张国英
- 作品数：37 被引量：88H指数：6
- 供职机构：长治医学院附属和平医院更多>>
- 发文基金：山西省自然科学基金山西省青年科技研究基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 以HepG2.2.15细胞为对象的RNAi实验研究被引量：1
- 2006年
- 目的观察针对乙型肝炎病毒(HBV)X区设计的siRNA表达载体pGenesil-HBVX对HepG2.2.15细胞相应蛋白表达的影响。方法筛选出最佳转染效率的剂量配比,将阳离子脂质体METAFECTENE与pGen-esil-HBVX的复合物转染HepG2.2.15细胞,于转染后24、48、72h采用时间分辨荧光免疫测定技术(TRFIA)检测上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)。结果具有最佳转染效率而且不显著影响细胞活性的剂量配比为8μl∶2.5μg。pGenesil-HBVX转染HepG2.2.15细胞后24h,细胞上清液中HBsAg、HBeAg含量尚无显著变化(P>0.05);48h后HBsAg、HBeAg表达均有明显下降(P<0.01),并且持续至72h。结论pGenesil-HBVX可以在获得一定转染效率的基础上有效抑制HepG2.2.15细胞中HBV的表达。
- 刘明社杨慧赵中夫赵龙凤张国英张芸韩德五
- 关键词：HEPG2.2.15细胞乙型肝炎病毒RNA干扰质粒载体
- RNA干扰抑制HepG2细胞AFP基因表达实验方法建立被引量：3
- 2006年
- 目的:筛选较理想的阳离子脂质体META/pGenesil-AFP质粒转染HepG2的方法。方法:将针对两条靶序列AFP1和AFP2的shRNA的DNA模板双链,连接于质粒表达载体,构建质粒载体pGenesil-1-AFP1(含绿色荧光蛋白GEP编码序列)及pGenesil-2-AFP2,用阳离子脂质体META/质粒载体pGenesil-1-AFP1转染HepG2细胞。荧光显微镜观察并计算不同剂量配比的脂质体/质粒载体混合液转染效果及微粒子化学发光免疫分析法检测不同剂量配比转染后对AFP基因表达的影响。结果:剂量比为8μL∶2.5μg条件,能有效地转染HepG2细胞,并有效抑制AFP表达且无细胞毒性作用。结论:本研究成功建立了阳离子脂质体META/质粒载体pGenesil-1-AFP1转染HepG2细胞实验方法。
- 张国英杨慧刘明社张芸赵中夫
- 关键词：HEPG2细胞RNA干扰AFP
- 脂多糖诱导原代培养肝实质细胞与库普弗细胞表达和释放高迁移率族蛋白B1被引量：6
- 2007年
- 目的观察LPS诱导HMGB1在肝实质细胞（HC）与库普弗细胞（KC）的表达和细胞外释放。方法培养瓶中分别培养原代HE和KC,24h后收获对照组和500μg/L LPS诱导组两种细胞,反复冻融,用半定量RT-PCR和Western blot法检测HMGB1 mRNA水平和HMGB1表达水平;接种原代HC和KC于24孔板中,继续培养6、12、24h和48h,Western blot法检测各时间点对照组和LPS诱导组培养液中HMGB1含量。结果LPS诱导24h后,与相应对照组比较,HC和KC中HMGB1 mRNA表达水平明显增强（t值分别为31.32和45.90,P值均〈0.05）,HMGB1表达水平也明显增强（t值分别为46.19和38.44,P值均〈0.05）;在6、12、24h和48h,对照组两种细胞及诱导组HC培养上清液中仅检测到少量HMGB1,延长培养时间,培养上清液中HMGB1含量无明显变化（F=1.61,P〉0.05）;与对照组比较,诱导组KC培养液中的HMGB1含量在6h无显著增加（t=1.48,P〉0.05）,但随培养时间延长,其含量明显增高（F=42.74,P〈0.05）,且在12、24h和48h均明显高于对照组（t值分别为21.95,32.39和44.16,P值均〈0.05）。结论LPS可诱导HC和KC中HMGB1表达增强,HC不主动释放HMGB1,而KC能主动释放HMGB1到细胞外。
- 赵中夫韩德五刘明社张国英张芸杨慧杨柳絮
- 关键词：库普弗细胞脂多糖类高迁移率族蛋白B1
- 大学生乙型肝炎病毒血清标志物的检测结果分析被引量：4
- 2006年
- 目的:新入学大学生中乙型肝炎病毒(HBV)的感染状况,评价乙型肝炎疫苗在人群应用的效果。方法:采用ELISA方法检测所取2014份新生血清的HBV血清标志物。结果:血清中,HBsAg(+),HBeAg(+),抗-HBc(+)标本213份,阳性检出率为10.58%;HBsAg(+),抗-HBe(+),抗-HBc(+)标本132份,阳性检出率6.55%;抗-HBs(+)标本1015份,阳性检出率50.40%。血清中各种标志物全阴性477份,占23.68%。结论:新入学大学生的HBV感染率和易感者比率不低于普通人群。对大学生乙肝的防治工作应当加强。
- 刘淑英张国英张芸
- 关键词：乙型肝炎病毒血清标志物
- AFP检测的临床意义及生物学作用研究新进展被引量：6
- 2005年
