张付凯
- 作品数：5 被引量：18H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院农产品加工研究所农业部农产品加工与质量控制重点开放实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学化学工程农业科学轻工技术与工程更多>>
- 抗对硫磷基因工程新型抗体的制备及鉴定被引量：2
- 2010年
- 【目的】提高抗对硫磷抗体的亲和力以提高酶联免疫检测的灵敏度。【方法】本研究通过抗对硫磷单链抗体基因和核心链霉亲和素基因片段的拼接重组,获得了抗对硫磷单链抗体-核心链霉亲和素融合基因(scfv-sa),并将该融合基因(scfv-sa)插入到表达载体pET28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行原核表达,制备融合蛋白。SDS-PAGE和Western blot鉴定scfv-sa的表达,Ni+-NTA亲和层析柱纯化融合蛋白,并用ELISA方法测定该融合抗体的亲和力。【结果】结果表明,在大肠杆菌BL21(DE3)中该融合基因能表达出分子量约为46kDa的融合蛋白,形成了四价结构域-四价聚合抗体。ELISA测定结果表明该抗体能与对硫磷特异结合,抗体效价在1:1×106以上,亲和常数为4.25×107L/mol。【结论】制备的抗对硫磷四价聚合抗体能与抗原特异结合,与单克隆抗体相比,抗原结合位点显著增加,ELISA检测灵敏度显著提高。
- 乔亚奇潘家荣王磊于海英陈明张维张付凯
- 关键词：对硫磷原核表达
- 抗对硫磷基因工程四价抗体在大肠杆菌中高效表达与鉴定被引量：5
- 2012年
- 为提高抗对硫磷基因工程四价抗体在大肠杆菌中可溶性表达量,本研究利用克隆技术得到四价抗体基因sc-sa,将该融合基因连接至表达载体pTO-T7的Ω序列和T7启动子下游,构建成功的表达质粒导入大肠杆菌OrigamiB(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot鉴定表达产物,Ni亲和层析纯化蛋白,间接非竞争ELISA法测定该四价抗体的亲和力。结果表明在大肠杆菌OrigamiB(DE3)中表达分子量约为46kDa的四价抗体,0.1mmol/L的IPTG在30℃条件下诱导原核表达,外源蛋白占菌体总蛋白含量近50%,纯化后可溶性蛋白纯度在90%以上,ELISA结果显示该抗体与对硫磷结合呈阳性,抗体效价在1∶1×106以上,亲和常数为6.84×108L/mol。与母源抗体和相应单链抗体相比,利用pTO-T7载体四价抗体在大肠杆菌OrigamiB(DE3)中可实现高效表达,且抗体效价和亲和力均得到进一步提高。
- 张付凯乔亚奇王磊兰丽平潘家荣
- 关键词：原核表达
- 抗对硫磷基因工程四价抗体在大肠杆菌中的高效表达
- 1、抗对硫磷四价抗体表达载体构建根据抗对硫磷四价抗体基因序列设计对应对引物,用经优化后的PCR反应条件扩增得到抗对硫磷四价抗体基因后经酶切、PCR扩增初步验证及基因测序确认为目的基因后,将其与达载体pTO-T7连接,转化...
- 张付凯
- 关键词：原核表达
- 抗对硫磷基因工程四价抗体在大肠菌中的高效表达
- 1、抗对硫磷四价抗体表达载体构建
根据抗对硫磷四价抗体基因序列设计对应对引物,用经优化后的PCR反应条件扩增得到抗对硫磷四价抗体基因后经酶切、PCR扩增初步验证及基因测序确认为目的基因后,将其与达载体pTO-T7连...
- 张付凯
- 关键词：原核表达
- 文献传递
- 生物素-亲和素放大酶联免疫吸附法测定二乙基磷酸酯类有机磷农药被引量：12
- 2011年
- 基于生物素和亲和素之间发生特异性反应,形成多酶系统,建立了二乙基磷酸酯类有机磷农药的竞争酶联免疫分析技术和生物素-亲和素放大酶联免疫分析技术。在优化条件下,二乙基磷酸酯类有机磷农药浓度在1×10-1～1×104mg/L范围内与抑制率线性关系良好,其线性回归方程为y=0.1168x+0.6259(r=0.9889),半抑制浓度和检出限分别为34 mg/L和0.0248 mg/L,与间接竞争酶联免疫分析方法相比,在交叉反应率基本不变的情况下,检测灵敏度和检测范围都得到显著提高,实际样品的加标回收率为70.1%～117.8%,基本满足痕量物质分析的要求。
- 王磊张丽杰吕伟韩世鹤张付凯潘家荣
- 关键词：农药
