李红卫
- 作品数：25 被引量：60H指数：4
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点实验室开放基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 高效包装重组慢病毒及其定量方法的建立被引量：1
- 2015年
- 目的高效包装不同启动子的重组慢病毒(LV),建立LV的定量方法。方法采用分子克隆方法获得p FUGW、p TY-EF1α-EGFP及p TY-CMV-EGFP 3种转移质粒,然后采用脂质体法与另两种包装质粒p SPAX2及p MD2.G共同转染293T细胞,制备含有不同启动子的LV。设计针对3’-LTR的探针和引物,建立LV的荧光定量PCR定量方法。结果获得了不同启动子的转移质粒,制备了3种不同启动子的LV,应用荧光定量PCR方法测定制备的病毒,载量能达到109copies/ml。结论成功构建了不同启动子的转移质粒,获得了三种LV,建立了针对LV的荧光定量PCR方法,为后续研究不同启动子在多种细胞系中驱动目的蛋白的表达奠定了基础。
- 张玲翁云层张云帅丽芳李婷婷王文敬李红卫赵卫黎诚耀
- 关键词：重组慢病毒绿色荧光蛋白荧光定量PCR
- 西尼罗病毒病研究进展
- 西尼罗病毒病(West Nile virus disease)是由西尼罗病毒感染引起的一种人畜共患的急性传染病。该病毒最早于1937年从乌干达西尼罗地区一名发热妇女的血液中分离,因此得名。鸟类是WNV的贮存宿主,研究发现...
- 刘军仇珍珍李红卫顾为望
- 关键词：西尼罗病毒疫苗
- 一种抑制肿瘤细胞增殖的重组腺病毒载体的构建方法
- 本发明涉及一种抑制肿瘤细胞增殖的重组腺病毒载体的构建方法，该方法由以下步骤组成：(1)取如SEQ ID NO.1所示的N端带有6个his标签的人端粒酶C端第936-1132片段的编码序列，经双酶切、连接反应克隆至含有绿色...
- 庞建新邬贤丘玉昌曹莹谢宝平周平正王杞妹陈嘉盛李红卫
- 文献传递
- 腺病毒滴度不同测定方法比较被引量：20
- 2011年
- 目的将目前测定腺病毒滴度常用的OD260法、荧光定量PCR法、绿色荧光蛋白标记法、壳蛋白免疫法、细胞病变(CPE)法进行比较研究,分析和讨论各种方法的优缺点。方法 4种重组腺病毒(Ad-G-AT2R-EGFP、Ad–CMV-EGFP、Ad-mif-shRNA-EGFP和Ad-CBA-GFP)扩增、纯化后,同时分别用OD260值法、荧光定量PCR法、绿色荧光蛋白标记法、壳蛋白免疫法及CPE法测定病毒滴度,并以壳蛋白免疫法测定结果作为标准,对各种方法所得结果进行比较研究。结果绿色荧光蛋白标记法、CPE法与壳蛋白免疫法同时测定4种腺病毒滴度,其结果无统计学差异(P>0.1)。荧光定量PCR法测定值明显高于壳蛋白免疫法(P<0.05),但与该法测定结果间存在良好的相关性(r=0.965),约为壳蛋白免疫法所测得结果的10倍。OD260法测得结果与壳蛋白免疫法测得结果间则无相关性。结论绿色荧光蛋白标记法与壳蛋白免疫法是测定腺病毒感染性滴度最为快速有效的方法,其结果客观可靠,能真实地反映病毒的实际感染力。荧光定量PCR法测定结果反映的是完整的病毒颗粒数,能够间接反映病毒的感染力,且该方法操作简单,耗时短,同样有较高的实用性。
- 孙鹏宇张艳玲荆玉明张信基张哲欢黎诚耀陈白虹谭万龙李红卫
- 关键词：腺病毒绿色荧光蛋白荧光定量PCR
- 一种重组HEK‑293T细胞及其分泌寨卡病毒非结构蛋白1
- 本发明涉及一种重组HEK‑293T细胞，其特征在于，该重组HEK‑293T细胞是以HEK‑293T细胞为宿主转染外源基因获得，其中所述的外源基因的核酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。本发明所述重组HEK‑293T细胞可...
