王秀平
- 作品数：19 被引量：46H指数：4
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 3种市售免疫调节剂作为流感病毒融合蛋白NM2e亚单位疫苗佐剂的研究
- 2010年
- 目的:观察具有免疫调节作用的市售左旋咪唑、西米替丁、伐地那非作为甲型流感病毒核蛋白(NP)与基质蛋白2胞外区多肽(M2e)融合蛋白NM2e亚单位疫苗佐剂的可能性。方法:将左旋咪唑、西米替丁、伐地那非单独或者分别与Al(OH)3配伍作为NM2e蛋白佐剂,经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,通过体液和细胞免疫检测及病毒攻击实验研究这些免疫调节剂作为疫苗佐剂的可能性。结果:左旋咪唑对NM2e蛋白亚单位疫苗无明显的佐剂效应,但与铝佐剂合用可使攻毒后存活小鼠体重恢复加快;西米替丁可以明显提高NM2e蛋白诱发的特异性IgG2a滴度,提高攻毒后小鼠的存活率(30%),但保护效果明显低于铝佐剂(70%),与铝佐剂无明显的协同作用;伐地那非能明显增加NM2e蛋白诱发的特异性IgG1、IgG2a滴度,提高攻毒后小鼠的存活率(36%),但与铝佐剂合用有相互抑制作用。结论:左旋咪唑、西米替丁、伐地那非对NM2e蛋白均有一定的免疫调节作用,其中西米替丁和伐地那非能提高攻毒保护效果,但保护效果明显低于Al(OH)3,与Al(OH)3联合使用均无协同作用。
- 蒋涛王文玲王宾王秀平黄保英谭文杰阮力
- 关键词：亚单位疫苗左旋咪唑西米替丁伐地那非
- 一种编码甲型流感病毒NP蛋白和M2e多肽的融合基因
- 一种编码甲型流感病毒NP蛋白和M2e多肽的融合基因。所属技术领域：1.生物技术，2.基因工程疫苗。本发明提供一种根据大肠杆菌偏爱密码子优化的人工合成的编码甲型流感病毒核壳蛋白NP和基质蛋白2胞外区M2e多肽的融合基因NM...
- 阮力王文玲黄保英王秀平
- 中国人感染H5N1亚型高致病性禽流感病例病毒分离培养探讨
- 2009年
- 目的分析中国大陆人感染H5N1高致病性禽流感病例标本采集和病毒分离培养之间的关系。方法对2005年10月至2009年3月中国大陆人感染H5N1高致病性禽流感病例标本进行病毒分离培养。结果标本采集时间主要集中在发病后的0-14d，其中0-7d采样的标本阳性率分布相对集中，病毒分离的效果要更加显著；标本采集类型主要为呼吸道标本，其中下呼吸道标本的病毒分离阳性率分布较集中，病毒分离效果也更明显。结论人禽流感病例标本采集时间及标本的采集类型对病毒分离有一定的影响，应在发病的急性期侧重于采集下呼吸道标本，这样利于提高病毒分离的阳性率。
- 邹淑梅张烨李梓董婕赵新生董丽波温乐英徐翠玲王敏郭俊峰隗合江高荣宝王秀平舒跃龙
- 关键词：流感病毒A型病毒培养
- CpG对乙型肝炎基因重组(CHO细胞)疫苗免疫效果的影响被引量：11
- 2002年
- 为了研究CpG -寡脱氧核苷酸 (CpG -OPN)作为佐剂对乙型肝炎基因重组 (CHO细胞 )疫苗 (简称乙肝疫苗 )免疫效果的影响 ,以乙肝疫苗加Al(OH) 3 、疫苗加CpG和疫苗加Al(OH) 3 与CpG3三种配伍方式 ,通过腹腔、皮下或肌内 3种不同途径免疫Balb/c小鼠 ,观察不同免疫途径和不同配伍的免疫效果。同时又将疫苗与CpG混合后在4℃存放 6个月再免疫小鼠 ,观察CpG的稳定性。结果表明 :① 3种免疫途径中以肌内注射效果最好 ,这在使用CpG的实验组尤为明显 ,在该组肌内免疫的ED50 比腹腔的低了 10倍 ,而诱发的抗体滴度提高了 3倍 ;②疫苗与CpG、Al(OH) 3 联合使用的免疫效果最好 ,在肌内免疫时联合使用的免疫效果比疫苗 +Al(OH) 3 提高 4倍 ,比疫苗+CpG提高 7倍 ;③疫苗 +Al(OH) 3 免疫时 ,表现为IgG1抗体亚型占优势 ,而再加入CpG后则IgG1和IgG2a均升高 ,以IgG2a最显著 ;④疫苗与CpG混合后 4℃保存半年 。
