姚海兰
- 作品数：44 被引量：64H指数：5
- 供职机构：首都儿科研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金北京市优秀人才培养资助更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 人疱疹病毒6型三重芯片式数字PCR方法的建立
- 2021年
- 目的建立同时检测疱疹病毒(human herpesvirus,HHV)-6A、B和核糖核酸酶P/MRP 30 kDa亚基(RPP30)的三重芯片式数字PCR(chip digital PCR,cdPCR)方法确定HHV-6A与HHV-6B感染的病毒载量,及高病毒载量的HHV-6是否由病毒整合到染色体导致。方法根据已建立的HHV-6A、HHV-6B实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)方法,建立HHV-6三重cdPCR方法。分别使用HHV-6A、HHV-6B病毒培养物进行敏感性检测,并与其他疱疹病毒进行特异性检测。随后,使用127份全血样本进行三重cdPCR方法验证。结果HHV-6 cdPCR与RT-qPCR方法检测结果的相关性良好(R2>0.97),且与其他疱疹病毒无交叉反应。对经RT-qPCR与cdPCR检测均为阳性的14份样本,经三重cdPCR方法检测,得到HHV-6A和HHV-6B的最低检测病毒载量分别为50拷贝/ml和105拷贝/ml。并且14份样本中HHV-6病毒载量与(RPP30拷贝数/2)的比值均小于1。结论建立的三重cdPCR具有较好的敏感性和特异性,且HHV-6三重cdPCR方法可以定量检测HHV-6A、HHV-6B的病毒载量以及RPP30的拷贝数。通过检测样本中HHV-6病毒载量与(RPP30拷贝数/2)的比值,可以确定高病毒载量的HHV-6是否存在染色体整合。
- 王文军宋娟王瑞芳万以秋魏泽姚海兰韩俊
- 关键词：人疱疹病毒6型
- 小鼠外周血心肌特异性microRNAs的变化与病毒性心肌炎相关关系初探被引量：3
- 2012年
- 目的:通过识别病毒性心肌炎小鼠和正常小鼠血浆中miR-1,miR-133,miR-206表达量的差异,分析外周血中心肌特异性microRNAs的变化与病毒性心肌炎相关关系,为探索miRNAs作为病毒性心肌炎诊断的生物标志物提供可行性的研究资料。方法:在小鼠病毒性心肌炎模型的基础上,采用荧光定量PCR方法,检测病毒性心肌炎急性期小鼠组和正常小鼠组血浆中相关miRNAs含量,并进行统计学分析。再于病毒注射后1d,3d,5d,7d,9d,11d,分别处死病毒小鼠,观察血浆miRNAs的动态变化规律。同时用Elisa检测心肌肌钙蛋白的变化,对目的 miRNAs与心肌肌钙蛋白进行相关性分析。结果:急性期时三种miRNAs血浆含量显著上调。病毒注射后3d开始上升明显,并持续保持在较高水平到7d,于9d时开始下降。发病期间,血浆miRNAs含量与心肌肌钙蛋白呈现良好的正相关性。结论:小鼠外周血中心肌特异性microRNAs在病毒性心肌炎发病过程中的呈现明显上调并与病程和相应指标存在相关关系,为miRNAs作为病毒性心肌炎诊断的生物标志物提供了重要线索。
- 黄丽颖肖宗慧姚海兰何峰张庆华刘哲伟
- 关键词：病毒性心肌炎血浆MIRNAS实时定量PCR
- 短双链RNA对CVB3病毒细胞内清除作用的可行性研究及其机制探讨
- 2008年
