汤云霞
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
- 供职机构：中山大学中山医学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 登革2型病毒全长NS1蛋白在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达、纯化及其初步鉴定
- 近年来,国内外曾用多种表达系统表达NS1基因,原核表达方法简单,但其缺乏真核细胞特有的翻译后修饰,如糖基化修饰,基因的正确剪切等,且外源蛋白难以纯化.昆虫细胞表达系统和哺乳动物表达系统可以瞬时表达重组蛋白,但不适于表达大...
- 汤云霞
- 关键词：登革病毒NS1基因
- 文献传递
- 登革病毒1、2型病毒样颗粒免疫学研究
- 目的：将制备的登革1、2型病毒样颗粒(VLPs)单独及联合免疫Ba1b/c小鼠,研究其刺激机体产生的免疫应答。方法：采用间接ELISA法检测VLPs特异性IgG抗体效价及攻毒后血清细胞因子变化;采用间接免疫荧光法检测免疫...
- 刘岩周俊梅方丹云喻治准晏辉钧刘文权汤云霞付春云江丽芳
- 关键词：登革病毒致病机制细胞免疫动物模型
- 文献传递
- 登革1-4型病毒样颗粒(VLPs)的构建、表达及免疫学研究
- 刘岩周俊梅喻治准方丹云晏辉钧刘文权汤云霞付春云江丽芳
- SARS-CoV感染者血清IFN-γ和TNF-α的动态变化及其意义被引量：2
- 2004年
- 目的 探讨SARS患者血清IFN γ和TNF α在SARS冠状病毒感染免疫中的作用。方法 应用酶联免疫吸附法 (ELISA)测定广州地区 2 8例SARS冠状病毒感染患者双份血清IFN γ和TNF α的水平。实验数据采用两样本均数t检验法。结果 2 8例SARS冠状病毒感染者急性期血清IFN γ和TNF α水平比正常健康对照组明显增高 (P <0 .0 5 ) ;恢复期血清IFN γ水平比正常健康对照组明显增高 (P <0 .0 5 )。感染病程第 1周 ,患者血清IFN γ水平达高峰 ,然后逐渐下降。SARS患者血清TNF α水平在病程第 2周达高峰 ,然后逐渐下降。结论 IFN γ和TNF
- 江振友周经姣方丹云晏辉钧汤云霞江丽芳
- 关键词：严重急性呼吸综合征SARS冠状病毒
- 登革2型病毒包膜蛋白在毕赤酵母中的表达和病毒样颗粒的组装被引量：4
- 2011年
- 目的在组成型的毕赤酵母系统中表达登革2型病毒包膜蛋白E和前膜蛋白prM,并研究病毒样颗粒在酵母细胞中的组装特性。方法以登革2型病毒ZS01/01株mRNA为模板,扩增编码prM/E蛋白的基因。将目的基因克隆至表达载体pGAPZaA的多克隆位点,并转化毕赤酵母GS115。经Zeocin抗生素筛选和PCR鉴定后获得酵母菌重组克隆,并进行表达和鉴定。结果成功克隆登革2型病毒prM/E基因,SDS-PAGE和Western blot检测表明包膜蛋白E在组成型的毕赤酵母系统中得到高水平表达;利用透射电镜在重组酵母胞浆内检测到30-50 nm的登革2型的病毒样颗粒,并发现类似登革病毒感染的双层膜结构;免疫电镜结果证实重组病毒样颗粒可以与抗登革2型病毒血清反应,具有免疫反应性。结论成功的建立了组成型表达登革2型病毒样颗粒的毕赤酵母系统,为登革病毒样颗粒疫苗的制备奠定了基础。
- 刘文权江丽芳刘岩江汉宁汤云霞方丹云
- 关键词：登革病毒包膜蛋白毕赤酵母病毒样颗粒
- 重组登革病毒2型NS1蛋白的分泌表达及其抗体制备
- 2009年
- 目的分泌表达重组登革病毒2型NS1蛋白,并制备兔抗NS1多克隆抗体。方法应用毕赤酵母表达系统表达全长登革病毒2型NS1蛋白,制备抗原,免疫家兔;采集免疫血清,制备兔抗NS1蛋白多克隆抗体;应用Western-blot、ELISA法鉴定和检测抗体效价;经辛酸-硫酸铵法、亲和层析法纯化抗体,SDS-PAGE电泳检测抗体的纯度;用Western-blot、ELISA法检测纯化后IgG性质及效价。结果重组NS1蛋白获得分泌表达,其免疫血清经Western-blot、ELISA法证实获得特异性兔抗NS1多克隆抗体,抗体效价为1∶6000。结论重组登革病毒2型NS1蛋白在毕赤酵母真核表达系统中高效表达,纯化产物有较强的免疫原性,成功获得特异性兔抗NS1多克隆抗体,为进一步研究登革病毒NS1蛋白及其抗体在登革病毒致病与免疫机制中的作用奠定了基础。
- 江澜汤云霞尹悦方丹云周俊梅江丽芳
- 关键词：登革病毒NS1蛋白多克隆抗体
- DEN2重组E蛋白单克隆抗体的制备及其生物学活性被引量：2
- 2005年
- [目的]研制登革病毒E蛋白特异性单克隆抗体,鉴定其各种生物学特性.[方法]用纯化的Pichia pastoris酵母表达的DEN2重组E蛋白作为抗原,免疫Balb/c小鼠,采用传统的细胞融合、有限稀释法克隆化杂交瘤细胞,制备稳定分泌McAbs的细胞株.采用硫酸铵沉淀法纯化腹水中的McAbs,用ELISA、IFA、Western Blot和空斑减数中和实验等鉴定McAbs的各种生物学活性.[结果]用ELISA、IFA检测证实5株杂交瘤细胞产生的McAbs与DEN2重组E蛋白和DEN全病毒均有较高的亲和力;Western Blot分析发现其中3株杂交瘤细胞(3G3,6G11,4E3)分泌的McAbs能与其相对分子质量Mr=(66～69)×103的DEN2重组E蛋白结合.空斑减数中和实验证实所获得的单克隆抗体具有中和登革病毒感染C6/36细胞的作用.[结论]成功地制备了5株抗登革病毒E蛋白特异性的McAbs,为进一步研究E蛋白的结构和功能及临床诊断试剂盒研发打下了基础.
- 曾祥凤江丽芳方丹云汤云霞魏惠永晏辉钧
- 关键词：E蛋白DEN单克隆抗体生物学活性登革病毒杂交瘤细胞
