周泽扬 作品数:331 被引量:1,387 H指数:21 供职机构: 西南大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 重庆市自然科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 文化科学 轻工技术与工程 更多>>
家蚕微孢子虫孢原质与家蚕细胞表面互作蛋白质组的鉴定分析 2024年 微孢子虫(Microsporidia)是一类专性细胞内寄生的单细胞真核微生物,通过极管弹出孢原质的方式进行感染,因此孢原质是微孢子虫完成感染的重要中间形态,但孢原质与宿主细胞的相互作用尚缺乏深入研究。本研究利用生物素-链霉亲和素系统,对介导家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)孢原质与家蚕胚胎细胞(BmE)粘附的表面蛋白质组进行了分离和质谱鉴定分析,获得了32个家蚕微孢子虫孢原质表面蛋白和188个家蚕细胞表面蛋白。对蛋白质进行功能和通路富集分析发现,所鉴定的家蚕细胞表面互作蛋白主要参与膜物质运输,可能在介导孢原质侵入过程中发挥作用。通过对蛋白质进行亚细胞定位分析,筛选了6个家蚕微孢子虫蛋白和10个家蚕细胞表面蛋白作为候选互作分子。利用酵母双杂交实验对候选互作蛋白进行验证分析发现,家蚕微孢子虫的Nb1BD、Nb4BD和Nb6BD与家蚕的Bm4AD和Bm6AD之间存在相互作用关系。本研究首次获得了介导孢原质与宿主细胞互作的表面蛋白,为深入解析家蚕微孢子虫的侵染机制提供了重要参考数据。 何雪梅 何强 韦俊宏 李春峰 潘国庆 周泽扬 李田关键词:家蚕 家蚕微孢子虫 柞蚕微孢子虫部分孢壁蛋白的分离鉴定及孢壁蛋白8的序列分析 被引量:3 2010年 研究柞蚕微孢子虫的孢壁蛋白组成和结构特点,有助于解明柞蚕微孢子虫在侵染过程中与蚕体细胞的互作机制。分别采用煮沸法和Laemmli法分离提取柞蚕微孢子虫总蛋白和孢壁蛋白,回收30kD左右的蛋白条带进行液质联用离子阱电喷雾质谱分析,获得的短肽序列经Mascot在线检索工具进行蛋白同源序列比对,共鉴定出27种具有功能注释的蛋白,有3种注释为孢壁蛋白。其中获得了与家蚕微孢子虫孢壁蛋白8(NbSWP8)高度同源的柞蚕微孢子虫孢壁蛋白8(NaSWP8)的基因全长序列。序列分析表明NaSWP8与NbSWP8的氨基酸序列相似性达到90%,且均具有特征性的肝素结合基序,二者的编码基因核苷酸序列的非同义替换率和同义替换率比值(dN/dS)明显小于1,表明孢壁蛋白8基因在2种蚕类微孢子虫中受到纯化选择压力的作用,基因的功能相对稳定。 张玺 许金山 张小燕 周泽扬关键词:柞蚕微孢子虫 孢壁蛋白 质谱鉴定 病原诱导表达的BmUGT3抑制家蚕微孢子虫增殖 2024年 尿苷二磷酸糖基转移酶(uridine diphosphate-glucosyltransferase, UGT)是生物体广泛存在的一种酶,属于糖基转移酶超级家族,在生物体内的代谢及解毒等过程中起着至关重要的作用。我们前期的研究结果表明,家蚕尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶3(BmUGT3)可以被家蚕微孢子虫诱导表达。本研究通过CRISPR/Cas9敲除BmUGT3后显著提高了家蚕微孢子虫在BmE细胞中的增殖;当在BmE细胞中过表达BmUGT3后,则显著抑制了家蚕微孢子虫的增殖;在家蚕个体中过表达BmUGT3也能显著抑制病原的增殖,低剂量感染组的存活率要高于对照组。