- 目的通过观察短双链RNA（Short interfering RNA，siRNA）体外转染HeLa细胞评价siRNA抗CVB3病毒感染的可行性和抑制作用机制。方法通过细胞病变作用保护实验，选择合适的siRNA剂量。Western Blot、RT．PCR等方法在体外检测siRNA抗CVB3病毒复制作用及作用途径。结果siRNA．3753通过脂质体转染试剂能高效转入HeLa细胞，转染效率可达98．77％，在细胞内可稳定长达48h。siRNA-3753的浓度为0．6gmol／L对病毒抑制率高同时对细胞不会产生毒性作用，该浓度作为本次研究的实验剂量。siRNA-3753抗CVB3病毒感染作用是通过siRNA直接降解病毒基因得到的，而不是通过激活PKR或干扰素等其他未知因素起效的。结论siRNA可以高效、较长时间的转染入HeLa细胞内，在低剂量时即产生较好的抗病毒感染作用，通过直接降解病毒基因组的途径特异性抑制CVB3病毒的复制及感染。
- 肖宗慧韩继生姚海兰刘哲伟
- 关键词：RNA柯萨奇病毒感染细胞
- 微管相关蛋白tau与朊蛋白的相互作用被引量：6
- 2006年
- 微管相关蛋白tau参与了许多神经退行性疾病的发生, 其中包括一些人类可传播性海绵状脑病. 为了探讨tau与朊蛋白（PrP）之间可能存在的关系, 首先通过GST pull-down和免疫共沉淀等技术发现重组tau蛋白可通过微管结合区与来源于正常叙利亚仓鼠脑组织中的正常细胞膜朊蛋白（PrP^C）和羊瘙痒因子263K感染仓鼠脑组织的异常朊蛋白（PrP^Sc）相结合. 利用免疫共沉淀实验发现在正常和羊瘙痒因子感染的仓鼠脑组织中存在tau蛋白与PrP^C和PrP^Sc的相互作用, 并且利用激光共聚焦方法检测到PrP和tau蛋白在CHO细胞内具有共定位的关系. 为了确定PrP与tau蛋白相互作用的部位, 构建了不同区域的PrP片段, 从而证明PrP与tau蛋白相互作用的区域位于PrP的N端序列（23～91 aa）. PrP与tau蛋白分子间相互作用的直接实验证据提示tau蛋白可能参与PrP的正常生理功能以及朊病毒病的病理过程.
- 韩俊张瑾姚海兰王小凡李锋高晨周伟张宝云董小平
- 关键词：朊蛋白蛋白相互作用
- 高通量测序技术构建新型冠状病毒感染儿童T细胞受体β链免疫组库
- 2024年
- 目的构建新型冠状病毒感染儿童T细胞受体(T cell receptor,TCR)β链免疫组库,分析新冠病毒感染患儿和健康儿童TCR免疫组库差异。方法收集新冠病毒Delta变异株感染儿童和健康对照儿童全血样本各五份,RNA质检和文库构建后,进行高通量测序,分析新冠病毒感染患儿和健康儿童TCR免疫组库克隆扩增和多样性指数的差异,统计TCRβ的VJ基因的使用频率,采用非配对T检验统计方法分析。结果成功利用高通量测序技术构建新冠病毒感染儿童TCRβ免疫组库,与健康儿童相比,新冠病毒感染儿童的TCR免疫组库多样性指数(9.78±1.23)显著低于健康儿童(13.40±2.12)(P<0.05),TCR克隆扩增指数(0.18±0.07)显著高于健康儿童(0.06±0.06)(P<0.05)。针对TCRβ免疫组库VJ基因使用频率初步比较发现,在新冠病毒感染儿童中,最常见的V基因和J基因分别是TRBV28和TRBJ2-1。结论利用高通量测序技术构建新冠病毒感染儿童TCRβ免疫组库,并发现新冠病毒感染儿童特征性的TCRβ免疫组库,阐述新冠病毒感染的T细胞免疫组库特征,对其他病毒感染后快速TCRβ免疫组库的构建具有重要参考意义。
- 易小钰何峰冯淼肖宗慧姚海兰
- 关键词：高通量测序新型冠状病毒儿童感染
- PrP可抑制tau介导的体外微管形成作用被引量：3
- 2005年
- 目的研究朊蛋白(PRP)对微管相关蛋白(TAU)介导的体外微管形成的影响。方法我们从兔脑组织中纯化出微管蛋白,并纯化出原核表达的TAU和PRP蛋白。利用电子显微镜技术显示微管蛋白的聚集、TAU对微管蛋白的聚集的影响,及PRP对TAU介导的微管蛋白形成微管的影响。通过GST PULL DOWN实验研究TAU与微管蛋白的相互作用,PRP对TAU与微管蛋白相互作用的影响。结果电子显微镜负染显示纯化的微管蛋白在一定的实验条件下可聚集形成直径为25 NM的微管结构。在反应体系中加入TAU后微管样结构的形成明显增加,而加入PRP后可显著地抑制TAU对微管结构形成的促进作用。重组TAU能与提取的天然微管蛋白在体外结合,而PRP可明显地抑制TAU与微管蛋白的结合作用,并呈现剂量依赖关系。结论 TAU蛋白可促进微管蛋白形成微管结构,而PRP可通过与TAU的相互作用抑制微管的形成。
