杨静红
- 作品数：15 被引量：27H指数：3
- 供职机构：山东工商学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省自然科学基金国家自然科学基金黑龙江省博士后基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸡白细胞介素15真核表达质粒构建及其体外表达被引量：5
- 2009年
- 应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从ConA刺激20h的白莱航鸡脾脏T淋巴细胞中扩增出鸡白细胞介素15(ChIL-15)全基因片段。将其连接到克隆载体pMD18-T中得到重组克隆质粒pMD18-T-ChIL-15。阳性克隆质粒经鉴定正确后将ChIL-15亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,得到重组阳性表达质粒pcDNA3.1(+)-ChIL-15。阳性表达质粒经鉴定正确后应用磷酸钙法体外转染293T细胞,通过间接免疫荧光试验(IFA)检测到了ChIL-15蛋白在293T细胞中的表达。
- 马德星潘龙杨静红盖仁华李广兴
- 关键词：转染IFA
- 免疫组化方法检测细小病毒在雏鹅体内分布规律研究
- 2012年
- 采用间接免疫酶组织化学染色法对14日龄雏鹅人工感染GPV后,不同时间段病毒抗原在体内的定位及分布情况进行了检测。同时应用图像分析软件对抗原染色强度进行了定量分析。结果显示,感染后第1天到第21天的不同时间点可以从心脏、肺脏、脾脏、肝脏、法氏囊、胸腺、腺胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、食管十二种组织器官检测到病毒抗原。其中感染第5天感染组织最广泛,抗原染色强度最强,在检测的组织中空肠的检出率最高。病毒抗原广泛分布于肠道的上皮细胞、腺上皮细胞,肺泡壁细胞和肾小管的上皮细胞内,可见上皮细胞为GPV抗原的主要靶细胞。始终未能从大脑、胰腺和骨骼肌检测到GPV。
- 杨静红李广兴
- 关键词：鹅细小病毒
- 鸡白细胞介素15真核表达质粒构建及其体外表达
- 本研究从ConA刺激培养的SPF白来航鸡脾脏淋巴细胞中扩增鸡白细胞介素15(ChIL-15)全基因片段,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中。应用磷酸钙转染法体外将含有目的基因的真核表达质粒pcDNA3.1(+...
- 马德星潘龙李广兴杨静红
- 关键词：真核表达质粒白来航鸡体外表达真核表达载体
- 文献传递
- 免疫组化方法检测细小病毒在雏鹅体内分布规律研究
- 2012年
- 采用间接免疫酶组织化学染色法对14日龄雏鹅人工感染GPV后，不同时间段病毒抗原在体内的定位及分布情况进行了检测。同时应用图像分析软件对抗原染色强度进行了定量分析。结果显示感染后第1天到第21天的不同时问点分别可以从心脏、肺脏、脾脏、肝脏、法氏囊、胸腺、腺胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和食管十二种组织器官检测到病毒抗原。其中感染第5天感染组织最广泛，抗原染色强度最强，在检测的组织中空肠的检出率最高。病毒抗原广泛分布于肠道的上皮细胞、腺上皮细胞、肺泡壁细胞和’肾小管的上皮细胞内，可见上皮细胞为GPV抗原的主要靶细胞。本试验始终未能从大脑、胰腺和骨骼肌检测到GPV。
- 杨静红李广兴
- 关键词：鹅细小病毒
- 产气荚膜梭菌plc基因的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：8
- 2012年
- 采用PCR方法扩增编码产气荚膜梭菌α毒素去除信号肽的plc基因片段,利用原核表达载体pGEX-6P-1构建重组质粒pGEX-plc,经双酶切和测序鉴定正确后转化E.coli BL21(DE3),进行IPTG诱导表达,表达产物经切胶纯化后作为免疫原制备多克隆抗体,应用间接ELISA和Western-blot方法对所得抗体进行检测。结果显示,经1.0mmol/L IPTG诱导4～5h后重组蛋白表达量最高,并且主要以包涵体的形式存在,分子质量为66ku。用间接ELISA方法检测的多抗血清效价达到1∶65 536。Western-blot结果证实,重组蛋白与制备的多克隆抗体发生特异性结合,具有良好的反应原性,而且多抗血清能够检测产气荚膜梭菌分泌的天然α毒素蛋白。上述结果表明,此多克隆抗体能够应用于临床诊断。