以上研究结果表明BmUGT3在家蚕微孢子虫增殖过程中发挥作用,为进一步阐明BmUGT的生物学功能奠定了基础。 于滨 杨秋华 韦俊宏 潘国庆 周泽扬 李春峰关键词:家蚕 家蚕微孢子虫 抑制增殖 筛选家蚕分子标记的有效方法—SADF法 被引量:3 1999年 从家蚕品种 C108 和大造后部丝腺提取的基因组 D N A 用 Pst Ⅰ酶解后与自行设计的人工接头相连,并用与人工接头序列相匹配的选择性引物进行选择性 P C R 扩增( Selective Am plification) 。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测显示,用 S A D F 法在两品种中能检测到稳定的 D N A 多态性片段,表明此方法可用于分子标记的筛选。经研究发现:当 P C R 反应体系中 Mg2 + 为15 m m ol/ L,d N T Ps 为200μm ol/ L,引物为1μm ol/ L 时可得到较好的结果;在热循环过程中,以56 ℃退火为宜;扩增反应对模板 D N A 质的要求远胜于量。 何宁佳 鲁成 周泽扬 向仲怀关键词:家蚕 分子标记 5株家蚕微孢子虫单克隆抗体的抗原鉴定 2024年 家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)是引起家蚕微粒子病的病原。通过检测筛查带病蚕蛾或蚕卵以减少家蚕微孢子虫垂直传播对蚕种生产和家蚕养殖造成的危害,是防控微粒子病的主要方法。孢壁蛋白是家蚕微孢子虫孢壁结构组成的重要成分,且具有种属特异性,是病原检测的主要靶标。本研究选取家蚕微孢子虫孢子发芽液制备的5株单克隆抗体,采用孢子体外发芽、孢壁蛋白原核表达及免疫印迹分析等方法,明确了5株单抗的抗原蛋白均为高丰度的孢壁蛋白NbSWP1。研究结果为利用NbSWP1作为免疫学检测靶标进行快速检测试纸条的研制提供了数据基础。 马成 杨东林 陈洁 陈洁 潘国庆 李田关键词:家蚕微孢子虫 单克隆抗体 家蚕微孢子虫类枯草杆菌蛋白酶Nbslp2的保守性及转录活性分析 被引量:1 2017年 为研究家蚕微孢子虫类枯草杆菌蛋白酶Nbslp2的保守性及转录活性,采用生物信息学相关软件对微孢子虫类枯草杆菌蛋白酶slp2基因共线性、多重序列及系统进化进行比对分析,并通过Western blot分析Nbslp2在家蚕微孢子虫、柞蚕微孢子虫及纳卡变形微孢子虫中的表达特征,以验证其保守性;进一步以感染家蚕微孢子虫不同天数的家蚕中肠组织为材料,利用RT-PCR检测Nbslp2的转录活性。共线性、多重序列比对及系统进化分析发现,Nbslp2在微孢子虫基因组中的位置较保守,Western blot结果显示Nbslp2抗体在柞蚕微孢子虫总蛋白中杂交出2条带,而在纳卡变形微孢子虫没有杂交条带,说明Nbslp2相对保守,并且可将Nbslp2作为区分柞蚕微孢子虫和纳卡变形微孢子虫的靶标;RT-PCR结果显示Nbslp2在感染家蚕微孢子虫后72 h检测到转录活性,进一步推测Nbslp2可能在家蚕微孢子虫感染家蚕早期发挥作用,为分子水平深入研究Nbslp2的功能奠定理论基础。 马强 刘方燕 党晓群 孙厚良 李国利 熊书 潘国庆 周泽扬关键词:家蚕微孢子虫 保守性 转录活性 共线性 系统进化 RFLP技术构建家蚕现行品种DNA指纹图谱的研究 被引量:32 2000年 利用RFLP技术 ,结合应用两种酶切探针组合 ,构建了家蚕 9个现行品种的标准DNA指纹图谱 ,并论证了该方法在家蚕几种现行品种相互区别鉴定方面的可行性。 