- 韩俊王小凡姚海兰高晨李锋张宝云姜慧英董小平
- 关键词：朊蛋白微管蛋白微管
- 干扰Itk表达抑制CVB3感染小鼠的炎症反应
- 2012年
- 目的研究在病毒性心肌炎小鼠模型上敲减Itk蛋白的表达对小鼠炎症反应的影响。方法BALB／c小鼠尾静脉注射表达Itk-shRNA的质粒后感染CVB3，第4天后观察Itk基因的抑制情况、小鼠存活率，PBMC增殖率及部分炎症性细胞因子的分泌水平。结果Itk．shRNA转染至小鼠体内后脾细胞中Itk基因的mRNA水平与空白对照组及转染shRNAnon的对照组相比，敲减率约40％（P〈0．05）。与转染shRNAnon组相比，Itk-shRNA组中Itk基因表达的抑制导致小鼠PBMC增殖活性降低约41％，小鼠的存活率提高（P〈0．05）。Itk—shRNA组血清中细胞因子水平降低。结论抑制Itk表达能有效降低小鼠PBMC的增殖，同时减少炎症相关细胞因子的分泌，提高小鼠的存活率。
- 姚海兰韩继生何峰肖宗慧刘哲伟
- 关键词：蛋白质酪氨酸激酶RNA心肌炎
- 重症肺炎支原体肺炎患儿血清E-选择素和P-选择素水平及临床意义被引量：16
- 2020年
- 目的探讨血清E-选择素和P-选择素在重症肺炎支原体肺炎(MPP)发病机制中的作用,并评估其对重症MPP的早期临床识别价值。方法收集2017年12月至2018年10月首都儿科研究所附属儿童医院呼吸科病房收治的87例MPP患儿的临床资料。根据病情严重程度将入组患儿分为轻症组和重症组。轻症组37例,其中男20例,女17例;年龄(7.62±2.02)岁。重症组50例,其中男17例,女33例;年龄(6.97±2.41)岁。测定2组患儿血清E-选择素和P-选择素水平,对2组患儿血清E-选择素、P-选择素和相关炎症反应指标进行比较,并与重症MPP行相关性和受试者工作特征曲线(ROC)分析。结果与轻症组比较,重症组患儿住院时间[(8.46±2.53)d比(5.19±1.20)d,P<0.001]、C反应蛋白(CRP)水平[(23.05±37.05)mg/L比(15.06±13.79)mg/L,P=0.001]、乳酸脱氢酶(LDH)水平[(342.50±186.00)U/L比(284.44±64.82)U/L,P<0.001]、降钙素原(PCT)水平[(0.19±0.26)μg/L比(0.15±0.14)μg/L,P=0.012]、铁蛋白(SF)[(197.33±429.43)μg/L比(124.60±66.30)μg/L,P<0.001]、D-二聚体[(539.00±576.00)μg/L比(226.00±170.50)μg/L,P<0.001]、E-选择素[(2.36±4.22)μg/L比(0.86±0.20)μg/L,P<0.001]和P-选择素水平[(4.15±4.40)μg/L比(1.72±1.22)μg/L,P<0.001]均明显增高,差异均有统计学意义。2组白细胞(WBC)、红细胞沉降率(ESR)比较差异均无统计学意义。CRP、LDH、SF、D-二聚体、E-选择素、P-选择素与重症MPP相关(均P<0.05),而WBC、PCT、ESR与重症MPP无相关性。CRP、LDH、SF、D-二聚体、E-选择素、P-选择素的ROC曲线下面积均>0.5,其中,E-选择素的曲线下面积最大,P-选择素次之,均>0.8。结论重症MPP患儿可能存在机体过度炎症反应,E-选择素和P-选择素在该过程中可能起重要作用,且对重症MPP早期识别有较好提示价值。