- 张国英梁建芳赵中夫
- 关键词：AFP检测生物学
- pGenesil-siHBV X对HepG2.2.15细胞HBV表达和复制的抑制效果研究
- 2007年
- 目的研究针对HBVX基因区设计的小干扰RNA(siRNA)表达载体质粒pGenesil-siHBVX对HepG2.2.15细胞HBV表达和复制的抑制效果及特异性。方法针对HBVX区设计siRNA表达载体质粒pGenesil-siHBVX。分别用培养液(空白对照)、脂质体Metafectene、pGenesil空载体、pGenesil-siHK(阴性对照)、pGenesil-siAFP(特异性对照)、pGenesil-siHBVX处理或转染HepG2.2.15细胞各3次。于每次转染后24h,取各组细胞培养上清液,用时间分辨荧光免疫测定技术检测上清液中HBsAg和HBeAg含量,用化学发光法检测AFP含量,用PCR荧光定量技术检测HBV-DNA复制水平。结果pGenesil-siHBVX转染能抑制HepG2.2.15细胞对HBV标志物的表达,且抑制作用随转染次数增加而增强。第3次转染后,pGenesil-siHBVX组细胞上清液中HBsAg、HBeAg和HBV-DNA检测结果分别为(6.26±1.07)ng/ml、(0.13±0.05)Ncu/ml和(3.01±0.40)×107拷贝/ml,与空白对照组的(22.50±1.39)ng/ml、(1.12±0.11)Ncu/ml和(12.33±1.28)×107拷贝/ml比较,差异有统计学意义(t值分别为12.80、12.21、9.71,P<0.05);pGenesil-siHBVX转染不影响细胞对AFP的表达(t=0.18,P=0.86)。结论pGenesil-siHBVX可以有效和特异地抑制HepG2.2.15细胞HBV-DNA的复制及HBsAg和HBeAg表达。
- 杨慧赵中夫张国英张芸刘明社杨柳絮
- 关键词：RNA干扰质粒
- RNA干扰技术在肝病防治中的实验研究
- 赵中夫张国英刘明社杨慧张芸武延隽南海茹建萍杨柳絮邓军辉张定琳郭建红
- RNA干扰（RNA interference，RNAi），是指用短双链RNA（dsRNA）进行转录后的基因沉默技术(post-transcriptional gene silencing PTGS)。从2001到2003...
- 关键词：
- 关键词：AFPHBVRNA干扰肝病
- 串联表达Fas shRNA腺病毒载体的构建被引量：3
- 2006年
- 目的利用串联表达质粒pEGFP6-1-siFas1+siFas2和BDAdeno-X系统构建腺病毒表达Fas-shRNA载体。方法双酶切pEGFP6-1-siFas1+siFas2串联表达质粒和pShuttle2质粒,T4DNA连接酶连接胶回收片段,转化感受态Escherichiacoli(E.coli)DH5α菌株,挑取单克隆菌落LB(Luria-Bertani)培养基中扩增培养;小量质粒试剂盒提取pShuttle2-siFas1+siFas2质粒,酶切鉴定;双酶切pShuttle2-siFas1+siFas2质粒,T4DNA连接酶连接酶切产物和腺病毒BDAdeno-XViralDNA。回收连接产物,SwaI酶切去除未重组的腺病毒质粒,再回收酶切产物,转化感受态E.coliDH5α;聚合酶链反应(PCR)筛选鉴定阳性克隆;提取pAdeno-siFas1+siFas2质粒,进一步酶切鉴定;重组腺病毒pAdeno-siFas1+siFas2质粒线性化,经脂质体转染HEK293A细胞;收细胞进行裂解收病毒。结果构建表达2个Fas-shRNA的串联重组腺病毒载体pAdeno-siFas1+siFas2,经酶切鉴定和PCR分析,重组腺病毒质粒构建正确;经HEK293A细胞包装成功。结论成功构建表达2个Fas-shRNA的串联重组腺病毒载体pAdeno-siFas1+siFas2,为进一步转染细胞和感染小鼠抑制Fas基因表达奠定了基础。
- 刘明社赵中夫王兰张国英张芸杨慧封江南
- 关键词：CD95HAIRPIN腺病毒科
- 医院健康教育网络机构的设立与管理
- 1999年
- 我院地处太行山之巅，是一所650张床位．集医、教、研、预防、康复为一体的“三级甲等医院“，从1995年开始有计划地实施健康教育工作．至今已发展成系统的健康教育网络，并收到良好的社会效益。
- 郭学义张国英张树明张尚山甄文选
- 关键词：医院健康教育康复床位网络
- 应用滴金免疫法检测血清甲肝病毒IgM抗体
- 2000年
- 甲型病毒性肝炎是由甲型肝炎病毒(HAV)引起的急性传染病。目前临床广泛使用的病原学检测方法多为酶联免疫法(ELISA)检测甲肝病毒IgM抗体(抗-HAV-IgM),该方法具有较高的灵敏度和特异度,但检测时间相对较长,一般不适合单人份检测,操作相对复杂。我们应用的滴金免疫法(Dot Immunogold Filtration Assay,DIGFA)快速检测血清抗-HAV-IgM具有简便、快速、准确等优点。现报告如下。
- 郭进军赵中夫张国英阎小君
- 关键词：滴金免疫法血清HAVIGM抗体