- 郑晓星解真真任晓峰王衡王勇杨静红任玉东马德星李广兴
- 关键词：产气荚膜梭菌多克隆抗体蛋白质印迹
- 鸡堆型艾美耳球虫3-1E基因真核表达质粒的构建及其体外表达
- 2010年
- 为了构建鸡堆型艾美耳球虫(E.acervulina)3-1E基因真核表达质粒,试验应用RT-PCR技术从E.acervulina子孢子中扩增出3-1E基因片段,将其连接到克隆载体pMD18-T中得到重组克隆质粒pMD18-3-1E,阳性克隆质粒经鉴定正确后将3-1E基因片段亚克隆入真核表达载体pcD-NA3.1(+)中,得到重组阳性表达质粒pcDNA3.1(+)-3-1E。结果表明:阳性表达质粒经鉴定正确后应用磷酸钙法体外转染293T细胞,通过间接免疫荧光法和免疫组织化学技术检测到了3-1E蛋白在293T细胞中的表达,说明E.acervulina3-1E基因真核表达质粒构建成功。
- 马德星潘龙杨静红李广兴
- 关键词：转染体外表达
- 新型鸡白细胞介素15真核表达质粒构建及其体外表达
- 2011年
- 应用重叠扩增PCR(SOEPCR)技术将鸡白细胞介素15(ChIL-15)的冗长信号肽序列替换为较短的鸡白细胞介素2(ChIL-2)信号肽序列,构建了一种新型ChIL-15融合基因(NChIL-15)。将其连接到克隆载体pMD18-T中得到重组克隆质粒pMD18T-NChIL-15。阳性克隆质粒经鉴定正确后将NChIL-15基因亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,得到重组阳性表达质粒pcDNA3.1(+)-NChIL-15。阳性表达质粒经鉴定正确后应用磷酸钙法体外转染293T细胞,通过间接免疫荧光试验(IFA)检测到了NChIL-15蛋白在293T细胞中的表达。本研究为NChIL-15佐剂作用的深入研究奠定了基础。
- 马德星李广兴马春丽杨静红
- 关键词：转染间接免疫荧光试验
- 鹅细小病毒在雏鹅体内分布的免疫组织化学检测被引量：1
- 2012年
- 采用间接免疫酶组织化学染色法对14日龄雏鹅人工感染鹅细小病毒后不同时间段病毒抗原在体内的定位及分布情况进行了检测,同时应用图像分析软件对免疫组织化学图像中的抗原强度进行了定量分析。结果显示,感染后第1天到第21天,在心、肺、脾、肝、法氏囊、胸腺、腺胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、食管12种组织器官中检测到了病毒抗原。其中感染后第5天的感染组织最广泛,抗原染色强度最高,在检测的组织中以空肠的检出率最高。病毒抗原广泛分布于肠道的上皮细胞、腺上皮细胞,肺泡壁细胞和肾小管的上皮细胞内。始终未能从大脑、胰腺和骨骼肌中检测到鹅细小病毒。可见该病毒感染雏鹅后存在于患病鹅的大部分组织器官内,进一步证实该病毒是一种泛嗜性病毒。
- 杨静红马德星李广兴
- 关键词：鹅细小病毒
- 鹅几种常见疾病介绍
- 2007年
- 杨静红李广兴
- 关键词：小鹅瘟常见疾病间接ELISA琼脂扩散试验
- Ea3-1E与mChIL-15融合基因的构建及其真核表达质粒的免疫效果被引量：2
- 2010年
- 应用重叠扩增PCR技术将鸡堆形艾美球虫子孢子表面抗原3-1E基因片段(Ea3-1E)与编码鸡白细胞介素15成熟蛋白基因片段(mChIL-15)进行串联连接,并在这2个基因片段之间引入4个柔性连接肽SPGS,获得融合基因Ea3-1E-linker-mChIL-15。以pcDNA3.1(+)为载体构建并鉴定真核表达质粒pcD-NA3.1-Ea3-1E-linker-mChIL-15。应用磷酸钙法将质粒体外转染293T细胞,通过间接免疫荧光技术和免疫组织化学技术对重组质粒的体外瞬时表达进行检测。将重组质粒pcDNA3.1-Ea3-1E-linker-mChIL-15、pcDNA3.1-Ea3-1E和pcDNA3.1分别于14和21日龄经腿部肌肉注射免疫SPF雏鸡,28日龄时,除非免疫非感染组外,各组感染5×104个堆形艾美球虫孢子化卵囊,观察真核表达质粒的免疫保护效果。结果显示,成功构建了融合基因3-1E-linker-mChIL-15,转染后第30小时可检测到融合基因编码蛋白在293T细胞中的瞬时表达。与质粒pcDNA3.1-Ea3-1E相比,质粒pcDNA3.1-Ea3-1E-linker-mChIL-15二次免疫后可提供明显的抗球虫免疫保护效果,提高相对增重率(96.48%),降低卵囊排出率(68.35%),降低十二指肠病变记分等。抗球虫指数为183.78。
- 马德星潘龙杨静红唐丽李广兴
- 关键词：融合基因真核表达质粒免疫效果