- 卢琳朱春梅姚海兰
- 关键词：重症肺炎支原体肺炎E-选择素P-选择素过度炎症反应儿童
- 心肌特异性microRNA修饰型CVB3病毒诱导小鼠免疫保护作用的研究
- 2016年
- 利用基因组中含肌肉特异性miRNA互补序列的修饰型CVB3病毒感染小鼠,研究修饰型病毒在小鼠体内的复制状况以及诱导小鼠免疫保护作用的能力。前期我们在CVB3m株病毒基因组中插入miRNA-133和miRNA-206的互补序列获得修饰型CVB3病毒,命名为CVB-3*T。以对照组(CVB-CON)和紫外灭活野生型CVB3m株病毒组(UV-CVB3-WT)作为对照,测定各组病毒对小鼠的LD50剂量、CVB-3*T对小鼠的致死率、感染小鼠心脏和胰腺的病毒滴度以及心脏病理损伤情况,并检测小鼠血清中炎性细胞因子及中和抗体表达水平以及免疫后小鼠抗病毒能力。结果显示,CVB-3*T对小鼠的LD50明显高于对照组;以相同剂量病毒感染小鼠,CVB-3*T可以明显改善小鼠的生存率,心肌部位的病毒量较对照组明显降低,心肌处病理损伤减轻,而胰腺部位的病毒滴度无明显改变;CVB-3*T组小鼠血清中IFN-γ和TNF-α的含量较UV-CVB3-WT组明显升高,IL-4含量无差异;免疫后,CVB-3*T可诱发机体产生高效价抗CVB3中和抗体,可提高小鼠抵抗病毒再次感染的能力。修饰型CVB3病毒感染可以降低病毒对心肌的亲嗜性,激发小鼠抗病毒免疫,还可以诱导小鼠产生抵抗病毒再次感染的能力。本研究为探索制备CVB3疫苗新途径提供了实验证据。
- 何峰肖宗慧刘卓姚海兰冯淼刘哲伟
- 关键词：CVB3小鼠中和抗体
- 辅助性T淋巴细胞22和白细胞介素-22在幼年特发性关节炎中的表达及与炎性因子水平的相关性被引量：1
- 2020年
- 目的探讨幼年特发性关节炎(JIA)患儿外周血中辅助性T淋巴细胞(Th)22及其功能分子白细胞介素(IL)-22的表达水平,分析其与JIA相关炎性因子水平的相关性。方法选取2018年11月至2019年12月在首都儿科研究所附属儿童医院风湿免疫科住院的JIA患儿30例为JIA组,选取同期来首都儿科研究所附属儿童医院体检的同年龄健康儿童12例为健康对照组。采用流式细胞术检测2组研究对象外周血中Th22细胞比例,酶联免疫吸附实验检测血浆中细胞因子IL-22、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-17、IL-10的表达水平。比较JIA组和对照组Th22细胞比例和IL-22表达水平的差异,对Th22细胞比例和IL-22表达水平与炎性因子IL-6、TNF-α、IL-17、IL-10水平进行相关性分析。结果 JIA组外周血中Th22细胞比例[(0.94±0.26)%]明显高于对照组[(0.46±0.29)%],差异有统计学意义(t=2.227,P<0.05);JIA组血浆中IL-22水平[(185.2±11.93) ng/L]显著高于健康对照组[(114.7±6.29) ng/L],差异有统计学意义(t=3.632,P<0.001)。JIA组Th22细胞比例与血浆IL-6(r=0.501,P<0.01)、IL-17(r=0.686,P<0.001)、IL-10(r=0.609,P<0.001)水平均呈正相关,血浆IL-22水平与IL-6(r=0.573,P<0.01)、IL-17(r=0.445,P<0.01)、IL-10(r=0.284,P<0.001)水平均呈正相关,JIA组Th22细胞比例及血浆IL-22水平与血浆TNF-α水平均无明显相关性。结论 JIA患儿外周血中Th22细胞比例及其功能分子IL-22水平显著增高,与炎性因子具有一定相关性,可能参与了JIA疾病的发生和进展。
- 冯淼朱佳何峰肖宗慧姚海兰
- 关键词：幼年特发性关节炎TH22细胞白细胞介素-22炎性因子
