张志方
- 作品数：12 被引量：15H指数：2
- 供职机构：中山大学中山医学院更多>>
- 发文基金：广东省卫生厅资助课题更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗人CD154单克隆抗体抑制免疫应答的实验研究被引量：5
- 2002年
- 目的 :探讨抗人CD1 54单克隆抗体对免疫应答的抑制作用。方法 :①在体外进行混合淋巴细胞反应 ,研究抗人CD1 54单克隆抗体对淋巴细胞增殖反应的影响 ;②在严重免疫联合缺陷 (SCID)鼠体内重建人的免疫功能后 ,研究抗人CD1 54单克隆抗体在SCID小鼠体内对T细胞增殖的影响和对B细胞功能的影响。结果 :①双向混合淋巴细胞反应结果显示 ,抗体的 5个剂量组的 [3H] -TdR的掺入率均显著低于对照组 (均P <0 .0 1 ) ;②在输注人外周血单个核细胞第 6d、第 1 2d、第 2 1d ,实验组SCID鼠体内人T细胞占SCID鼠淋巴细胞的百分率均明显低于对照组(均P <0 .0 5) ;在输注人外周血单个核细胞后的第 1 2d、第 2 1d、第 31d ,实验组SCID鼠体内人IgG的含量明显低于对照组 (均P <0 .0 5)。结论 :抗人CD1 54单克隆抗体能够在体外抑制淋巴细胞的增殖 。
- 张春艳张志方李树浓宁波陈凤英黄文革
- 关键词：CD40配体单克隆抗体免疫应答
- SLE患者外周血淋巴细胞表达BLyS和CD86的变化被引量：2
- 2002年
- 采用FACS研究了 2 2例SLE患者外周血淋巴细胞表达BLyS和CD86的变化。结果表明 ,SLE患者外周血BLyS+ 淋巴细胞和CD19+ CD86 + 淋巴细胞显著增加 ,但二者之间无显著相关。
- 张志方张春艳杨岫岩周毅梁柳琴潘敬运
- 关键词：SLE患者外周血淋巴细胞BLYSCD86发病机理
- 生理学实验教学改革中存在的若干问题
- ＜正＞ 生理学实验教学改革是大势所趋。自1994年开始,我校与很多高等医药院校一样,将生理学、药理学和病理生理学的实验教学从原学科课程中分离出来,合并成一门新的实验课程——实验生理科学。生理学实验教学的改革虽然取得了一定...
- 刘甘泉张志方李晓君
- 文献传递
- 基因免疫制备抗人BLyS单克隆抗体及单抗特性分析被引量：6
- 2002年
- 目的 :基因免疫制备抗人BLyS单克隆抗体并分析其免疫学特性。方法 :将人BLyS基因克隆到真核表达载体pcDNA3,构建重组质粒pcDNA3/hBLyS ,用其免疫BALB/c鼠 ,取鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合 ,用ELISA法筛选阳性克隆 ,用免疫印迹和流式细胞技术进一步鉴定抗体的特异性 ,用双向免疫扩散鉴定单克隆抗体的类别。结果 :重组质粒双酶切结果和DNA序列测定结果表明 ,pcDNA3/hBLyS重组质粒含有目的基因 ;ELISA、免疫印迹、流式细胞仪和双向免疫扩散等实验结果表明 ,9c10杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体可以特异性结合IFN -γ激活的人T淋巴细胞膜表面BLyS蛋白的膜外区 ,属于IgG1亚类。结论 :获得了能够特异性结合人T淋巴细胞上BLyS蛋白膜外区的单克隆抗体 。
- 张志方张春艳潘敬运林学颜
- 关键词：质粒单克隆抗体自身免疫性疾病
- 人BLyS基因克隆、表达和抗人BLyS单克隆抗体的制备
- 2002年
- 【目的】研制抗人BLyS单克隆抗体 ,以进一步探讨人BLyS与自身免疫性疾病的关系。【方法】将人BLyS基因克隆到融合蛋白原核表达载体 pGEX 4T 1中 ,构建重组质粒 pGEX 4T 1/hBLyS ,用此重组质粒转化大肠杆菌BL2 1,加IPTG诱导大肠杆菌表达GST hBLyS融合蛋白 ,用此融合蛋白免疫BALB/c鼠 ,取鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合 ,用ELISA法筛选阳性克隆 ,用免疫印迹和流式细胞仪进一步鉴定抗体的特异性。【结果】重组质粒双酶切结果和DNA序列测定以及表达蛋白SDS PAGE电泳结果表明 ,pGEX 4T 1/hBLyS重组质粒可以正确表达GST hBLyS融合蛋白 ;ELISA、免疫印迹和流式细胞仪检测结果表明 ,1c6杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体可以特异性结合人T淋巴细胞膜表面BLyS的膜外区 ,属于IgG2b亚类。【结论】所获得的单克隆抗体具有能够结合人T淋巴细胞上的BLyS特异性 。