- 王四清田淑芳许洪林郭斐王文陈红王秀平王世峰阮力
- 关键词：CPG乙型肝炎基因重组CHO细胞疫苗免疫效果
- 季节性流感病毒H1N1和H3N2疫苗株在BALB/c小鼠中的传代适应被引量：1
- 2015年
- 目的 探索季节性流感病毒H1N1和H3N2疫苗株在BALB/c小鼠中传代适应的可能性.方法 将2008-2009年度季节性流感病毒疫苗株滴鼻感染BALB/c小鼠,在病毒增殖高峰期取肺组织制备肺悬液,连续传代10代,并对野生型与鼠肺适应株在小鼠中的致死性与全基因组序列进行比较.结果 H3N2疫苗株感染BALB/c小鼠后均未在肺部检测到病毒;而H1N1疫苗株感染小鼠后第2天为病毒生长高峰期,病毒滴度随传代次数的增加而升高;全基因组序列分析结果表明HA-N142D突变与病毒毒力的的提高密切相关.结论 H3N2疫苗株难以在BALB/c小鼠中有效复制与适应;而H1N1疫苗株能够在BALB/c小鼠中有效复制,其毒力可以通过连续的鼠肺传代而提高,HA-N142D突变对H1N1疫苗株致病性的增加密切相关,为进一步研究流感病毒鼠肺适应的分子机理奠定了基础.
- 黄保英王秀平王文玲谭文杰阮力
- 关键词：流感病毒A型流感疫苗
- 高效表达乙肝表面S（主蛋白）和前S1（大蛋白）融合抗原的转基因哺乳动物细胞系
- 在乙肝表面抗原PreS1(21－47)基因片段与S基因的第223位相连的基础上，在其下游引入RNA加聚A信号AATAA、乙肝病毒增强子1(En1)和增强子2(En2)，及突变的x基因(mX)构成pCHBSS1G质粒。将p...
- 田淑芳阮力刘文军杨芙蓉宗芳李军陈红王文阮薇琴王秀平
- 文献传递
- 含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的慢病毒载体的制备与表达分析被引量：2
- 2011年
- 目的:制备含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的慢病毒载体,为慢病毒载体的进一步广泛应用奠定基础。方法:克隆构建含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的转基因载体pCS-gluc-2A-eGFP,酶切与序列分析鉴定其正确后,与包装质粒pCMVHR'Δ8.2、包膜质粒pVSV-G共转染293FT细胞,获得含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的重组慢病毒载体;重组慢病毒载体感染A549、Huh7细胞后,用荧光显微镜直接观察报告基因GFP的表达,或取细胞上清实时检测分泌型萤光素酶的表达。结果:制备了含双报告基因的重组慢病毒载体,感染细胞后可以活体观察绿色荧光蛋白的表达,也可以快速灵敏地检测到分泌型萤光素酶的表达。结论:所获含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的重组慢病毒载体感染效率高,表达易于活体实时检测,灵敏度高。本研究为慢病毒载体的广泛应用奠定了基础。
- 管洁王秀平邓瑶周为民吴小兵谭文杰
- 关键词：慢病毒载体
