毛青青
- 作品数：6 被引量：25H指数：2
- 供职机构：南京农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家绒毛用羊产业技术体系建设专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 不同启动子RNA干扰载体构建及验证
- RNA干扰作用(RNA interference，RNAi)是由双链RNA(dsRNA)引发的转录后基因沉默，主要是指dsRNA分子进入细胞内，特异性降解与之同源的mRNA，从而特异高效地抑制相应基因表达的现象。为建立稳...
- 毛青青
- 关键词：RNA干扰载体成纤维细胞启动子转基因动物
- EGF和β-巯基乙醇对羔羊卵母细胞体外受精和体外发育的影响被引量：9
- 2012年
- [目的]为优化幼畜卵母细胞体外培养体系提供理论基础。[方法]研究在成熟液中添加EGF和β-巯基乙醇对绵羔羊卵母细胞受精和卵裂、囊胚情况的影响,并与成年绵羊卵母细胞进行比较。[结果]在成熟液中添加不同浓度的EGF对羔羊卵母细胞卵裂率和囊胚率无显著影响(P>0.05)。添加不同浓度的β-巯基乙醇可以提高羔羊卵母细胞囊胚率,其中添加100μmol/Lβ-巯基乙醇有显著影响(P<0.05),但对卵裂率影响不显著(P>0.05)。羔羊卵母细胞卵裂率和囊胚率均显著低于成年羊(P<0.05)。添加100μmol/L的β-巯基乙醇能显著提高羔羊卵母细胞正常受精率(P<0.05),且与成年羊卵母细胞受精率差异不显著(P>0.05)。未添加β-巯基乙醇多精入卵率显著高于成年羊(P<0.05),而添加100μmol/L的β-巯基乙醇多精入卵率与成年羊差异不显著(P>0.05)。成熟液中不添加β-巯基乙醇时未受精率(20.0%)高于成年羊组(12.3%)和β-巯基乙醇(13.5%),但差异不显著(P>0.05)。[结论]添加100μmol/L的β-巯基乙醇能显著提高羔羊卵母细胞发育能力,提高正常受精的比例并减少多精子受精的发生,但羔羊卵母细胞发育能力仍显著低于成年羊。
- 郭洪万鹏程石文艳倪建宏代蓉毛青青朱汇张宾刘长彬石国庆
- 关键词：卵母细胞体外受精EGF
- BMP4对小鼠毛囊数量的影响被引量：14
- 2012年
- 利用PolⅡ型人角蛋白14基因的启动子K14驱动eGFP-shRNA整合转录本的表达方法,制备在皮肤组织中高效表达靶向BMP4基因的siRNA转基因小鼠模型。利用Northern杂交的方法验证siRNA在转基因小鼠皮肤中高表达,但未从mRNA水平分析BMP4基因的表达变化。以建立的转基因小鼠模型为基础,检测小鼠皮肤组织中BMP4基因的表达变化,并观察妊娠18.5d(E18.5)转基因胎鼠与同窝阴性胎鼠背部皮肤组织切片中毛囊数量的变化,选择5个不同的视野进行毛囊数量计数后统计分析。结果表明,转基因小鼠皮肤组织中BMP4基因的表达下调,同时毛囊数量显著增加。表明利用融合表达载体制备转基因小鼠实现目的基因RNAi的方法可以有效地抑制动物体内目的基因的表达,同时也从胎鼠毛囊数量分析统计的结果发现,该基因对小鼠毛囊的发生发育有一定的影响。
- 毛青青代蓉沈思军郭洪万鹏程周平石国庆
- 关键词：转基因小鼠RNAIBMP4
- 组织特异RNAi转基因小鼠毛囊数量分析
- 利用已建立的由PolⅡ启动子K14表达eGFP-shRNA融合mRNA,从而在小鼠毛囊里表达成熟小干扰RNA的转基因小鼠模型,取E18.5天小鼠皮肤组织石蜡包埋后切片,在利用BMP4蛋白抗体进行免疫组织化学分析的同时HE...
- 沈思军毛青青万鹏程周平石国庆代蓉
- 关键词：基因工程RNA干扰统计分析
- 文献传递
- 组织特异RNAi转基因小鼠模型的构建被引量：2
- 2011年
- RNAi是一种行之有效的基因沉默的新方法,被广泛地应用于基因功能的研究、疾病的治疗以及新型疫苗的研制等领域.本研究通过原核显微注射干扰载体的方法制备转基因小鼠.选用皮肤组织特异表达的人源角蛋白14(K14)基因启动子(2000bp)作为表达载体启动子,成功地驱动融合表达载体EGFP-shRNA进行干扰片段前体的转录,进而生成成熟的干扰片段,靶向小鼠BMP4基因使其发生沉默.所得到的转基因小鼠及其杂交后代经PCR和Southern杂交鉴定,结果表明外源基因准确无误地整合到小鼠基因组.Northern杂交结果证明,小干扰RNA在皮肤组织中有较高水平的表达,在肺和肠组织中有较低水平的表达.研究结果表明,利用PolⅡ型(K14)启动子驱动shRNA融合转录本的表达,在特定组织高表达siRNA,从而达到抑制特定组织目的基因表达的技术路线是可行的.同时为利用K14启动子进行毛囊相关基因干扰研究积累了基础数据,为制备组织特异抑制基因表达的转基因大家畜提供了一个参考方法.
- 代蓉沈思军甘尚权毛青青万鹏程郭洪孟庆勇刘守仁
- 关键词：RNAI转基因小鼠模型
- 组织特异RNAi转基因小鼠BMP4基因表达分析
- RNAi作为一个便捷有效的检测技术,已经广泛应用于基因功能鉴定、药物有效靶点筛选和基因治疗等的研究中。本研究小组利用Pol II启动子K14表达eGFP-shRNA融合mRNA,制备了转基因小鼠,经Northern杂交验...
- 毛青青沈思军郭洪万鹏程周平石国庆代蓉
- 关键词：基因表达
- 文献传递
