李欣
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
- 供职机构：山东大学医学院医学免疫学研究所更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组人分泌型endostatin的纯化及其抑癌活性探讨被引量：6
- 2003年
- 目的:纯化毕赤酵母菌GS115株表达的分泌型人endostatin蛋白,并对其抑癌活性进行研究。方法:利用SepharoseG-25及Heparin亲和层析柱纯化重组蛋白,并以MTT法测定重组endostatin对人脐静脉血管内皮细胞(ECV～304)增殖的抑制活性;另以HepG2.2.15细胞注射裸鼠成瘤后,体内验证重组蛋白的抑瘤活性。结果:MTT结果显示纯化后的endostatin在体外可特异性抑制人脐静脉内皮细胞的增殖,最高抑制率为86.0%;动物实验证明其可明显抑制荷瘤动物肿瘤的生长。结论:经纯化后的重组endostatin具有较强抑癌活性,将为临床抗血管生成治疗实体瘤研究奠定基础。
- 王晓燕孙汶生马春红张利宁李欣曹英林刘素侠宋静韩丽辉
- 关键词：内皮抑素毕赤酵母菌抑癌活性人脐静脉血管内皮细胞
- 重组人分泌型endostatin的纯化及其抑癌活性研究
- 目的肿瘤新生血管的形成是肿瘤快速生长的物质基础,利用干预新生血管形成的方法治疗肿瘤已成为人们关注的焦点。endostatin是由O’Reilly等在治疗实体瘤研究中首次发现的,它具有很强的抑制新生血管内皮细胞增殖的作用。...
- 王晓燕孙汶生马春红张利宁李欣曹英林刘素侠宋静韩丽辉
- 关键词：抑癌活性分泌型ENDOSTATIN
- 文献传递
- 人Endostatin在毕赤酵母菌中的表达及其抑癌活性研究被引量：5
- 2001年
- 目的 :在毕赤酵母中获得有活性的分泌型重组Endostatin。方法 :一步法抽提胎肝总RNA ,RT PCR扩增endostatin全基因。用T A克隆技术构建克隆载体 ;双酶切回收 5 5 0bp的endostatin基因 ,亚克隆入酵母表达载体。重组质粒分别以PCR、酶切及测序鉴定。电转化法将线形化的重组表达DNA转导入GS115感受态细胞 ,SDS PAGE电泳筛选阳性重组子 ,G2 5及Heprin亲和层析柱初步纯化重组蛋白。MTT法测定重组endosatatin对血管内皮细胞增殖的抑制作用。结果 :RT PCR获得 5 5 0bp的特异扩增条带 ,T A克隆后 ,PCR挑选阳性重组子 ,测序证实序列正确 ;亚克隆后的表达载体 ,PCR可得 5 5 0bp的特异条带 ,EcoRI、NotI双酶切获得 5 5 0bp和 3kb的条带 ,与预期一致 ,DNA测序证明核苷酸序列 10 0 %正确。SDS PAGE证实重组菌较空白有一明显条带 ,Heparin亲和层析后 ,1mol/LNaCl洗脱的蛋白峰在体外可特异性抑制血管内皮细胞的增殖。结论 :在毕赤酵母菌中成功地获得了分泌表达的活性endostatin蛋白。
- 马春红孙汶生李欣张利宁王晓燕宋静
- 关键词：内皮缩血管肽类抑癌活性
- 重组人分泌型血管内皮抑素对鼠移植性肝癌抑制作用的实验研究被引量：1
- 2002年
- 目的 :在毕赤酵母菌 (GS115 )中表达有活性的重组人分泌型血管内皮抑素蛋白 ,探讨其对鼠移植性肝癌的抑制作用。方法 :成功构建的分泌型酵母表达载体 ,经电转化法转入酵母菌中 ,SDS PAGE电泳筛选阳性重组子 ,经Heparin亲和层析柱进行初步纯化。MTT法测定重组人血管内皮抑素对脐静脉血管内皮细胞 (ECV 30 4 )增殖的抑制作用 ;HepG2 .2 .15细胞注射裸鼠成瘤后 ,体内验证重组蛋白的抑瘤活性。结果 :构建的酵母表达载体经PCR、测序鉴定完全正确。SDS PAGE电泳证实重组菌较空白菌多一明显条带 ,Heparin亲和层析后 ,1MNaCl洗脱的蛋白峰在体外可特异性抑制血管内皮细胞的增殖 ,体内可明显抑制鼠移植性肝癌的生长 ,并诱导肿瘤细胞凋亡。结论 :在毕赤酵母菌中成功表达了有活性的重组血管内皮抑素蛋白 ,对肿瘤治疗具有很好的开发前景。
- 王晓燕孙汶生马春红张利宁李欣刘素侠曹英林
- 关键词：移植性肝癌基因表达