- 哺乳动物细胞分泌的乙型肝炎病毒表面S+PreS1融合抗原的理化和生物学性状被引量：9
- 2002年
- 研究了哺乳动物细胞(转基因GdSS1-18细胞系)分泌的乙型肝炎(乙肝)病毒表面S+PreS1融合抗原(SS1)纯品的理化及生物学性状,结果表明:经HPLC柱层析呈现一个对称峰,证明HBsAg颗粒所带电荷的均一性;SDS-PAGE出现P24及P27条带,未出现Gp30的条带,凝胶扫描分析其各条带分别各占22 3%、77 7%、0%;West ernblot试验证实,P27和Gp30能与S及S1抗体结合,而P24条带仅能与S抗体结合,表明S、PreS1是特异性条带;N-末端的氨基酸序列与所用目的基因编码的序列相同;乙肝SS1融合抗原在4℃储存较稳定。动物实验结果表明:与单纯含S基因的参比疫苗相比,含SS1融合基因疫苗免疫Balb/c小鼠既产生S抗体,又产生S1抗体,S抗体的ED50滴度与参比疫苗相似,S1抗体产生早于S抗体。
- 田淑芳宗芳陈红王文张陵林王秀平杨芙蓉阮力
- 关键词：分泌乙型肝炎病毒理化性状生物学性状免疫原性
- 甲型流感病毒核蛋白在大肠杆菌中的可溶性高效表达与纯化被引量：4
- 2011年
- 为了在大肠杆菌中高效表达甲型流感病毒A/京科/30/95(H3N2)核蛋白NP,以便对原核表达的NP蛋白进行免疫原性研究,本研究通过密码子优化及全基因合成等方法,将3种形式的NP基因:与6×His标签融合的NP基因NP(His)、非融合的野生型NP基因NPwt及非融合的按大肠杆菌优势密码子改造的基因NP(O)分别插入原核表达载体pET-30a,构建了表达3种形式NP基因的3种原核表达质粒并研究不同质粒中NP蛋白的表达形式、条件、纯化工艺及抗原性。限制性酶切反应与测序表明,三种形式的NP基因均正确插入原核表达质粒pET-30a;SDS-PAGE凝胶电泳显示,三种形式的NP基因均能在大肠杆菌中表达,NP(O)基因的表达量最高;在不同温度诱导条件下,NP蛋白呈现可溶性表达,NP(O)基因可溶性高效表达的条件为:T=25℃,t=10 h;经阴离子交换和凝胶过滤层析两步纯化,可溶性表达的NP蛋白纯度可达90%;Western blot检测显示,纯化的NP能与流感病毒A/PR/8/34(H1N1)株感染小鼠的血清发生特异性结合。这些结果表明,非融合表达的密码子优化甲型流感病毒NP蛋白能在大肠杆菌中高效表达和纯化,同时保持良好的免疫反应活性。
- 黄保英王文玲王秀平蒋涛谭文杰阮力
- 关键词：甲型流感病毒核蛋白原核系统密码子优化蛋白质表达
- 甲型流感病毒NP和M2e融合蛋白高效表达和纯化
- 2015年
- 目的 探索甲型流感病毒NP-M2e融合蛋白在大肠埃希菌中可溶性高效表达和纯化的条件.方法 将NP-M2e融合基因（NM2e）经密码子优化后插入pET30a后获得pET30a-NM2e原核表达质粒,通过转化BL21（DE3）后的克隆筛选、诱导温度与诱导时间等条件的优化实现NM2e蛋白在大肠埃希菌中的可溶性高效表达;表达产物经离子交换层析与分子筛层析纯化并通过Western-Blot鉴定其抗原性.结果 NM2e基因正确插入pET30a中并能在大肠埃希菌中表达;25℃温度诱导下NM2e蛋白出现可溶性表达,诱导时间由4h延长至10 h可明显提高蛋白表达量;可溶性NM2e蛋白经阴离子交换和凝胶过滤层析两步纯化后的纯度可达90％,纯化产物能特异性结合NP鼠多抗及M2e鼠单抗.结论 甲型流感病毒NM2e融合蛋白能在大肠埃希菌中高效表达和纯化并保持良好的免疫反应活性。
- 黄保英王秀平谭文杰王文玲阮力
- 关键词：流感病毒A型原核细胞蛋白质工程
