMECs经1代纯化后进行三维培养,在三维模式下分别培养3、5、7、9 d,测定BMECs中αs1-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白的基因表达量。结果表明,利用三维模式培养5 d的BMECsαs1-酪蛋白和κ-酪蛋白基因表达量极显著高于培养3、7、9 d(P<0.01);利用三维模式培养5 d的BMECsβ-酪蛋白的基因表达量极显著高于培养3、7 d(P<0.01),高于培养9 d,但差异不显著(P>0.05)。结果显示,三维模式下培养时间影响BMECs中αs1-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白的基因表达量,本试验条件下最佳培养时间为5 d。
- 王秀美侯先志敖长金高民考桂兰高爱武兰儒冰塔娜
- 关键词：奶牛乳腺上皮细胞酪蛋白基因表达
- 消化酶及胎牛血清对奶牛乳腺上皮细胞培养的影响被引量：2
- 2009年
- 本试验研究了不同浓度及组合消化酶对奶牛乳腺组织分离的影响以及不同FBS浓度培养基对奶牛乳腺上皮细胞纯化和生长的影响。试验结果表明0.25%胰酶+0.2%Ⅱ胶原酶对组织块分离效果最好,乳腺上皮细胞生长最多,5%与10%浓度FBS对奶牛乳腺上皮细胞纯化效果最好,5%与10%浓度FBS对细胞生长没有明显的差异(p>0.05),但明显高于其他处理组(p<0.01)。
- 杨银芬考桂兰高爱武侯先志李大彪王秀美杨苗
- 关键词：奶牛乳腺上皮细胞胎牛血清消化酶
- 黑白花奶牛乳腺上皮细胞冻存方法的研究被引量：1
- 2010年
- 本试验研究了北方地区黑白花奶牛乳腺上皮细胞的最佳冻存方法。采用内蒙古地区健康黑白花奶牛的新鲜乳腺组织,将组织进行Ⅱ型胶原酶消化后原代培养,培养的细胞经5代纯化后将密度调整为1×106个/mL。采用6种处理方法进行冻存,各设3个重复。液氮冻存1个月后,分别将6种不同方法冻存的细胞复苏后测定细胞活性,包括冻存死亡率、贴壁细胞占活细胞的比率、凋亡率等,同时进行形态学观察。结果显示,处理1组与2、3、5组间冻存死亡率存在极显著差异(P<0.01),处理1、4、6组间冻存死亡率无显著差异(P>0.05),处理2、6组间冻存死亡率存在极显著差异(P<0.01);处理4组的贴比率高于处理2、5、6组,存在极显著差异(P<0.01)。形态学观察结果发现,处理1、4组细胞较其它组生长状态良好。因此,处理4可作为黑白花奶牛乳腺上皮细胞的最佳冻存方法。
- 王秀美考桂兰侯先志高爱武杨苗杨银芬
- 关键词：冻存凋亡率乳腺上皮细胞
- 奶牛乳腺上皮细胞的二维和三维培养及培养后酪蛋白基因的表达被引量：1
- 2012年
- 本试验研究了二维和三维培养对奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)形态与β-酪蛋白、κ-酪蛋白、αs1-酪蛋白基因表达的影响。试验采用内蒙古地区3头5岁泌乳期健康荷斯坦奶牛的乳腺组织,将BMEC经3代培养纯化后分别进行二维和三维培养,观察不同培养模式下细胞的生长形态,测定β-酪蛋白、κ-酪蛋白、αs1-酪蛋白基因的表达量。结果表明:2种培养模式下的BMEC呈现不同的细胞形态,二维培养的BMEC呈典型铺路石样细胞形态,三维培养的BM EC则形成了类腺泡的聚集物和管腔结构。利用三维培养的BM EC的αs1-酪蛋白基因的表达量显著地高于二维培养(P<0.05),三维培养的BMEC的β-酪蛋白和κ-酪蛋白基因的表达量极显著地高于二维培养(P<0.01)。结果提示,三维培养的BMEC 3种酪蛋白基因的表达量均高于二维培养,三维培养的BMEC在形态上呈现的特点与在体内更加接近。
- 王秀美侯先志高爱武考桂兰高民李大彪兰儒冰张楠张艳明黄清瑞
- 关键词：奶牛乳腺上皮细胞酪蛋白
- 二、三维培养模式对奶牛乳腺上皮细胞泌乳代谢相关基因的影响
- 本文主要进行了奶牛乳腺上皮细胞（BMEC）三维培养体系的建立，在此基础上通过不同的试验条件下（全营养因素处理、单一氨基酸处理、催乳素处理）比较二、三维养模式对奶牛乳腺上皮细胞泌乳代谢相关基因的影响。同时利用优化的培养模式...
