王新平 作品数:59 被引量:327 H指数:14 供职机构: 吉林大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 吉林省科委资助项目 长江学者和创新团队发展计划 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 生物学 更多>>
猪流行性腹泻病毒病S蛋白单抗制备及夹心ELISA检测PEDV方法的建立与应用 被引量:15 2017年 应用PCR扩增出PEDV毒株的纤突糖蛋白S基因序列,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建出pGEX-4T-1-S表达载体。应用IPTG诱导表达重组S蛋白,并将重组蛋白以弗氏完全/不完全佐剂乳化后免疫小鼠,制备抗PEDV S蛋白的单克隆抗体,并以此建立了检测PEDV抗原的双抗体夹心ELISA方法,确定、优化了所建立的ELISA反应条件。以建立的双抗体夹心ELISA和RT-PCR方法对PEDV样品进行了比较检测,两者的符合率为100%。应用ELISA检测了吉林省疑似PED流行猪场的粪便样品,发现PEDV阳性检出率为68%。该研究为PED诊断及流行病学调查提供了一种特异、敏感、快速和易于在基层应用的技术方法及本病的防治提供了流行病学理论依据。 王明月 王明月 刘亚静 郭昌明 朱利塞 邢泽黎 朱利塞 欧阳红生 王新平关键词:猪流行性腹泻 猪流行性腹泻病毒 双抗体夹心ELISA S蛋白 检测E种肠道病毒的免疫荧光试剂及其检测试剂盒 本发明公开了检测E种肠道病毒的免疫荧光试剂及其检测试剂盒,是应用本发明的检测E种肠道病毒的免疫荧光试剂,试剂建立的直接免疫荧光检测方法,既可用于临床快速诊断E种肠道病毒感染,也可用于E种肠道病毒抗原在组织中的定位与鉴定。... 王新平 邢泽黎 朱利塞 郭昌明 刘丹 盖小春 张群 袁悦 刘亚静 王方文献传递 吉林省不同地区牛肠道病毒遗传变异分析 被引量:7 2018年 为了解近年来吉林省牛肠道病毒(bovine enteroviruses,BEV)感染流行情况及病毒株分子变异特征,本研究利用双抗体夹心ELISA方法,对采集于吉林省不同地区的326份疑似BEV感染的牛粪便样品进行检测,并对ELISA检测出的阳性样品进行病毒分离培养;同时对分离毒株5’UTR基因序列进行扩增、序列比对分析。结果表明,不同地区的牛群均存在程度不同的肠道病毒感染;BEV分离毒株的核苷酸序列与本实验室2012年分离的国内首株E种牛肠道病毒HY12基因序列的同源性为86.2%~96.9%。其中从公主岭地区分离的毒株GZL-6与HY12毒株差异性最大,其同源性只有86.2%;而与HY12同地区分离出的HY68毒株同源性只有86.3%。国内外现有BEV毒株序列遗传进化树分析结果显示,从吉林省新分离到11株BEV与HY12处在同一个分支。上述结果表明,新近分离的BEV毒株,无论源于HY12毒株的原地区还是其他不同地区,均有不同程度的核苷酸序列差异。本研究为BEV感染的诊断、防治及肠道病毒进化变异研究打下基础。 刘亚静 李欣 张群 赵又霓 贾英琪 鲁海冰 郭昌明 朱利塞 朱利塞猪瘟病毒保护性抗原E2基因的克隆、序列分析及在大肠杆菌中的表达 1997年 本研究首次用RT-PCR技术分两段扩增了我国猪瘟病毒(HCV)标准强毒石门株的主要保护性抗原E2基因,并将其进行了克隆和序列分析。将这两个片段连接成完全的E2基因,并将其克隆到原核表达载体pBV220和pET-28a(+)中,重组表达载体转化、诱导的受体菌经Western印迹和直接ELISA检测能够表达E2抗原。 用RT-PCR技术对从我国多个地区收集的猪瘟病料进行检测,结果从吉林、长春、南京、重庆、昆明、佛山病料中扩增出了HCV 李红卫 涂长春 金扩世 王新平 吕宗吉 余兴龙 殷震关键词:猪瘟病毒 肠杆菌 E2基因 氨基酸序列 野毒株 检测F种肠道病毒双抗体夹心ELISA方法的建立及初步应用 2022年 依据F种肠道病毒(enterovirus species F,EV-F)SD-S67毒株的基因组序列设计合成引物,RT-PCR扩增出该毒株的VP1基因,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1的BamHⅠ/EcoRⅠ位点,表达出VP1重组蛋白。以纯化VP1重组蛋白为免疫原,制备兔源多克隆抗体,并以制备的抗体建立了检测F种肠道病毒的双抗体夹心ELISA方法,同时对山东和河南省部分地区牛群感染EV-F进行了初步的流行病学调查。结果显示,捕获抗体的最佳包被量为400 ng/孔,HRP酶标抗体的最佳稀释倍数为1∶400;确定的方法判断标准为样品的D_(490)>0.217时判定为阳性。建立的ELISA方法可以特异性检测出EV-F病毒抗原,而EV-E和BVDV病毒抗原检测结果均为阴性,表明方法具有较好的特异性。