- 张志方张春艳潘敬运林学颜
- 关键词：BLYS抗体单克隆T淋巴细胞
- GST-hBLyS融合蛋白基因的构建及其在大肠杆菌中的表达
- 2002年
- 根据hBLyS (humanBlymphocytestimulator)基因序列设计合成特异性引物 ,用RT_PCR从人外周血淋巴细胞扩增出 85 8bp的hBLyS基因 ,并将其插入到融合蛋白原核表达载体 pGEX_4T_1中 ,得到重组表达质粒pGEX_4T_1/hBLyS。把此重组质粒转化大肠杆菌BL2 1,经用IPTG诱导 ,表达出了GST_hBLyS融合蛋白。
- 张志方张春艳付涌水林学颜潘敬运
- 关键词：大肠杆菌自身免疫性疾病重组质粒
- 抗人CD154单抗轻重链可变区基因克隆与序列分析
- 2002年
- 目的 :克隆抗人CD1 54抗体轻重链可变区基因 ,并分析其核苷酸序列 ,为基因工程抗体的构建奠定基础。方法 :从分泌能抑制免疫反应的抗人CD1 54单克隆抗体杂交瘤细胞株 7E8中提取总RNA ,合成cDNA第一链后 ,经PCR扩增获得抗人CD1 54单抗轻链可变区 (VL)和重链可变区 (VH)基因 ,分别克隆入pUC1 8载体 ,并进行序列分析。结果 :①抗体的轻链可变区基因全长为 341bp ,编码 1 1 3个氨基酸 ,归属于Ig的Vκ2基因 ,氨基酸序列分析结果显示轻链可变区含有明确的 4个骨架区和 3个抗原决定簇互补区 ,在第 2 3位和第 93位氨基酸为半胱氨酸 ,是与抗体二硫键形成有关的两个特征性氨基酸 ;②抗体的重链可变区基因全长为 354bp ,编码 1 1 8个氨基酸 ,归属于小鼠IgVH基因 ,D、J区基因分别属于DSP2 .9和JH2 ,氨基酸序列分析结果显示 ,重链可变区含有明确的 4个骨架区和 3个抗原决定簇互补区 ,在第 2 3和第 97位氨基酸为半胱氨酸 ,是与抗体二硫键形成有关的两个特征性氨基酸。结论 :经核苷酸序列分析证明所克隆的基因分别为抗体的轻。
- 张春艳张志方李树浓宁波陈琼玲
- 关键词：CD40配体可变区基因T淋巴细胞
- DNA免疫制备抗人CD154单克隆抗体及其轻链可变区基因序列分析
- 2002年
- 采用pcDNA3 1 hCD15 4重组质粒DNA免疫BALB c小鼠 ,制备抗人CD15 4单克隆抗体 ,得到了能分泌针对人T细胞表面CD15 4分子的特异性单抗的杂交瘤细胞株 (7E8)。通过RT_PCR扩增 7E8单抗轻链可变区基因 ,并对其进行克隆、测序、DNA序列分析和氨基酸推导 ,结果显示轻链可变区基因和氨基酸序列完全符合小鼠Ig轻链的结构特征 ,为制备基因工程抗体并应用于临床打下了基础。
- 张志方张春艳
- 关键词：DNA免疫基因克隆跨膜糖蛋白轻链可变区基因
- 系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞表达BLyS和CD38的变化被引量：2
- 2002年
- 目的 :研究系统性红斑狼疮 (SLE)患者外周血淋巴细胞表达BLyS和CD38的变化。方法 :收集 2 2名SLE患者和 14名健康人外周血淋巴细胞 ,用流式细胞仪检测外周血淋巴细胞表达BLyS和CD38的变化。结果 :SLE患者外周血BLyS+ 淋巴细胞、CD19+ 淋巴细胞和CD19+ CD38+ 淋巴细胞显著增加 ,BLyS+ 淋巴细胞增加与CD19+CD38+ 淋巴细胞增加呈正相关 (r=0 .4 34,P <0 .0 5 )。结论 :SLE患者外周血淋巴细胞表达BLyS和CD19+ B淋巴细胞表达CD38均显著增加 ,且二者增加呈正相关。
- 张志方张春艳周毅梁柳琴杨岫岩张彤付涌水潘敬运
- 关键词：系统性红斑狼疮B淋巴细胞
- hBLyS单抗的研制及BlyS与人SLE发病的关系
- 该研究将进行如下实验：通过hBLyS基因克隆、原核和真核表达载体的构建、用重组融合蛋白免疫和DNA免疫两种方法制备抗hBLyS单克隆抗体;选择与人淋巴细胞结合率最高的一种单克隆抗体建立针对hBLyS的检测新方法,并研究B...
- 张志方
- 关键词：基因克隆DNA免疫系统性红斑狼疮
- 文献传递
