卢惠霞
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 供职机构：东南大学附属中大医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人心肌肌钙蛋白I化学发光免疫分析方法的建立被引量：3
- 2004年
- 目的 建立检测人心肌肌钙蛋白I(cTnI)化学发光免疫分析方法。方法 用重组cTnI免疫新西兰兔获得抗体 ,经DEAE 2 3层析和 (NH4) 2 SO4沉淀纯化后 ,用碳化二亚胺 (EDC)法标记辣根过氧化物酶 ,SephadexG 2 0 0纯化。优化鲁米诺 H2 O2 肉桂酸发光体系 ,建立了cTnI化学发光免疫分析法。用该法检测 138例正常人及病人血清标本 ,确定正常值参考范围 ,并与ELISA法比较。结果 所得抗体的滴度为 1∶80 0 0。优化后的发光体系为 :鲁米诺 (4 .5mmol/L) ,H2 O2 (7.5mmol/L) ,四苯硼钠 (0 .8mmol/L) ,肉桂酸 (0 .4mmol/L) ,比单独用肉桂酸或四苯硼钠作增强剂灵敏度分别增加了 1.19和 1.0 5倍。本法检测灵敏度为0 .2ng/ml,线性范围为 0 .4～ 5 0ng/ml,批内CV平均 9.0 % ,批间CV平均 11.8% ,回收率为 10 4 .2 %。Hb浓度在 0～ 5 0nmol/L ,T Bil在 0～ 15 μmol/L ,TG在 0～ 2 .0mmol/L对测定结果无影响。与ELISA比较 ,两法结果一致 (P >0 0 5 ) ,相关系数r=0 .985 2(P <0 .0 1)。用BioCheck标准品为校正物 ,确定临床诊断参考范围为 <2 .12ng/ml,诊断符合率为 96 .2 %。结论 建立的cTnI化学发光免疫分析法可常规用于临床检验。
- 吴国球劳心珍孙宏伟黄立新张粉梅钱娟英卢惠霞
- 关键词：化学发光免疫分析法肉桂酸滴度诊断符合率鲁米诺
- 结缔组织生长因子的分泌表达及ELISA检测方法的建立
- 纤维化疾病是严重威胁人类健康的疾病之一,它能引起肺,肝,肾等主要脏器功能的丧失,并最终导致死亡.研究证明,转化生长因子(transforming growth factor TGF)β是导致纤维化最重要的细胞因子之一,它...
- 吴国球刘乃丰孙宏伟黄立新张粉梅钱娟英卢惠霞
- 关键词：结缔组织生长因子分泌表达ELISA检测纤维化疾病转化生长因子
- 文献传递
- 结缔组织生长因子的分泌表达及ELISA检测法的建立被引量：4
- 2005年
- 目的 制备结缔组织生长因子 (CTGF)抗原 ,建立ELISA检测方法。方法 从血管内皮细胞中提取总RNA ,逆转录合成cDNA ,设计特异性引物 ,通过PCR方法扩增CTGFC区 2 4 2～ 349位氨基酸基因 ,插入噬菌体包膜蛋白基因Ⅲ的上游 ,制备CTGF融合蛋白。用纯化后的融合蛋白免疫家兔 ,获得抗体 ,抗体纯化后标记HRP ,建立ELISA。结果 成功克隆CTGFC区基因 ,插入表达载体经IPTG诱导后获得分子量为 2 5 0 0 0的融合蛋白 ,免疫学检测证实为CTGF。所得抗体用HRP标记。建立的ELISA法检测灵敏度为 2ng/ml,批内及批间平均变异系数为 5 .4 %和 7.5 % ,平均回收率为 10 4 .2 %。血红蛋白浓度在 0～ 5 0mmol/L ,总胆红素在 0～ 15 0 μmol/L ,三酰甘油在 0～ 2 .0mmol/L对测定结果无影响。 2例慢性乙型肝炎病人血标本 ,5例糖尿病肾病、3例肾功能衰竭、3例慢性肾炎尿标本为阳性。结论 CTGF可以作为判断纤维化发生、进展及预后的一个新指标。CTGFELISA检测方法的成功建立 。
- 刘乃丰吴国球孙宏伟黄立新张粉梅钱娟英卢惠霞
- 关键词：CTGF结缔组织生长因子ELISA检测HRP分泌表达IPTG
- 用pIII及pVIII噬菌体展示系统展示抗原和抗原表位的免疫原性的研究被引量：2
- 2004年
- 目的探索用pIII和pVIII噬菌体展示系统展示抗原和抗原表位的免疫源性以及用噬菌体展示颗粒为免疫原制备抗体的可能性。方法从人心肌组织中获得cTnI基因,突变后克隆入pMDT18载体及pFD5pIII型噬菌体展示载体。合成两条互补寡聚核苷酸单链,退火后变成编码cTnI95～108位氨基酸的双链,与PC89pVIII型噬菌体展示载体连接。含有cTnI及其抗原表位基因的重组质粒转化辅助噬菌体敏感的XL1Blue细胞,用VCSM13超感染获得展示有cTnI及其抗原表位的噬菌体颗粒,测定其表达量。并以此为免疫源免疫新西兰白兔获得抗体,用ELISA方法测定抗体滴度。结果cTnI及其抗原表位在噬菌体颗粒表面得到成功展示,展示量分别为5ng/ml和96ng/ml。免疫后得到的抗体滴度为1∶300和1∶1800。结论制备具有一定空间结构的大分子蛋白的抗体时,可用pIII噬菌体展示系统,制备小分子肽线性表位的抗体时,pVIII展示系统具有独特的优势。
- 吴国球劳心珍孙宏伟黄立新张粉梅钱娟英卢惠霞沈子龙