以建立的ELISA方法检测不同稀释倍数的阳性样品,结果稀释1000倍后的样品检测结果仍为阳性,表明建立的方法具有较高的敏感性。应用建立的方法检测部分样品,组内变异系数为1.05%~9.24%,组间变异系数为1.39%~6.78%,说明该方法具有良好的重复性。同时部分样品的ELISA和PCR方法的检测结果显示,两者的符合率为100%。以该方法对山东、河南两地牛群样品进行检测,结果显示牛群的EV-F的感染率分别为12%和8%。结果表明,建立的F种肠道病毒双抗体夹心ELISA方法具有较高的特异性、敏感性,且快速简便,可用于F种肠道病毒感染的诊断与流行病学调查。 王浴光 常晓冉 胡俊英 刘叙 蔡梦露 章凡 胡卉琪 王新平关键词:双抗体夹心ELISA 流行病学调查 G种肠道病毒诊断抗原及其试剂盒 本发明公开了一种G种肠道病毒基因VP1,它的碱基序列如序列表SEQ ID NO.1所示,表达的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示的蛋白VP1,作为包被抗原制备的一种用于检测动物血清中G种肠道病毒抗体的间接ELI... 王新平 鲁海冰 王明月 郭昌明 刘亚静 张群 朱利塞 王芳文献传递 从吉林省发生先天性关节弯曲-脑积水综合征新生犊牛分离鉴定出阿卡班病毒 被引量:4 2022年 本研究针对吉林省多地发生的一种新生犊牛先天性畸形和脑积水,临床上以四肢关节弯曲呈蜷缩状、无法伸直、不久发生死亡为特征的疾病进行了流行病学调查及病原分离与鉴定。结果应用MDBK细胞从发病与病死动物体内分离出3株病毒,命名为JL-AKA-CC21-1株、JL-AKA-CC21-2株和JL-AKA-YJ21。电镜负染观察显示,分离病毒粒子大小为70~130 nm,与病料中观察的病毒粒子相同。病毒接种MDBK细胞可引起典型的细胞病变,病变细胞聚集、变圆与脱落。分子生物学鉴定结果表明,上述分离毒株均为阿卡班病毒(Akabane virus, AKAV)。本研究从发生新生犊牛先天性畸形和脑积水的病死牛体内分离出AKAV,该研究结果将对今后吉林省本病的防控提供理论依据。 章凡 古丽巴哈尔·图尔荪 常晓冉 王浴光 杨丽 曹利利 郭昌明 郭利 王新平关键词:先天性关节弯曲 脑积水 布尼亚病毒 牛病毒性腹泻病毒CC13B株全基因组序列及分析 被引量:3 2014年 从长春地区某牛场发生疑似为牛病毒性腹泻-黏膜病的病牛粪样中分离到1株病毒,经序列测定为牛病毒性腹泻病毒命名为BVDV CC13B株。核苷酸序列的测定结果显示,CC13B毒株的完全基因组序列由12 265个核苷酸组成,其中5′端非编码区包含380个核苷酸,3′端非编码区包含188个核苷酸。病毒基因组含有1个大的读码框架,编码1个由3 898个氨基酸组成的前体多聚蛋白。序列对比结果显示,CC13B毒株的核苷酸和氨基酸序列与国外CP-5A毒株同源性最高,分别为为96.2%和97.3%;而与国内分离株JZ05-1的同源性最低,分别为69.8%和71.0%。系统进化树分析结果表明,CC13B毒株与国内分离的长春184、Xinjiang-3156和H等分离株归类为BVDV基因Ⅰ型的Ib基因亚型。结果表明,长春地区近年发生的牛病毒性腹泻-黏膜病依然主要由BVDV基因Ⅰ型毒株引起。 朱利塞 邢泽黎 贾川川 王婷 盖小春 宋林泽 王曦岩 涂长春 王新平关键词:牛病毒性腹泻 牛病毒性腹泻-黏膜病 牛病毒性腹泻病毒 BVDV 吉林省某猪场新发猪葡萄球菌引起的化脓性肺炎 被引量:6 2016年 对吉林省某猪场暴发的一种以呼吸困难、发绀和腹泻为主要临床特征,剖检以化脓性肺炎和纤维素性胸膜肺炎和腹膜炎为病变特征的疫病进行了深入研究。通过对送检病猪体内的实质器官和血液中分离出的葡萄球菌进行形态学鉴定、分离培养、生化特性鉴定和分子生物学鉴定,发现所分离的菌株为猪葡萄球菌,并将其命名JLHN15。由猪葡萄球菌引起猪化脓性肺炎或胸膜肺炎在国内外尚未见有报道,应引起国内临床兽医工作者重视。 王明月 王新平 郭昌明 邢泽黎 朱利塞 鲁海冰 盖小春 王方关键词:猪葡萄球菌 金黄色葡萄球菌 猪渗出性皮炎 不同免疫程序对猪瘟活疫苗免疫效果的研究 被引量:10 2017年 为了解规模化猪场猪瘟疫苗免疫情况和猪瘟病毒感染情况,采用商业化ELISA试剂盒,对大庆市某规模化猪场530份血清样品分别进行猪瘟抗体水平和猪瘟病毒抗原检测。试验结果表明:经过二次免疫的猪群,猪瘟抗体阳性率为95.0%(115/121),比一次免疫的抗体阳性率66.1%(74/112)提高了28.9%,而且抗体水平整齐度较一次免疫显著提高。在530份受检猪只中,利用ELISA试剂盒检测血清中的猪瘟抗原,阳性检出率为0%,表明该猪场猪瘟病毒感染风险较低,对18份可疑样品用RT-PCR检测,没有检测出猪瘟病毒。研究表明,对当前的猪场仅仅实施一次免疫是不够的,只有实施二次免疫,才能获得较高的免疫抗体水平,有效地防控猪瘟疫病的发生。 卫选智 张付华 王新平 欧阳红生 郭昌明关键词:猪瘟病毒 猪瘟抗体 免疫程序