- 陈白虹张艳玲刘军李红卫顾为望李静静李青青仇珍珍颜仁和王升尧
- 文献传递
- 重组丙型肝炎病毒核心蛋白多克隆抗体的制备及纯化
- 目的 制备兔抗HCV核心蛋白多克隆抗体,为建立HCV核心蛋白BCA检测方法奠定基础.方法 用原核表达的HCV核心蛋白免疫日本大耳白兔,间接ELISA测定抗体效价达到1∶216后,颈动脉放血并分离血清,经硫酸铵沉淀及亲和层...
- 刘军仇珍珍李红卫顾为望
- 关键词：丙型肝炎核心抗原多克隆抗体
- 猪流行性腹泻病毒重组S1蛋白的免疫原性评价被引量：5
- 2021年
- 将猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行毒株S1基因经密码子优化后克隆到慢病毒表达载体,在293T细胞包装PEDV S1重组慢病毒;重组慢病毒感染293T细胞,经有限稀释法筛选获得高效稳定表达S1蛋白的重组细胞系HEK-293T-S1;生产、纯化S1蛋白,添加佐剂制备成重组S1亚单位疫苗,经肌肉注射免疫实验用巴马小型猪,评价重组S1蛋白的免疫原性。结果表明,疫苗经肌肉注射免疫能诱导唾液、粪便及血清产生S1特异性Ig A;证实巴马小型猪3日龄仔猪对PEDV流行毒株易感,在临床症状及组织病理学变化均符合高毒力PEDV特征,可以作为感染动物模型;在实验用巴马小型猪证实PEDV重组S1蛋白结合佐剂经肌肉注射可诱导粘膜免疫,这为PEDV基因工程疫苗研发奠定了基础。
- 武旺盛颜仁和仇珍珍梁文翰刘军高永宏许明宇胡桂学钱爱东李红卫
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S1蛋白IGA巴马小型猪
- 一种寨卡病毒的重组基因及其制备方法和应用
- 本发明涉及一种寨卡病毒的重组基因，该重组基因的DNA序列如SEQ ID NO 1所示。将所述的重组基因插入到商用载体pMD19‑T中得到表达载体，再将病毒穿梭载体VSV‑G克隆所述的表达载体中得到克隆载体，然后所得到的克...
- 李红卫刘军顾为望李青青仇珍珍利晓欣万鹏飞陈晃耀梁文翰
- 高效包装重组慢病毒载体及其介导不同内部启动子驱动的绿色荧光蛋白在多种细胞中的表达
- 2010年
- 张玲王安琪李红卫黎诚耀
- 关键词：慢病毒载体病毒载体介导高滴度拷贝数
- 3种腺相关病毒介导的绿色荧光蛋白对西藏小型猪胚胎成纤维细胞的转染效率被引量：1
- 2012年
- 目的比较3种不同血清型腺相关病毒(AAV)介导的绿色荧光蛋白对西藏小型猪胚胎成纤维细胞的转染效率。方法原代分离培养西藏小型猪胚胎成纤维细胞并进行形态学鉴定,按照感染复数(MOI)为103、104、105转染传代两次的猪胚胎成纤维细胞,流式细胞学检测不同血清型AAV对西藏小型猪胚胎成纤维细胞的转染效率,并在倒置显微镜下观察转染后绿色荧光的表达强度;同时,应用MTT方法检测不同血清型AAV对西藏小型猪胚胎成纤维细胞的毒性。结果腺相关病毒AAV2-EGFP对PFF的转染效率随MOI值的增加而增高,MOI为103、104、105时,转染效率分别为(33.68±1.18)%、(50.80±2.59)%和(60.08±1.08)%,而其他两种血清型病毒感染效率均低于AAV2-EGFP。3种病毒转染PFF过程中,细胞生长正常,MTT显示各个转染组与对照组(未转染组)在D570处吸光度无显著差异。结论AAV2血清型载体对体外培养的猪胚胎成纤维细胞的感染效率显著高于其他几种血清型,AAV8和AAV9对PFF感染能力极差,筛选AAV2作为西藏小型猪基因打靶的最适病毒载体;同时,3类血清型病毒载体对猪胚胎成纤维细胞均无明显细胞毒性。
- 黄威毛莹莹刘薇唐华揭飞龙李红卫顾为望
- 关键词：腺相关病毒西藏小型猪胚胎成纤维细胞绿色荧光蛋白流式细胞技术