- 王秀美
- 关键词：奶牛乳腺上皮细胞
- 不同冻存液对奶牛乳腺上皮细胞冻存质量的影响被引量：6
- 2010年
- 试验旨在探究奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)最佳的冻存液以改善乳腺上皮细胞的冻存质量。BMECs传至第5代后分别加入以下10种不同配方的冻存液。A组:85%DMEM+10%胎牛血清+5%DMSO;B组:80%DMEM+10%胎牛血清+10%DMSO;C组:75%DMEM+10%胎牛血清+15%DMSO;D组:70%DMEM+10%胎牛血清+20%DMSO;E组:85%DMEM+5%胎牛血清+10%DMSO;F组:75%DMEM+15%胎牛血清+10%DMSO;G组:70%DMEM+20%胎牛血清+10%DMSO;H组:80%DMEM+10%胎牛血清+10%甘油;I组:70%DMEM+10%胎牛血清+20%甘油;J组:60%DMEM+10%胎牛血清+30%甘油,冻存前统一调整细胞密度到1×106个/mL冻存。分别对复苏后的细胞进行台盼蓝染色计算存活率和PI/Hoechst33258双染计算凋亡率。结果表明:BMECs经不同冻存剂冻存复苏后,细胞活力、形态学及凋亡率表现有所不同,其中B组和G组的活力和24h贴壁率较其他组高,二者的凋亡率较低,二者之间差异无显著性(P>0.05);传代后B组细胞的生长状况最好。
- 杨苗考桂兰侯先志高爱武李大彪王秀美杨银芬
- 关键词：奶牛乳腺上皮细胞
- 奶牛乳腺上皮细胞不同代数对乳蛋白基因表达的影响被引量：2
- 2012年
- 为了研究泌乳期奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelialcells,BMECs)不同代数乳蛋白基因αs1-casein,β-casein,κ-casein的表达。利用real-time PCR方法分别对泌乳期奶牛乳腺组织,以及由乳腺组织分离得到的细胞原代(P0),1代(P1),2代(P2),3代(P3),4代(P4),5代(P5)中的乳蛋白基因表达状况进行检测。结果表明:αs1-casein,β-casein,κ-casein在泌乳期奶牛乳腺上皮细胞原代及传代细胞中有不同程度的表达。其中,原代中的表达量显著高于P1～P5(P<0.05),而P1～P5之间的表达量无显著差异(P>0.05)。并且随着传代次数的增加,基因表达量呈现逐渐下降的趋势。说明P2～P5 BMECs可以作为基础理论问题研究的试验材料而被应用。
- 韩亚南侯先志考桂兰王秀美杨金丽高爱武杨银芬赵青高民
- 关键词：奶牛乳腺上皮细胞实时荧光定量PCR代数乳蛋白
- 牛β-酪蛋白多克隆抗体的制备及鉴定被引量：4
- 2010年
- 以牛β-酪蛋白标准品为免疫原,免疫健康新西兰白兔,制备了兔抗牛β-酪蛋白的多克隆抗体。经亲和层析纯化后,用SDS-PAGE电泳及考马斯亮蓝染色检测抗体的纯度,经ELISA法测定β-酪蛋白抗体的效价为1∶1600,Western-blot分析发现制备的抗体与β-酪蛋白可以发生特异性结合。表明,成功制备了纯度较高和特异性较好的牛β-酪蛋白多克隆抗体,为乳腺生物反应器的研究提供了有效的工具。
- 杨苗侯先志杨银芬考桂兰高爱武王秀美韩亚南
- 关键词：Β-酪蛋白多克隆抗体酶联免疫吸附试验