程道军 周泽扬 鲁成 向仲怀 曾华明 漆定梅 杨彪关键词:RFLP 家蚕 指纹图谱 植酸酶产生菌黑曲霉N14的诱变选育及其基因分析 被引量:6 2005年 以植酸酶产生菌黑曲霉03214为出发菌株,经紫外线和亚硝基胍诱变,获得了产酶活性较出发菌株提高了22.3%,达422IU/ml发酵液的突变菌株黑曲霉N14,其最适pH值为2.5,最适温度为50℃。通过对黑曲霉N14植酸酶phyA基因进行PCR扩增,获得了一条长约1.5kb的特异性产物。以pMD18 T为载体,构建了含有目的基因片段的重组质粒。DNA序列测定表明,目的基因片段含有植酸酶phyA基因的完整序列(GenBankAccession:AY426977),phyA基因全长1506bp,其中包含一段长102bp的内含子,编码467个氨基酸,有10个潜在的糖基化位点,5'端有一编码19个氨基酸的信号肽序列。实验结果为植酸酶基因工程菌的构建奠定了基础。 彭远义 马丽苹 李春明 刘生峰 周泽扬关键词:植酸酶 诱变 PHYA基因 家蚕微孢子虫蓖麻毒蛋白B链基因RBL463-4的克隆及在毕赤酵母中的表达 被引量:1 2010年 基于家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)基因组中发现的蓖麻毒素B链(ricin B chain)序列数据设计引物,提取感染Nb第8天的家蚕幼虫中肠组织总RNA,利用RT-PCR方法扩增出RBL463-4基因,并将其克隆进毕赤酵母表达载体pPICZα-A中,构建重组酵母表达载体pPIC-R4。重组质粒pPIC-R4经SacⅠ线性化后,电击导入毕赤酵母X33中,利用博莱霉素(zeocin)筛选获得重组酵母X33/RBL463-4。以2%甲醇诱导表达后,经SDS-PAGE、Western blot检测表达产物,结果出现25kD和20kD2种蛋白,其中25kD蛋白与预测融合蛋白大小一致,表明获得了RBL463-4的融合蛋白。研究结果为进一步探究RBL463-4蛋白在家蚕微孢子虫侵染宿主过程中的功能作用奠定了基础。 李能章 潘国庆 李田 贾立丽 邓远洪 周泽扬关键词:家蚕微孢子虫 毕赤酵母表达 免疫印迹法 家蚕C-型凝集素11基因BmCTL11的克隆及表达分析 被引量:1 2016年 昆虫的C-型凝集素参与先天免疫系统中细胞间的相互作用,家蚕C-型凝集素11(C-type lectins,CTL11)基因BmCTL11是经家蚕微孢子虫(Nb)感染诱导后在蚕体内持续高量表达的基因。用生物信息学方法分析BmCTL11基因编码有307个氨基酸的多肽,预测分子质量34.51 kD,等电点4.69,含2个串联的典型C-型凝集素糖识别结构域,与烟草天蛾的IML-1蛋白进化距离最近。RT-PCR检测BmCTL11基因在家蚕幼虫时期的转录水平较高,并在多个组织有转录。将灭活的家蚕病原细菌、真菌、微孢子虫、病毒等注射家蚕5龄幼虫后的24 h内,qRT-PCR检测BmCTL11基因在幼虫脂肪体和中肠组织内的转录水平均发生上调,说明该基因能够被多种病原微生物诱导。以家蚕5龄第3天幼虫脂肪体c DNA为模板克隆了BmCTL11基因,连接到p ET-32a载体,诱导表达后将纯化的融合蛋白免疫昆明鼠制备出效价为1∶102 400的BmCTL11多克隆抗体。Western blot分析结果显示,BmCTL11蛋白可能以二聚体形式主要分布于家蚕脂肪体、血浆、中肠、表皮等组织中,推测BmCTL11在家蚕识别病原微生物并介导引发进一步的先天免疫反应过程中有重要的作用。 季小存 李春峰 孙滨 郑容 李致宏 陈洁 龙梦娴 李田 潘国庆 周泽扬关键词:家蚕 基因克隆 表达谱 多克隆抗体